Способ определения в-лимфоцитов крови человека

 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано при оценке иммунологического статуса человека, а также при проведении массовых иммунологических обследований. Цель изобретения - сокращение срока анализа и упрощение способа. У обследуемых проводят забор крови, выделение лимфоцитов, инкубацию их с частицами полистирольного латекса с диаметром частиц 2,2 мкм в концентрации 6,0 - 7,0<SP POS="POST">.</SP>10<SP POS="POST">7</SP>/мл, затем препараты высушивают, окрашивают по Лейшману и подсчитывают число розеткообразующих клеток на 100 лимфоцитов и по их количеству определяют B - лимфоциты человека. В сравнении с прототипом сокращено в 2 раза время анализа. В результате использования полистирольного латекса упрощена процедура анализа путем исключения этапов фиксации и отмывки и, кроме того, частицы полистирольного латекса дают одинаковые результаты независимо от сроков их хранения. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (51) 4 С 01 11 33 53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

IlO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

0flHGAHNE ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21 ) 4 332840/28-14 (22) 03.12.87 (46) 07.12.89. Бюл. Л 45 (71) 1-й Ленинградский медицинский институт им. акад. И.П.Павлова (72) А.А.Тотолян и Н.В.Шамкова (53) 61 5. 375 (088 . 8) (56) Лебедев К.А., Понякина И.Д. и др. Лабораторное дело, — 1987, 1(-7, с . 5 32-5 36. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ В-ЛИМФОЦИТОВ

КРОВИ ЧЕЛОВЕКА (57) Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано при оценке иммунологического статуса человека, а также при проведении массовых иммунологических обследований. Пель иэобИзобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может быть использовано при оценке иммунного статуса человека, а также при проведении массовых иммунологических обследований.

Целью изобретения является сокращение времени анализа и упрощение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

В каждую лунку микрокамеры для иммунологических реакций (планшет

Терасаки) вносят по 0,005 мл лейкоцитов в концентрации 1,0-1,5«10 /мл

6 и 0,005 мл суспензии частиц полистирольного латекса с диаметром частиц

2 ретения — сокращение срока анализа и упрощение способа. У обследуемых проводят забор крови, выделение лимфоци-, тов, инкубацию их с частицами полистирольного латекса с диаметром частиц 2,2 мкм в концентрации 6,0-7,0» т

« l 0 /мл, затем препараты высушивают, окрашивают по Лейшману и подсчитывают число роэеткообразующих кле.ток на

100 лимфоцитов и по их количеству определяют В-лимфоциты человека. В сравнении с прототипом сокращено в

2 раза время анализа. В результате использования полистирольного латекса упрощена процедура анализа путем исключения этапов фиксации и отмывки и, кроме того, частицы полистирольного латекса дают одинаковые результаты независимо от сроков их хранения.

2 табл, 2,2 мкм в концентрации 6,0-7,0 107/мл..

Камеры центрифугируют 5 мин при

1000 об/мин, инкубируют 30 мин при

4 С, фильтровальной бумагой удаляют надосадок, камеры высушивают и окрашивают по Лейшману. При микроскопировании подсчитывают количество роэеткообраэующих лимфоцитов íà 100 лимфоцитов (эа розетку принимают лимфоцит, присоединивший 3 и более частиц полистирольного латекса) °

Пример. у 14 практически здоровых людей определяли количество

В-лнмфоцитов с использованием предлагаемого способа.

Полученные результаты приведены в табл. 1.

1527591 мя как длительность по известному способу 120-135 мин.

Кроме того, при хранении эритроциты мьипи (известный способ) теряют свою активность (срок хранения не более 1 сут), а частицы полистирольного латекса дают одинаковые результаты независимо от сроков хранения.

1О

Формула изобретения

Способ определения В-лимфоцитов крови человека, включающий забор кро15 ви, выделение лимфоцитов, инкубацию их в присутствии индикаторных частиц, подсчет роэеткообразующих клеток, отличающийся тем,что,с целью сокращения времени анализа и упрощения способа, в качестве индикаторных частиц используют частицы, полистирольного латекса.

Таблица 1

25 Обследованный Содержание В-лимфоцитов, Ж

35

Таблица 2

Количество роэеткообраэующих лимфоцитрв, Х

Обследованный

Ренольная смола

Полисти- Меламин- Реэольная рольный формальде- смола латекс гидная смола

Эритроциты мыши

Нет розеток

48

43

54

53

24

19

18

27

23

24

21

68

69

77

72

Для проверки специфичности контакта В-лимфоцитов с частицами полистиI рольного латекса были проведены опыты по сравнению частиц полистирольного латекса с частицами меламинформальдегицной, ренольной и реэольной смол. Для этих целей проводят peaicцию розеткообраэования с соответст4 вующими индикаторными частицами, используя лейкоциты капиллярной крови

6 здоровых доноров.

Результаты представлены в табл. 2.

Из табл. 2 видно, что только частицы полистирольного латекса дают результаты, сопоставимые с результатами роэеткообраэования с эритроцитами мыши, Кроме того, отдельная серия опытов былапосвящена выяснению вопроса зависят ли результаты от диаметра частиц лолистирольного латекса. Для этого у 9 здоровых доноров определя ли количество В-лимфоцитов ло предлагаемому способу, используя полистирольный латекс с диаметром частиц

2,2 1, 95, 1,8 мкм. Было выяснено, что в диапазоне 2,2-1,8 мкм результаты роэеткообраэования не зависят от диаметра частиц полистирольного латекса.

В предлагаемом способе отсутствуют этапы фиксации глутаровым альдегидом (который является сильным канцерогеном) и отмывания клеток физиологическим раствором. Кроме того, более чем в 10 раз сокращена длительность этапа приготовления суспензии индикаторных частиц. Общая длительность анализа предлагаемым способом составляет не более 60 мин, в то юре1

3

5

7

9

l0

11

12

13

26

32

19

27

l7

21

33

37

24

29