Штамм бактерий viвriо сноlеrаl 042 серовара, используемый для получения вирулентного фага 781 (781в)с-170 042/1 серовара

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„.SU„,; 1405298 A 1 (51)5 С 12 N 1/20, С 12 Я 7/00 // (С 12 и 1/20, С 12 R 1: 63) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А 8TOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

C б

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTVA (46) 30.08.90. Бюл. Н 32 (21} 4066689/28-13 (22) 07.04.86 (71) Всесоюзный научно"исследовательский противочумный институт "Микроб" и Ростовский научно-исследовательский противочумный институт (72) Т.А.Кудрякова, В.il.Ìîðîç

H.È..0ñòðoóèîâà, О.С.Зинина, И.Е.Ушакова и Н.П.Коннов (53) 576,.8.093 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

В 701148, кл. С 12 М 7/00, 1980. (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ VIBRIO CHOLERAE, 042 СЕРОВАРА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ВИРУЛЕНТНОГО ФАГА 781(781в)С170 042/1 CEPOBAPA (57) Изобретение относится к микробиологической промьппленности и касается штамма бактерий Uibrio cholerae 042 серовара, используемого для получения вирулентного фага 781(781в)

С-170 042/1 серовара. Цель изобретения — изыскание штамма .нового 042 серовара, спонтанно продуцируняцего фаг 042/1 серовара. Штамм U.cholerae выделен из объектов окружающей среды и дейонирован под номером КМ-14(781). Продуцируемый штаммом 14(781) фаг .042/1 серовара может быть использо-. ван для идентификации энтеропатогенных вибрионов 042 серовара. 1 табл.

1 !405298

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано дпя идентификации .холерных вибрионов.

Цель изобретения — изыскание штамма нового 042.серовара, спонтанно продуцирующего фаг 042/ 1 серовара.

Штамм Vibrio cholerae депонирован в Институте "Микроб" под номером КМ14(781). Штамм выделен из объектов окружающей среды.

Культурально-морфологические, признаки. Подвижные, слегка изогнутые палочки 1,5-3 мкм в длину и 0,2-0,6 мкм 15 в ширину, с одним полярно-расположенным жгутиком, спор и капсул не образуют, грамотрицательны.

На плотных питательных средах (агар Мартена, агар Хоттингера, щелочной мясопептонный агар рН 7.6+0,2) образует круглые, диаметром 3 5+

+0,5 мм, полупрозрачные колонии с голубоватым оттенком, ровным краем, слегка уплотненным центром через 25

18 ч выращивания при 37+! С.

На жидких питательных средах (бульон Мартена 1%- пептонная вода, бульон Хоттингера рН 7,8+0,2) образует равномерную муть и нежную пленку на поверхности части 6 ч выращивания при

37+1 С.

Физиолого-биохимические свойства.

Тест на оксидазу положителен.

Разлагает до кислоты беэ газа маннозу, сахарозу, глюкозу, маннит, не разлагает арабиноэу, иноэит, лактозу.

Окисляет и ферментирует глюкозу на среде Хью-Лейфсона.

Образует декарбоксилазу лиэйна, не образует дигидролазу аргинина.

Разлагает крахмал, ферментирует желатин. Не растет в присутствии

7-10% хлорида натрия.

Серологические свойства. Не агглютинируется видовой 0 и типовыми .(Инаба, Огава) холерными сыворотками, агглютинируется моноварной вибрионной сывороткой 042 серовара, не агглютинируется моноварными сыворот" ками других (02-041, 043-056) 0 се- 50 роваров.

Способен спонтанно продуцировать умеренный фаг ранее неизвестного серотипа, обозначенного 042/1, вирулентные мутанты которого используют SS для лабораторной диагностики энтеропатогенных вибрионов U. cholerae 042 серовара.

Умеренный фаг 042/! серотипа имеет следующее. электронно-микроскопическое строение: головка гексагональо ной формы 300+22 А в диаметре, отростка не имеет, т.е. относится к мелким фагам II морфологической группы по систематике А.С.Тихоненко (1968). его одиночный цикл развития характеризуется продолжительностью минимального латентного периода 31+

+1мин и средним урожаем 20+3 частиц на одну инфицированную клетку.

