Способ определения сзв рецепции нейтрофилов человека

 

Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения - упрощение способа. Взвесь сефадекса смешивают с цельной сывороткой, инкубируют и отмывают. После инкубации сефадекса с нейтрофилами в пробирки добавляют среду 199. Затем подсчитывают число клеток в супернатанте. Способ может бцть использован для оценки состояния защитной системы организма.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) И1) 1489 А1

У1) 4 G 01 N 33/54

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

М А BTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 4088713/28-14 (.-22) 10.07.86 (46) 23.12.87. Бюл, N - 47 (71) Горьковский научно-исследовательский педиатрический институт и Горьковский государственный медицинский институт им. С.M. Кирова (72) А.Н.Маянский, Е.Г.Зеленова, И.В.Маянская и Т.M.Êîíûøêèíà (53) 615.375 (088.8) (56) S.Barrett, G.Garratty, Cell scer-

face hetегоgeheity of human Ь1оой

neutrophils and monocytes. — BritishХ. of Haematology, 1979, 43, р. 575588. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЗв РЕЦЕПЦИИ

НЕЙТРОФИЛОВ ЧЕЛОВЕКА (57) Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения — упрощение способа. