Способ определения пролиферативной способности лимфоцитов

 

Изобретение относится к медицине , точнее к иммунологии, и предназначено для оценки иммунологического статуса человека. Цель изобретения - упрощение способа исследования и возможность его широкого применения в практическом здравоохранении. Для этого на предметном стекле готовят мазки крови, высушивают на воздухе. фиксируют в смеси спирта с эфиром, окрашивают по Романовскому-Гимзе и микроскопируют при общем увеличении 90. Подсчитывают в мазке 200 лимфоцитов , дифференцируя большие лимфоциты , как клетки диаметром 10- 12 мкм с круглым ядром и развитой цитоплазмой, средние лимфоциты диаметром менее 10 мкм с высоким ядерноцитоплазматическим отношением и малые лимфоциты - диаметром менее 8 мкм с узким ободком цитоплазмы. При содержании в периферической крови больших лимфоцитов в пределах 8-22% делают вывод о нормальном уровне иммунологической реактивности, более 23% свидетельствует о развитии реактивных сдвигов на антиген, ниже 8% - снижение иммунологической реактивности организма. Способ дает точность до 89%. S (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) А1 (51) 4 0 О! И 33/49

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4 123992/28-14 (22) 30.05.86 (46) 23 ° 04.88. Бюл. К - 15 (71) Архангельский государственный медицинский институт (72) JI.Ê.Äîáðoäååâà и Г.А.Суслонова (53) 6 15 ° 375(088..8) (56) Mills J.À. J ° I»»munol., 1966, ч. 9, р. 233-247. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОЛИФЕРАТИВНОИ СПОСОБНОСТИ ЛИМФОЦИТОВ (») Изобретение относится к медицине, точнее к иммунологии, и предназначено для оценки иммунологического статуса человека. Цель изобретения упрощение способа исследования и возможность его широкого применения в практическом здравоохранении. Для этого на предметном стекле готовят мазки крови, высушивают на воздухе, фиксируют в смеси спирта с эфиром, окрашивают по Романовскому-Гимзе и микроскопируют при общем увеличении 90. Подсчитывают в мазке 200 лимфоцитов, дифференцируя большие лимфоциты, как клетки диаметром 1012 мкм с круглым ядром и развитой цитоплазмой, средние лимфоциты диаметром менее 10 мкм с высоким ядерноцитоплазматическим отношением и малые лимфоциты — диаметром менее 8 мкм с узким ободком цитоплазмы. При содержании в периферической крови больших лимфоцитов в пределах 8-22% делают вывод о нормальном уровне иммунологической реактивности, более 23% свидетельствует о развитии реактивных сдвигов на антиген, ниже 8% снижение иммунологической реактивности организма. Способ дает точность до 89%.

1390568

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии,и может быть использовано при оценке иммунологического статуса человека °

Цель изобретения — упрощение способа исследования и возможность широкого его применения в практическом здравоохранении.

Способ осуществляют следующим образам.

На предметном стекле готовят мазки крови, высушивают на воздухе, фиксируют в смеси спирта с эфиром и окрашивают по Романовскому-Гимэе. Для 15 фиксации и окрашивания мазков могут быть использованы различные фиксаторы, в том числе этиловый и метиловый спирты, и красители. Окрашенные мазки микроскопируют при общем увеличе- 20 нии 90, подсчитывают в мазке 200 лимфоцитов, дифференцируя большие лимфоциты как клетки диаметром 10-12 мкм с круглым ядром и развитой цитоплазмой, средние лимфоциты диаметром ме- 25 нее 1О мкм с высоким ядерно-цитоплазматическим отношением и малые лимфоциты диаметром менее 8 мкм с узким ободком питоплазмы.

Содержание в периферической крови больших лимфоцитов в пределах 8-227 характерно для человека с нормальным уровнем иммунологической реактивности; увеличение больших лимфоцитов более 23i свидетельствует о развитии реактивных сдвигов на антиген; содер35 жанне больши.. лимфоцитов ниже 8 (от О до 5,11+ I,02Õ) регистрируется при снижении иммунологической реактивности организма (совпадение в

39,717. случаев).