На загоне индикаторного штамма формирует негативные колонии круглой формы 5+! мм в диаметре с неровным краем, плотным центром и узкой зоной. неполного лизиса по периферии. Вирулентные мутанты отличаются строением колоний и спектром литического действия: колонии того же размера, но с прозрачным центром.

Умеренный фаг лиэирует только индикаторный штамм (К.М 13), вирулентные мутанты 86-90% штаммов вибрионов гомологичного серовара.

Размножают штамм 781 в бульоне и на агаре Мартена рН 7,6+0,2, хранят в лиофилизированном состоянии.

Использование штамма иляюстрируется. следующим примером.

Пример. Для обнаружения спонтанной продукции умеренного фага

042/! серотипа и .его вирулентных мутантов штамм-14 (781) засевают в бульон Мартена рН 7,6+0,2 и выращио вают при температуре 37+1 С в течение 20+2 ч, а затем фильтруют через фарфоровые бактериальные фильтры марки Ф-5. Полученный фильтрат в количестве 1,0 мл добавляют к 5,0 мл

0,7% агара Мартена рН 7,6+0,2, расплавленного и охлажденного до 45+! С в пробирке. Туда же вносят 0,2 мл бульонной культуры трехчасового роста специального индикаторного штамма (К.М - 13) тщательно перемеши" вают и выливают на агаровую пластинку (агар Мартена) в чашке Петри.

E. о

После инкубирования при 37+1 С в течение 20+2 ч на чашке обнаруживают негативные колонии умеренного фага

041/.! и вирулентные мутанты последнего.

Платиновой иглой уколом в центр прозрачной негативной колонии фаг переносят в 10 пробирок с 1,0 мл бульона Мартена рН 7,6+0,2, подоо гретого до 37 С. Туда же вносят

1405298

0,2 мл бульонной культуры штамма- ческий фильтр (как указано), ставят ментора (K.Ì, -13) и 5,0 мл 0,7Х ага- контроль стерильности и используют ра Мартена. Содержимое каждой .пробир- по назначению. В таблице дана харакки перемешивают и выливают на отдель- уеристика специфичности и активности . ную пластинку (агар Мартена) в чашке вирулентного мутанта 781(781в)С-170

Петри и дают застыть второму агарово- фага 042/1, откуда видно, что виру" му слою. После выращивания в течение лентные мутанты этого фага обладают

20+2 ч в каждую чашку заливают по широким спектром литического дейст10 мл бульона Мартена и шпателем пе- 1ð вия на культуры гомологичного 0 сероремешивают с верхним агаровым слоем, вара энтеропатогенных вибрионов и выа жидкую часть переносят во флакон и соко специфичны. фильтруют, как указано. Применение изобретения для идеити— фикации энтеропатогенных вибрионов

Полученный фнльтрат вирулентного . 1g 042,серовара повышает эффективность мутанта размножают в жидкой среде лабораторной диагностики НАГ-инфекций. (бульон Мартена рН 7,6+0,2). К 100,0мл бульона добавляют 5,0 мл фильтрата и Ф о р м у л а и s о б р е т е н и я

1 0 мл бульонной трехчасового роста культуры штамма-ментора (К.М-13), ин- 2п Штамм бактерий Vibrio cholerae кубируют при 37+1 С в течение 2ф+ 042 серовара, КИ-14(781), используе+0,5 ч до просветления, обеззаражи- мый для получения вирулентного фага вают фильтрацией через бактериологи 781(781в)С-170 042/ 1 серовара.

Спектр деяствня х специрячиоств ук@реяяоео фаге серотхпе 042/1,х eto еиррпехтяого мутвята 781 (781 в) С-170

Взлхчестео

ыэ ряеяяих итезВФоэ 50

80 782 13 34

Ие ахи явах» руетсе ме ре яям4

@агам серо» тяпе 042/1 эиррлея тяйо4

: мугаятом

781 (781m) С170

Составитель Г.Смирнова

Редактор Г.Бельская Техред А.Кравчук Корректор А. Обручар

Заказ 3092

Тираж 501 Подписное

ВПИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

)13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4