Способ оценки иммунного статуса

 

Изобретение относится к медици- ,не, а именно к исследованию иммунно- ГО статуса, и может быть использовано в клинической иммунологии различных заболеваний. Целью изобретения является повышение точности оценки иммунного статуса за счет выявления ранних этапов дифференцировки Т-клеток. Для этого мононуклеары обследуемых инкубируют в течение 18 ч в присутствии и в отсутствии Т-активина. По приросту количества ауторозеткообразуюттщх клеток определяют в интервалах: от О до 1,5 ч пре-ауто- РОК, от О до 6 или от 3 до 6 ч - пре-Т-клетки и от 6 до 18 ч - способность ауто-РОК к дифференцировке. По количеству и соотношению этих клеток, а также их чувствительности к Т-активину судят об иммунном ста- - тусе. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУЬЛИК (19) (И) А1 (51) 4 G 01 N 33 49

ВСЕГО"ЗЩ;1.Ц, Ц

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ч 1

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР пО делАм изОБРетений и ОткРытий (21) 4055205/28-14 (22) 11.04.86 (46) 15.03.88. Бил.Р 10 (71) Институт клинической иммунологии СО АМН СССР, (72) ЕР.×åðíèõ, О.Ю.Леплина и Г.З.Иубинский (53) 615 ° 375(088.8) (56) Hayword. А.R. et al. Тогпа1

of Хипшпо3ояу, 1978, ч.121, п.1, p I 5. (54) СПОСОБ. ОЦЕНКИ ИММУННОГО СТАТУСА (57) Изобретение относится к медицине, а именно к исследовании иммунного статуса, и может быть использовано в клинической иммунологии различных заболеваний. Цельв изобретения является повыиение точности оценки иммунного статуса за счет выявления ранних этапов дийАеренцировки Т-клеток. Для этого мононуклеары обследуе. мых инкубирувт в течение 18 ч в присутствии и в отсутствии Т-активина.

По приросту количества ауторозеткообразувщих клеток определяит в интервалах: от О до 1,5 ч пре-аутоРОК, от 0 до 6 или от 3 до 6 ч— пре-Т-клетки и от 6 до 18 ч — способность ауто-РОК к дийференцировке.

По количеству и соот гошенив этих клеток, а также их чувствительности к Т-активину судят об иммунном ста- .

<О тусе. 1 табл.

1 1381399 2

Изобретение относится к медицине, а именно к исследовании состояния иммунного статуса, и может быть ис пользовано в клинической иммунологии.

Целью изобретения является повы,шение точности оценки иммунного с.та-! туса за счет выявления ранних этапов дифференцировки Т-клеток.

Способ осуществляют .следующим !О

:образом.

Мононуклеары (МК) выделяют путем центрифугирования гепаринизированвой ненозной крови (5 мл, содержащей

500 Ед гепарина) в градиенте плотно- 15 сти фиколла-верографина (3 мл, плотность 1,077) при 3000 об/мин. Выде- . ленные МК инкубирувт в пробирках в среде 199, дополненной IОХ телячь ей сыворотки в отсутствии или при- 20 сутстнии Т-активина (1 мкг/мл) при

37 С. Количество клеток в одной пробирке составляет 1 млн в 1 мл культу ральной смеси, Тест ауторозеткообразования прово- 25 дят следующим образом.

50 мкл лимфоцитов (концентрация

5 млн/мл) смешивают с равным объемом сыворотки человека АВ (W ) группы (преднарительно HHRKTHBHpoBRHHDH про- 30 греванием и адсорбированной бараньи ми и человеческими эритроцитами), ин кубирувт смесь при 4 (. в .течение

;30 мин и затем добавляют 50 мкл IХ ной взвеси аутологичных эритропитов. 35

Далее клеточную взвесь центрифугирувт

5 мин при 1000 об/мин и инкубирувт в о, течение ночи при 4 С, после чего производят подсчет ауто-POK.

Т-клетки выделяют методом градиент-40 ного центрифугирования Е-РОК. Для этого 0,5-мл МК периферической крови (концентрация 10 млн/мл) смешивавт с 0,1 мл 20Х-ной взвеси эритроцитов барана (ЭБ) в присутствии 15Х инактинированной и адсорбированной ЭБ сыворотки доноров АВ (5 ) группы.

Клеточную смесь. инкубирувт 15 мин при

37 С, центрифугирувт 5 мин при

1000 об/мин и вновь инкубирувт в тео, .чение 1 ч при 4 С. Осадок осторожно ресуспендирувт и центрифугирувт в течение 20 мин.

