Способ определения активности лейкоцитов мочи

 

Изобретение относится к медицине , точнее к иммунологии, предназначено для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов мочи. Цель из Обретения - повышение точности спо-. соба. Для этого из концентрированного осадка мочи выделяют лейкоцитарную суспензию. Полученную суспензию ин - кубируют в термостате 130-45 мин при 36-37 0. В качестве фагоцитируемого объекта используют стафилококк или кишечную палочку. Бактерии опсонизируют донорской плазмой. Затем бактерии осаждают центрифугированием (Ю мин при 1500 об/мии), надосадок удаляют, а бактерии ресуспендируют в физиологическом растворе Хенкса до концентрации 1 х 10 бактерий в 1 мл. Затем окрашивают мазок-каплю определяют фагоцитарный индекс и фагоцитарное число и по этим значениям определяют степень активности лейкоци- , ТОВ MO4Hi,. (Л

СОЮЗ СО8ЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (19) (И) (s)) 4 G 01 И 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР .

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3938050/28-14 (22) 26.07.85 (46) 15 ° 07,88. Бюл. Ф 26 (71) Иркутский государственный медицинский институт (72) Т. Г. Андриевская и В. Ф. Портнягин (53) 616-072.7(088.8) (56) Лабораторное дело, М.: Медицина, 1970, N 7, с. 387-389. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

ЛЕИКОЦИТОВ МОЧИ ($7) Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологии, предназначено для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов мочи. Цель изобретения — повышение точности способа. Для этого из концентрированного осадка мочи выделяют лейкоцитарную суспензню. Полученную суспензию инкубируют в термостате i30-45 мин при

36-37 С. В качестве фагоцитируемого объекта используют стафилококк нли кишечную палочку. Бактерии опсонизи-. руют донорской плазмой, Затем бактерии осаждают центрифугированием (10 мин при 1500 об/мин), надосадок . удаляют, а бактерии ресуспендируют в физиологическом растворе Хенкса.до концентрации х 10 бактерий в 1 мп.

М

Затем окрашивают мазок-каплю,- определяют фагоцитарный индекс н фагоцитарное число и по этим значениям определяют степень активности лейкоци-, тов мочи.

1409929

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, н может быть использовано для исследования фагоцитарной активности лейкоцитов мочи.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

Лейкоцитарную суспензию получают 10 путем центрифугирования 50-100 мп мочи средней порции. (50 мп мочи может быть использовано для получения осадка у больных со значительной лейкоцитурией) в центрифужных пробирках в течение 8-10 мин при 1500 об/мин.

Надосадочную жидкость удаляют„ осадок сливают в одну пробирку. После двухкратного отмывания лейкоцитов физио; логическим раствором или раствором 20

Хенкса лейкоциты осаждают центрифугированием (10 мин, 1500 об/мин), надосадок удаляют, осадок ресуспендируют в питательной среде, напри мер, 199 с добавлением 0,1-0,5% >кеда-25 тина, в среде с целью умейьшения потери клеток вследствие оседания их на стенках посуды до концентрации

1 10 лейкоцитов в I мп.

Формулу и количество лейкоцитов 1О подсчитывают известными методами.

Полученную суспензию инкубируют в термостате в течение 30-45 мин при

36-37 C. В качестве фагоцитируемого объекта используют стафилококк или кишечную палочку. Использование в качестве объекта фагоцитоза кишечной палочки обусловлено ее ведущей ролью в этиологии ниелонефрита. Бактерии опсонизируют донорской плазмой (в равных количествах от пяти здоровых доноров забирают плазму после отстаивания крови в течение 1 ч, смешивают, разливают в пробирки по 1 мл и хранят при -70 ).

Опсонизацию осуществляют следующим образом . на 1 мл плазмы добавляют 0,1 мл бактериальной взвеси 1

2 миллиардной культуры, приготовлен50 ной с использованием ФЭК, ннкубируют в термостате при 36-37 С в течение

15-30 мин. Затем бактерии осаждают. центированием (10 мин, 1500 об/мин) надосадок удаляют, а

55 бактерии ресуспендируют в физиологическом растворе или растворе Хенкса до концентрации 1 10 бактерий в мп методом расчета разведения., учн,тывая концентрацию исследуемой лейкоцитарной взвеси.

Составление взаимодействующих смесей осуществляют в иммунологических планшетах при лейкоцитарно-микробном соотношении 1:100 (0,1 мл лейкоцитарной взвеси и 0,1 мл микробной взвеси), инкубируют в термостате в течение

30-45 мин при 36-37 С. Готовят мазок методом мазка — капли. Высушивают, фиксируют метанолом 5-7 мин, окрашивают по Романовскому-Гимза {азур IIэозин) 20-25 мин. Подвергают микроскопии с иммерсией известным способом.

