Штамм бактерий viвriо сноlеrае 042 серовара, используемый в качестве индикаторной культуры для выявления умеренного фага 042/1 серовара и его вирулентных мутантов

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

А3

I,\ ,i

1

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

:. (46) 30.04.90. Бюл. 9 16 . (2!) 4072544/28-13 .{22) 16.04.86 (71) Всесоюзный научно-исследовательский. противочумный институт "Микроб" .. и Ростовский научно-исследовательский противочумный институт (72) Н.М. Остроумова, В.П. Мороз, О.С. Зинина, Т.А. Кудрякова, И.Е. УшаКова.и Н.П. Коннов (53.) 576.8.093(088.8) .(56) Авторское свидетепьство СССР

У !028718, кл. С 12 N 7/00, 1983. (.54) ШТАММ БАКТЕРИЙ Vibrio cholerae ,042 СЕРОВАРА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТ ВЕ ИНДИКАТОРНОЙ КУЛЬТУРЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕ-

НИЯ УМЕРЕННОГО ФАГА 042/1 CEPOBAPA

И ЕГО ВИРУЛЕНТНЫХ МУТАНТОВ (57) Изобретение относится к медицинской мнкробиологии и касается (51.).5 С 12 N 1/20, 7/PP// (C l2 N l/20 С 12 В 1 63 штамма бактерий Vibrio cholerae 042 серовара, используемого в качестве индикаторной культуры для выявления умеренного фага 042/1 серовара и его вирулентных мутантов. Цель изобрете- ния — изыскание штамма, способного выявлять умеренный фаг нового сероти I па 042/l и обеспечивать в качестве штамма-ментора размножение вирулент-, ных мутантов этого фага. Штамм V.cho1erae выделен из объектов окружающей среды и депонирован под номером

КМ-13(С-170). Штамм обладает чувст вительностью к умеренным фагам,энтеропатогенных вибрионов 042:серовара.

При использовании его в качестве штамма-ментора концентрация частиц препарата вирулентного мутанта фага. равна 10 -10 частиц/мл. 1. табл. (а

1 1391090 2

Изобретение относится к медицинСкой микробиологии и может быть исттользовано при диагностике НАГ-инфекцийе 5

Цель изобретения — изыскание штамма, способного выявлять умеренный фаг нового серотипа 042/I и обеспе,чивать в качестве штамма-ментора разложение вирулентных мутантов этого !О фага. ! .Штамм V.cholerae выделен иэ объектов окружающей среды и депоннрован под номером КМ-13(С-I70).

Штамм КМ-13(С-170) характеризуется !5 спедующими свойствами.

Культурально-морфологические при( з наки.

Подвижные, слегка изогнутые палочк 1,6 2 9 мкм в длину и 0,2-0,6 мкм 20 в ширину, с одним полярно расположен |м жгутиком, спор и капсул не образ т, грамотрицательньr.

На твердых питательных средах . гар Мартена, агар Хоттингера, ще- 25 очной мясо-пептонный агар рН 7,6+ ,2) образует круглые, полупрозрачные, 3-4 мм в- диаметре колонии с ровным краем, слегка уплотненным

Центром через 18 ч выращивания при 30

37 С.

На жидких питательных средах (бут!ьои Мартена, бульон Хоттингера, 1Х-ная пептонная вода (рН 7,8+0,2)) образует равномерную муть и нежную ттленку на поверхности через 6 ч вы35 ращивания при 37 С.

Физиолого-биохимические свойства.

Тест на оксидаэу положителен, разлагает до кислоты без rasa манно- 40

sy, сахарозу, глюкозу, маннит, не ферментирует арабинозу, инозит, лактозу, на среде Хью-Лейфсона фермен Фирует и окисляет глюкозу, образует

Декарбоксилазу лизина, не образует дигидролазу аргинина, ферментирует к рахмал и желатин, не растет при кон, центрации 7-!07 хлорида натрия °

Серологические свойства.

Не агглютинируется холерными диагиостическими сыворотками О,RO, Инаба, 50

Огава, агглютинируется моноварной в ибрионной сывороткой 042 серовара, н е агглютинируется моноварными виб1тионными сыворотками других (02-0 1, ..043-056) 0 сероваров.

Способен выявлять и обеспечивать репродукцию умеренного фага 042/1 серотипа и его вирулентных мутантов.