При 1800 об/мин в градиенте плотности фиколла-верографина (d = l 077). Находящиеся в осадке с Т-клетками ЭБ после удаления надосадочной жидкости лизирувт гипоосмолярным шоком. После этого оставшиеся

Т-клетки троекратно отмывают средой

199 и доводят до концентрации

5 млн/мл. Инкубацив МК и сепариронанных Т-клеток проводят в течение 18 ч указанным способом. Количество аутоРОК определяют в исходных культурах через 1 5 3; б; 18 ч культивирования.

По приросту ауто-POK от 0 до

1,5 ч судят о количестве предшественников ауто-РОК. Дифференцировка Е

Ф ауто клеток в Е+ ауто клетки у доноров — это Т-актинин — зависимый процесс. Среднее количество преауто-POK определяемое как прирост ауто-POK в культурах МК с Т-активином, составляет у здоровых доноров

5,1+1,ОХ (n = 11) и соответствует количеству Т-актинии-чувствительных пре-ауто-РОК, определяемому в культурах сепарированных Т-клеток 5,9

I,ЗХ (n = 16) °

Прирост ауто-РОК на шести часах обусловлен дифференцировкой н аутоРОК-Е пре-Т-клеток.

Пример 1. Больной А. В периферической крови перечисленными методами выявлено содержание пре-Тклеток в присутствии (пре-Т -клеток) и отсутствии (пре-Т -клеток) T-актинина; пре-T-клеток=12,5, пре-Т-клеток = 18,5; пре-ауто-POK = 6; пре-ауто-POK = 9; ауто-РОК

=1,5. Сравнивая доли содержания соотнетствувщих клеток больного с нормой, оцениваем, что доля пре-Т-клеток и пре-ауто-POK увеличена, содержание ауто-POK снижено. Состояние иммунного статуса характерно для лимфопролиферативного заболевания. У больного лимфосаркома.

Пример 2. Больной Б. В периферической крови больного выявлены

„+ следующие содержания: пре-Т -клеток=

=0; пре-Т -клеток=0; пре-аута-POK =

=О пре-ауто-POK =0; ауто-POK=25.

Сравнивая доли содержания соответствующих клеток больного с нормой, оцениваем, что содержание пре-Т-клеток и пре-ауто-POK снижено, а ауто-РОК повышено. Состояние иммунного статуса характерно для аутоиммунного заболе- вания. У больного ревматоидный артрит.

Пример 3. Больной В. В периферической крови больного выявлены следующие содержание незрелых Т-кле+ точных предшественников: пре-Т -кле1381399

ВНц патологии

Точность оценки,%

Из данных таблицы следует, что точность предложенного способа по сравнении с известным повышена на

29,5-65%. редложенный Способспособ прототип

Лимфогранулематоз

2 %ронический гломерулонефрит

Ревматоидный

ЗО артр т

58,5

29 зоны перекрытия показателей, определяемых соответствующим способом.

Составитель Г.Крюкова

Редактор Н.Иныдкая Техред М.Дтщык Корректор О.Кундрик тираж 84? Подписное

ВКИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д.4/5

Заказ 1181/40 Производственно-полиграфическое предприятие, r.Óæãîðoä, ул.Проектная,4 ток=30,5; пре-T -клеток=29; пре-аутоPOK =2,5; пре-ауто-POK =0,5; аутоPOK-8,5. Сравнивая полученные результаты с нормой, видим, что доля преТ-клеток увеличена, доля пре-аутоPOK и ауто-РОК снижена. Состояние иммунного статуса характерно для лимфопролиферативных заболеваний с аутоиммунным компонентом. У больного лимфогранулематоз °

Сравнительные данные по точности оценки иммунного статуса по известному и предложенному способам приведены в таблице.

Формула изобретения

Способ оценки иммунного статуса путем определения субпопуляций Т-кле" ток, отличающийся тем, что, с целью повышения точности оценки за счет выявления ранних этапов дифференцировки, определяют в присутствии Т-актинина и без него содержание пре-Т-клеток, пре-ауторозеткообразующих клеток (пре-ауто-POK}, ауторозеткообразуюших клеток (аутоРОК}, устанавливают соотношение между показателями и при увеличении доли пре-Т-клеток, пре-ауто-РОК и уменьшении доли ауто-POK по сравнению с нормой оценивают состояние иммунного статуса, характерное для лимфопролиферативных заболеваний, при уменьшении доли пре-Т-клеток ° пре-ауто-РОК и неизменном или повышенном содержании доли ауто-РОК по сравнении с нормой оценивают состояние иммунного статуса, характерное. для аутоиммунных заболеваний, йри увеличении доли пре-T-клеток, снижении доли пре-аутоPQK и ауто-РОК по сравнению с нормой оценивают состояние иммунного статч- са, характерное для лимфопролифера)О тинных заболеваний с аутоиммунным компонентом.

П р и м е ч а н и е. Точность оценки иммунного стату35 са рассчитывали как 100% — %