Подсчитывают количество фагоцитирующих лейкоцитов на 100 клеток (ФИ) и среднее количество фагоцитирующих микробов на один фагоцит (ФЧ), по которым судят об активности лейкоцитов мочи.

Пример 1. Больной С,, 25 лет, поступил в клинику с жалобами на частые. головные боли, быструю утомляемость, повьппение АД до

160/100 мм рт.ст., иногда незначительные боли в области поясницы, Считает себя больным в течение последних 4-5 лет, когда стало отмечаться повышение АД, при исследовании мочи патологии не выявлялось. При обследовании больного в клинике патологии со стороны общих анализов крови и мочи не выявлено. При посеве мочи истинной бактериурии не выявлено. По данным рентгенологического исследования мочевой системы выявлена умеренная деформация чашечно-лоханочной системы обеих почек. При определений

Функциональной активности лейкоцитов мочи ФИ = 50%, ФЧ = 4,25 (нормативные показатели — доверительный интервал здоровых ФИ вЂ” от 60 до 90, ФЧ вЂ” от

9 до 16). Таким образом, наличие у пациента выявленных рентгенологически изменений почек свидетельствует в пользу хронического пиелонефрита. Отсутствие изменений со стороны общих анализов крови и мочи позволяет ду-. мать о фазе ремиссии. Однако снижение показателей активности лейкоцитов мочи (полученные результаты не вписываются в доверительный интервал здоровых) может свидетельствовать о готовнсоти к обострению пиелонефрита или о наличии скрытого воспалительного процесса. Больному показан курс противорецидивного лечения, включая иммуностимуляторы. После курса лечения .

1409929

Составитель Е, Колмакова

Редактор И. Касарда Техред М.Дидык Корректор Г. Решетник

Заказ 3474/40 Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4(иммуномодуляция гемодеэом, ФИ =

72 ., ФЧ = 9) данные результаты вписываются в доверительный интервал здоровых.

Пример 2. Больная М„

48 л., поступила в клинику с жалобами на боли в пояснипе, изменение цвета мочи, слабость, утомляемость, субфебрильную температуру. Больна в течение 10 лет. Диагноз хронического пиелонефрита подтвержден рентгенологическими и лабораторными исследованиями. Рецидивы заболевания возникают

2-3 раза в год. При определении активности лейкоцитов мочи ФИ = 22, ФЧ

ФЧ = 6,82 ° Показатели не вписываются в доверительный интервал здоровых (ФИ вЂ” от 60 до 90, ФЧ вЂ” от 9 до 16).

Проведен курс антибактериального и иммуностимулирующего лечения. При выписке из клиники показатели общего анализа крови и мочи, пробы Нечипоренко — в пределах нормальных. Общее состояние больной удовлетворительное, однако снижены показатели активности лейкоцитов мочи: ФИ = 50 ФЧ =

= 7,12}. Показатели не вписываются в доверительный интервал здоровых, что явилось показанием для продолжения- курса иммуностимулирующей терапии (наступление клинической ремиссии не сопровождапось ремиссией иммунологической}. Дополнительно проведен десятидневный курс лечения спленином.

Показатели активности лейкоцитов мочи: ФИ = 67, ФЧ = 8,99). Показатели вписываются в доверительный интервал здоровых, что может свидетелвствовать о наступлении иммунологической ремис- . сии и уменьшении вероятности рециди ва заболевания. Вероятно частые рецидивы заболевания как раз и обусловлены снижением защитных сил организма против инфекции мочевого тракта.

Для профилактики рецидивов можно рекомендовать курсы иммуномоделирующей терапии (показатели активности лейкоцитов мочи после лечения вписываются в доверительный интервал здоровых) .

Формула изобретения

2р Способ определения активности лейкоцитов мочи путем исследования ее осадка, о тли ч ающи Й ся тем, что, с целью повышения точности способа, иэ концентрированного осадка

25 выделяют лейкоцитарную .суспензию, . инкубируют в питательной срЕде .рН 6,57,1 в течение 30-45 мин, после чего добавляют в пробу опсонизированные бактерии, окрашивают мазок-каппю,.

Зо определяют фагоцитарный индекс и фагоцитарное число и при значении.первого менее 60 ..и второго менее 9 микробных клеток определяют пониженную активность лейкоцитов мочи.