Штамм бактерий viвriо сноlеrае еlтоr источник умеренного фага xi серотипа xii гетероиммунной категории

 

СОЮЗ СОЕЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕ 1УЬЛИН.8}} л}232}} (51) 5 С 2 !! 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н A ВТОРСИОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (46) 5 03. 9 Пк}}., 10

ГОсудАРстВенный нОмитет по изоеРетенюм и отиРьтичм

ПРИ ГИНТ СССГ (21) 4718624/13 (22) 11.07.89 (71) Всесок}зный научно-исследовательский противочумный институт нМикроб" и Ростовский научно-исследовательский противо «ум«}ый институт (72) Т.A.Кудрякова, Л.Л.Македонова, Н,tl,Остроум} на, Г.И.Коровкина, B.П.!!ороз и 8.}1, Пегтярев (53) 6!6.038 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР !! 822543, кл. С !2 N 7/00, 1979 (непублик, ) .

Авторское с«}идетельство СССР !! 761560, кл. С 12 К 7/00, 1978. (54) !ТЛ)!!1 БЛКТЕР!1}«V!BRIO СНОТ.ERAE

E1.TOR — ИСТОЧ!!ИК УМЕРГПНОГО ФАГА ХТ

СЕРОТИПА XII ГГТЕРОИММУ!!НОЙ КАТЕГОРИИ (57) Изобретение относится к микробиологии, в частности к лябораторной диагностике. Целью изобретения является дикий лизогенный неэпидемический штамм

9966 Vibrio сЬо1егяе el!.or,.несущий фаг ранее никем не описанной XII гетероиммунной категории 9966, отличающийся от фягов I 11, Illy IVy V Vly VII, VIII, 1Х, Х, XI гетероиммунных категорий спецификой иммунитета, соз. даваемого при лизогенизации, и пригодной для усовершенствования системы те1т-культур, применяемой в способе

Кэобретеиие относится к микробиологии, в частности к лабораторной дна гHoc THKp..

Целью изобрс тения является дикий лизогенный не мл}лемичесхий штамм ф 4 фаготипирования холернь}х вибрионов классического и эльтор биотипов. штамм 9966 получен иэ воды открытого водоема. При культивировании в бульоне Мартена (рН 7, 6+0, 2) при (37+1) С в течение (20 .2) ч штамм 9966 продуцирует умеренный фаг 9966, При лиэогениэации реципиентного штамма Vib.rio choleree eltor 570 фаг 9966 создает специфический иммунитет. Клетки, ли,or".}}íûe по фягу 9966, у той пивы к гомо}}ммун}«}}м фагам XII гет< } иммунной категории и чувстни. ел .н к гетероиммунпым фа гам 1-ХТ. кате го, }и. Субкультуру 570/99С6, л . з ге ни;. ю по фагу

9966, включ;,ют в систему тест -культур, несущих гет =роимм. }}г,}е фагн одиннадцати категорий и .ол ченнык путем лизогенизяцин рецип}«ентль}х штаммов эльтор 485 и 570, которую используют для прямого фаготипирования с целью дифференциации колер .лх вибрионол эльтор различной эпидемической значимости(эпицемические и незп«демические). !!тамм 9966 обладает типичны«}и для вида Vibrio cholerae культурально-морфологическими и физиологическими признаками, относится серологически к серовару Огавя. Фаг 9966 относится к XI серотипу холерных фагов III морфологи1}еской группы.

1 табл.

9966 Vibrio cholpr е! ог, несущий фаг ранее никем не о}}ися}}}п и XII гетероиммунной катег рии 9966, отличающийся от фагов 1, 1.1, 111, 1Ч, Ч, VI

VII, ЧИI, IX, Л и 1!! гетер«}имму}}ных

1623205 категорий спецификой иммунитета, создаваемого при лизогециэации, и пригодцой1 для усовершенствования системы тест-культур, применяемой в способе фаготипирования холерных вибрионов классического и эльтор биотипа, С помощью его искусственной лизогенизации реципиецтного шта11ма Vibrio

cholerae eltor 570 получают новую тест-культуру 570/9966, которую включают в указанную систему тест-культур, благодаря чему увеличивают процент фаготипирующих штаммов холерных вибрионов эльтор при ее использовании 1 на практике., Характеристика типа имму»ц1тета умеренного фага штам11а V.eltor 9966 приведена в таблице.

Для получения такого штамма изучено 35 штаммов вибрионов эльтор.

Полученный штамм 9966, депонированцый1 в музее живых культур Всесоюзного научно-исследовательского противочумцогЬ института "Микроб" под цо- 25 мером . 1 112(9966) по большинству морфологических и физиологических ха" рактеристик соответстнует микроорганизмам вида Vibrio cholerae.

Культурально-морфологические признаки.

Подвижные, слегк» изогнутые палочки 1,3-2,2 мкм в длину и 0,2-0,3 мкм в ширину с одним полярно расположенным жгутиком, спор и капсул це образует, грамотрицательць1.

