Штамм вируса клещевого энцефалита для приготовления диагностических препаратов

 

Изобретение относится к вирусологии. Целью изобретения является оригинальный штамм вируса клещевого энцефалита, обладающий повышенной антигенной и иммуногенной активностью. Штамм вируса клещевого энцефалита № Каэ-20 пт (ГКВ

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (и)s С 12 N 7/00

ГОСУДАРСТВЕ ННЫ Й КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ф

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4638765/13 (22) 18.01.89 (46) 15,03.91. Бюл. М 10 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней и Институт вирусологии им. Д.И.Ивановского (72) Д.К.Львов, Н.И.Дробищенко, T.Â.Êèðþшенко, С.К,Каримов и Н.П.Архипов (53) 576.8.094.29(088.8) (56) Гайдамович С.Я., Львова А,И., Обухова В.Р, и др. Вопросы вирусологии, 1969. М 6, с.

676-683.

Фадеева Л.Л., Пырикова А.П.. Яковлева Л.С.

Изучение биологических свойств музейных штаммов антроподонозных вирусов. Клещевой энцефалит, Минск, 1965, с. 12-21. (54) ШТАММ ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТАДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ (57) Изобретение относится к вирусологии.

Целью изобретения является оригинальный штамм вируса клещевого энцефалита, обладающий повышенной антигенной и иммуногенной активностью, Штамм вируса клещевого энцефалита М Каэ-20 пт (ГКВ

871) выделен от птицы галки. Штамм прошел 6 пассажей, инкубационный период соИзобретение относится к вирусологии.

Штамм вируса клещевого энцефалита

М Каз-20 пт хранится в лаборатории трансмиссивных вирусных инфекций НИИ эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Минздрава Казахской CCP u в государственной коллекции вирусов Института вирусологии им. Д.И.Ивановското

АМН СССР под номером 871.

„„ЯЦ„„1634711 А1 ставляет 4 дня на новорожденных белых мышах. Инфекционный титр достигает 7,5

IgLD 50/0,02 мл. Взаимодействие штамма с культурой клеток СПЭВ происходит в форме острой инфекции, сопровождается дегенерацией клеток, титр равен 7,2 Ig ТЦД

50/мл. Штамм обладает гемагглютинирующей способностью. Эритроциты гуся агглютинируют в широкой зоне рН вЂ” от 6,0 до 7,0 при оптимальном рН 6,2. Титр гемагглютининов колеблется от 1:2560 до 1:5120.

Штамм высоко чувствителен к эфиру, хлороформу и дезоксихалату натрия. Титр снижается при этом на 4 Ig LD 50/0,02 мл. Штамм hk

Каз — 20 пт показывает антигенное родство с вирусом клещевого энцефалита штаммом

"Софьин", но отличается высокой антигенной и иммуногенной активностью. Штамм используется для приготовления специфических диагностических препаратов (антигена, иммунной асцитной жидкости), которые употребляются при идентификации вновь выделенных штаммов вируса клещевого энцефалита, повышения диагностической эффективности лабораторных исследований больных клещевым энцефалитом и изучения иммунологической структуры населения, домашних и диких животных. 4 табл.

Цель изобретения — оригинальный штамм вируса клещевого энцефалита, обладающий повышенной антигенной и иммуногенной активностью.

При идентификации штамма М Каз-20 пт по реакции связывания комплемента и по реакции торможения гемагглютинации с набором иммунных асцитных жидкостей к вирусам, относящимся к различным группам, 1634711

15

35

45

55 установлена его антигенная связь со штаммом вирусз клещевого энцефалита "Софьин" (табл. 1 и 2), Выделенный штамм вируса клещевого энцефалита N. Каз-20 пт имеет следующую морфологическую и физиологическую характеристику.

Морфологические признаки. При фильтрации вирусосодержащей суспензии через миллипоровые фильтры размером 100 и

50 нм снижения инфекционного титра не наблюдается, Обработка вирусодержащей суспензии дезоксихолатом натрия и хлороформом приводит к снижению титра вируса на 4lg. Это свидетельствует о том, что штамм вируса имеет размеры в пределах до

%0 нм и содержит липопротеиновую оболочку. При обработке БУДРом титр вируса не снижается, что является- доказательством принадлежности его к РНК-содержащим вирусам.

На основании морфологических, морфогенетическим и антигенных признаков изолированный штамм вируса относят к семейству Тогавириде, роду Флявивирус, антигенной группе В, штамму вируса клещевого энцефалита.