Пример. При сравнительной характеристике уровней содержания больших лимфоцитов и бласттрансформированных клеток в культуре в процес- 45 се обследования населения Европейского севера (иенцы, местные жители русской национальности, родившиеся на севере, и прибывшее население) установлена идентичность количественного выражения названных показа50 телей. Так, у ненцев среднегодовое содержание больших лимфоцитов в составе периферической крови находилось в пределах 14,76 -.1,08/ при уровне бласттранс эормации лимфоцитов в куль- 55 туре 15,62+ 1,68Ы; у местных жителей изучаемые показатели равны соответственно 14, 11+ 0,99 и 15,38+1,427; у лиц, прибывших с юга, 12,58+1,17 и 13,844.1,491.

Сравнительное изучение уровня спонтанной бласттрансформации лимфоцитов в различные сезоны года позволило установить значительное повышение данной способности лимфоцитов в период полярной ночи. В зимние месяцы степень бласттрансформации лимфоцитов у ненцев возросла до 19,37+

41,37Х, у местных и прибывших жителей соответственно до 19,35+0,92 и 19,83+0,957 Подсчет содержания больших лимфоцитов в мазках крови, взятой одновременно с пробами для постановки реакции бласттрансформации, подтвердил аналогичность изучаемых показателей — уровень больших лимфоцитов повысился соответственно до 18,61 -0,98, 17,71+1, 12 и 19,57-

+1,427. Коррелятивный анализ показал достоверную прямую зависимость изучаемых показателей (ч=0,81; 0,73;

0,85).

Изучение предложенного показателя в процессе иммунизации людей живой интраназальной противогриппозной вакциной позволило подтвердить мнение об активизации процесса пролиферации лимфоцитов под воздействием антигена. Было показано, что уже на

7-е сутки после иммунизации резко увеличилось в крови содержание больших лимфоцитов (Р 0,01) и уровня спонтанной бласттрансформации лимфоцитов в культуре (Pc0,001). Так, у ненцев увеличение процента больших лимфоцитов отмечено в этот период с 18,61 0,98 до 22,82+1,23, при ловышении процента трансформированных клеток в культуре с 19,37+0,71 до

23,31+1,85. Подобные соотношения отмечались у местных жителей (соответственно с 17,71 1, 12 до 22,01+0,797 и с 19,35+0,92 до 23,82+1,357) и прибывших на север с юга (соответственно с 19,57+1,42 до 23,51"-.1,527 и с

19,83+0,95 до 25,11 1,62i) .

Установлено, что предложенный показатель, также как и уровень бласттрансформации, коррелирует с титрами антител в отношении противогриппозных антигемагглютининов (ч=0,72), противобрюшнотифозных О-агглютининов (ч=

=0,82) и противопаратифозных 0-агглютининов (ч=0,68) при вакцинации соответствующими вакцинами.

1390568 цита.

Формул а изобретения

Составитель Г. Крюкова

Редактор Н.Рогулич Техред М.Дидык Корректор А Тяско

Заказ 1762j44 Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

При обследовании 93 детей со сниженной иммунологической реактивностью (часто болеющих респираторными заболеваниями — бронхитами, бронхопневмо- 5 ниями) был установлен факт дефицита сывороточного иммуноглобулина А. Изучение уровня Йролиферативной способности лимфоцитов показало, что у

77,47. обследованных наблюдается содержание больших лимфоцитов ниже 87. (7,84+0,127), а у 81,9Х количество бласттрансформированных клеток составило 8,04+0,567.

Достоинством способа является сокращение времени получения результатов с 3-4 дней до 30 мин, максимальная простота, полностью исключающая многочисленные этапы получения клеток 20 и их культивирование, необходимость дорогостоящей аппаратуры, реактивов и специального помещения для соблюдения стерильности. Способ проверен на большом клиническом материале и пред- 25 лагается как экспресс-метод для оценки иммунологического статуса, для оценки уровня иммуногенности антигена, уровня иммунного ответа на антиген и наблюдения за динамикой реактивных сдвигов. Способ может быть также рекомендован при оценке действия новых иммуномодуляторов, иммунодепрессоров и препаратов, стимулирующих иммунологическую реактивность.

В условиях диспансерных осмотров и диспансерного наблюдения способ удобен как скрининг-тест для выявления лиц с возможным наличием иммунодефиСпособ определения пролиферативной способности лимфоцитов путем исследования лимфоцитограммы, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа, при исследовании лимфоцитограммы выявляют количество больших лимфоцитов и при содержании их менее 8Х определяют снижение пролиферативной способности лимфоцитов, а при содержании выше 23/ — повышение пролиферативной способности лимфоцитов.