На твердых питательных средах (arap Мартена, агар Хоттицгера pll

7,6+0,2) образуют через 18 ч выращи . вання при температуре 37+1 С круглые, диаметром 3,4+0, 1 м11 полупрозрачные колонии с голубоватым оттенком, ровньм краем, слегка уплотненным центром. lla жидких питательных средах (бульон Мартена, 1Х-цая пептонцая вода, бульон Хоттццгера рН 7,8+0,2) через 6 ч выращивания при температуре

37+1 С образует равномерную муть и нежную пленку на поверхности. физиологические признаки.

Тест на оксидазу положителен, раэ- 50 лагает до кислоты беэ газа манцозу„ глюкозу, сахароэу, маннит, це разлагает арабинозу, инозит, лактоэу, ферментирует и окисляет глюкозу в среде

Хью-Лейфсоца, ферментирует крахмал, желатииу, не образует дигидролаэу арГИНИНа, Обраэу1.т IIeКарбОКСИЛаЗЫ ЛИЭИна и овнитина, це растет При повышецной (7-107) концентрации хлорида натрия, гемолизирует эрйтроциты барана по Грейгу, агглютинирует куриные эритроциты, не чувствителен к полимиксину.

Серологические свойства.

Агглютицируется до титра холерными сыворотками 0 и агава, не агглютинируется холерными сыворотками кО и

Инаба.

Главным отличительным признаком от прототипа является способность спонтанно продуцировать умеренцый1 фаг 9966 ранее неизвестной XII гетероиммунной категории, который лизирует культуры холерных вибрионов, лизогенные по фагам I-XI категорий, при лизогениэации чувствительной культуры холерньм вибрионов 570 создает у нее иммунитет (резистецтцость) только к фагам своей иммунной категории и фагам VI иммунной категории и не создает иммунитета к фагам I-XI иммунцых категорий. Фаг

9966 используют при получении специ-фической тест-культуры 570/9966, примецяемой для прямого фаготипирования (дифференциации по умеренному фагу) холерных вибрионов биовара эльтор различной эпидемической значимости по эпидпокаэациям.

Умеренный фаг 9966 по электроннбмикроскопической структуре относится к III морфологической группе, по серологическим свойствам принадлежит к

Х1 серотипу холерцьм фагов.,На газон» индикаторного штамма Vibrio eholerae eltor 570 образует типичные колонии с мутным центром, окруженным узкой зоной неполного лиэиса 2,4+0,5 мм в диаметре.

Ра.--.1цожают штамм 9966 на бульоне и агаре Мартена рН 7,6+0,2, хранят в л11оф»1лиз ироианном состоянии.

Для получения специфической тесткультуры 570/9966 готовят фильтрат (фил» трацией через бактериологические фильтры Ф-5) бульонной культуры 18 ч роста при 37 С штамма 9966 и в количестве 1 мл соединяют с 0,2 мл бульонной культуры трехчасового роста ин дикаторного штамма 570 и 5,0 мл 0,7Х агара Мартена (расплавленцого и охлажденного до 45 С), перемешивают и о выливают на 27. агаровую пластинку в чац|ке Петри, дают застыть и инкубируо ют 18 ч при 37 С. При просмотре чашек отбирают одну типичную негативную колонию фага. Уколом платиновой иглы в

1623205 6 ров анные колонии лиэо генных по фл гу

9966 клонов штамма 570, отбор которых ведут по известному методу. центр негативной колонии забирают фагорезистентные вибрионы и переносят в пробирку с 1,0 мл бульона, из которого готовят десятикратные разведения в бульоне. Из каждого разве5 дения высевают на агаровые пластинки в чашках Петри по О,1 мп и распределяют шпателем по поверхности агара.

Через 13 ч инкубирования при 37 С на

0 поверхности агарл обнаруживают изолиФормула изобретения

Характеристика xvna иммунитета умеренного фага штамма Ч.eltor 9966

Субкуль- Лизогенна тура по фагу иммунной кате горин

I II III IV V VI VII VIII IX Х XI XII

4 1 70 222Н 132 98,х 611 893 583 6901 80 1564 9966

+ +

+ +

+ +

+ +

+ +

+ +

1 +

+ +

+ +

II +

+ +

t +

+ +

+ +

+ Ф

+ +

+ +

+ + + +

+ +

+. +

+ +

+ +

+ +

Ф +

+ +

+ + +

+ +

4 +

+ +

+ +

+.+

П р и м е ч а н и е: плюс - культура чувствительна к фагу; минус — культура резистентна к фагу.

Составитель И, Тареева

Редактор О. Стенина Техред А. Кравчук Корректор Н. Ревская

Заказ 1314 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101

570 и 485

485/41

485/70

485/222Н

485/132

485/98,х

570/611

570/893

570/503

570/6901

570/80

485/1564

570/9966

I II +

IV + +

V + +

VI + +

Чц + + чш + +

IX + +

Х + +

XI .+ +

XI I + +

Бтамм бактерий Vibrio cho 1 erae

eltor И1 112 9966 источник умеренного фага XI серотипа XII гетероиимунной категории.