Умеренные н вирулентные фаги 042/! серотипа формируют на газоне штамма

С-170 негативные колонии типичной морфологии °

Колонии умеренного фага 042/! серотипа имеют круглую форму 5+I мм в диаметре, с плотным центром и узкой зоной неполного лиэиса по периферии. Негативные колонии вирулентйых мутантов отличаются от исходного умеренного варианта прозрачным центром.

По электронно-микроскопической структуре фаги 042/1 серотипа относятся к Х1 морфологической груттпе

A.Ñ. Тихоненко. Они имеют маленькую головку 300+32 А в диаметре и лишены отростка. Одиночный цикл вирулентного мутанта 781/781в/С-I70 фага 042/1 серотипа характеризуется минимальным латентным периодом 31 1 мин и средним урожаем 20+3 частиц на одну инфицированную клетку. Вирулентные мутанты фага 042/I обладают практически ценным свойством — специфически лизировать 86-907 штаммов эитеропатогенных вибрионов Ч.cholerae .042 серовара, что может быть использовано при лабораторной диагностике НАГ-инфекций.

Размножается штамм С-170 в бульо-, не и на агаре Мартена (рН 7,6+0,2), хранят его в лиофилиэированном сос-.тоянии.

Спектр действия фага показан в таблице.

Использование штамма иллюстрируется следующим примером.

Пример. Индикаторные свойства штамма С-170 в отношении умеренных фагов 042/1 серотипа и его вирулентных мутантов выявляют в следую" щем опыте методом Грациа и капли.

Фильтрат суточной бульонной культуры штамма (KM-14) Vibrio cholerae 042 серовара или другого штамма того же серовара, исследуемого на лизогению, в количестве 1,0 мл смешивают. с 0,2 мл бульонной трехчасо-. вого роста культурой штамма С«ЛО и

5,0 мл 0,7Х-ного arapa Мартена (пред- варительно расплавленного и охлажденного до 45 С) и выпивают на пластинку 23-ного агара Мартена в,чашке Петри. После застывания нанесенного слоя чашку перевертывают и культивируют прн 37 С 18-20 ч (метод Грациа).

I39I090

Формула изобретения

Штамм бактерий Vibrio cholerae 042 серовара КМ-I3(C-170), используемый в качестве индикаторной культуры для выявления умеренного фага 0 42/I серовара и его вирулентных мутантов. Спектр.дайстанн н еланнфнчноетъ фата уЫ(уВ!а) С-I20

V.рхгн елаююlytI c

V.eholaras

042 еароаара у.ецио но 04 е 64

056

ahoтаа

Внл кулътурн количество нзученных атаиИОЭ

1 2

56 IS

I I

Из ннх лнзируетсн ннрулентнни иутеятои

261 I78ls)

С !УО

14. r

Составитель Г. Смирнова

Редактор И. Кузнецова Техред И.Ходайич Корректор Л. Патай

Тираж 502 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 1694

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Бульонную культуру трехчасового роста штамма С-I70 вносят в количестве 0,5 мл в 5,0 мл 0,77-ного агара

Мартена, тщательно перемешивают и

5 выливают на поверхность пластинки

27-ного агара МарФена в чашке Петри.

На застывшую поверхность наносят каплю исследуемого фильтрата. При наличии небольшого количества корпускул 10 фага в фнльтрате он обнаруживается методом Грациа в виде изолированных негативных колоний на газоне штамма

С-170. При высокой концентрации фага в фильтрате его обнаруживают методом капли s виде сливного литического пятна на газоне штамма С-170 на месте нанесения фильтрата. для получения вирулентного фага с первой чашки отбирают прозрачную колонию, уколом платиновой иглы фаэ иэ нее переносят в 0,1 мл бульона

Мартена и концентрируют на твердой среде по методу Адамса с применением 25 в качестве штамма-ментора У.cholerae 042 С-170. Полученный концентрат, фага размножают в жидкой среде на штамме С-170. К 100,0 мл бульона Мартена добавляют трехчасовую бульонную культуру штамма в количестве 2 мл (5 ° 10 микробных тел в мл) и концентрат фага иэ расчета множественности инфекции 15:1. Посев культивируют при 37 С в течение 2,5+0,2 ч до просветления микробной взвеси, после чего стерилизуют фильтрацией через фарфоровые бактериальные фильтры марки Ф-5, контролируют иа стерильность и применяют по назначению.

Концентрация частиц препарата вирулентного мутанта фага 042/1 серотипа 78!/781в/170, размноженного в укаэанных условиях, равна 10 -10 з 1л частиц на I мл.