Культуральные свойства. Взаимодействие штамма вируса клещевого энцефалита

М Каз-20 пт с культурой клеток СПЭВ происходит в форме острой инфекции, сопровождается дегенерацией клеток, титр равен

7,2 Ig ТЦД 50/мл, с куриными и человеческими фибробластами — в латентной форме, без

ЦПД.

Адаптационные свойства. Исходный штамм вируса клещевого энцефалита

% Каэ-20 пт выделен от птицы галки в предгорьях Заилийского Алатау и адаптирован к организму 1-2-дневных белых мышей, прошел 6 пассажей. Инкубационный период составляет 9 при первичном заражении и сокращается до 3-4 дней в последующих пассажах. Инфекционный титр штамма вируса для новорожденных белых мышей при мозговом заражении достигает 7,5 Ig LD

50/0,02 мл.

Антигенные свойства. Штамм обладает гемагглютинирующей способностью. Э ритроциты гуся агглютинируют в широкой зоне рН вЂ” от 6,0 до 7,0 при оптимальном рН 6,2.

Титр гемагглютионов колеблется от 1;2560 до 1:5120. При серологической идентификации в PCK и РТГА штамм — Каэ-20 пт показывает антигенное родство со штаммом вируса клещевого энцефалита "Софьин", но отличается высокой антигенной и иммуногенной активностью.

Штамм М Каз-20 пт при иммунизации лабораторных животных вызывает образование комплементосвязывающих, антигемагглютинирующих, преципитирующих и вируснейтрализующих антител.

У больных людей с остролихорадочными заболеваниями в сыворотках крови также выявляются комплементосвязывающие, антигемагглютинирующие, преципитирующие и вируснейтрализующие антитела к штамму М Каз-20 пт, П .тс генные свойства штамма для животных, Вызывает смертельную инфекцию у новорожденных и взрослых белых мышей при внутримозговом заражении, Инфекционные титры достигают 7,5 Ig 1 О 50/0,02 мл и 6,8 Ig LD 50/0,03 соответственно.

Патогенные свойства штамма вируса клещевого энцефалита М Каз-20 пт для людей. Штамм является патогенным и для чело века. При обследовании остролихорадочных больных роль его а инфекционной патологии установлена в 13 случаях. Данные подтверждены лабораторными исследованиями с применением диагностикумов, приготовленных из штамма М

Каз-20 пт.

Как показывают результаты в PCK u

РТГА с антигеном штамма Каэ-20 пт, специфические антитела в сыворотках крови больных выявляются в 2,7 и 1,4 раза соответственно чаще по сравнению с антигеном из эталонного штамма клещевого энцефалита "Софьин" и в более высоких титрах.

Диагностический препарат антиген из штамма М Каз-20 пт получают путем внутримозгового заражения новорожденных белых мышей. Из мозга животных, взятых на высоте клинических проявлений заболевания, готовят антиген путем сахарозо-ацетоновой экстракции.

Диагностическую иммунную асцитную жидкость готовят по известному методу

С.Я. Га йдамович.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Материал для исследования — сыворотки крови от больных людей с подозрением на арбовирусные инфекции, взятые в начальном периоде заболевания и реконвалесценции, Проводят постановку серологических реакций — PCK и РТГА с использованием сахарозо-ацетонового антигена. приготовленного иэ штамма вируса клещевого энцефалита М Каз-20 пт. Реакцию оставляют по общепринятому способу — микрометодом на аппарате Такачи, Результаты исследования сыворотки больного приведены в табл. 3.

Таким образом, использование предлагаемого штамма для приготовления диагностических препаратов способствовало

1634711

Таблица!

П р и м е ч а н и е. числитель — обратная величина титра антител, знаменатель — обратная величина титра антигена.

Таблица2

П р и м е ч а н и е. " Обратная величина титра антител.

ТаблицаЗ

Таблица4 повышению диагностической эффективности лабораторных исследований больных клещевым энцефалитом.

Пример 2. Материал для исследования — 107,-ные суспенэии из клещей, собранных в природных очагах клещевого энцефалита. Проводят постановку РНГА с эритроцитарными диагностикумами, приготовленными на основе иммунной асцитной жидкости из предлагаемого штамма вируса

Каз-20 пт и эталонного "Софьин". PH ГА ставят по общепринятой методике (табл. 4).

Как показывают результаты исследования, препараты, приготовленные из предлагаемого штамма Каэ-20 пт, позволяют в короткий срок и с максимальной достовер5 ностью провести идентификацию вируса клещевого энцефалита в клещах по сравнению с препаратами из эталонного штамма

"Софьин".

Формула изобретени.

10 Штамм вируса клещевого энцефалита

ГКВ ЛЬ 871 для приготовления диагностических препаратов.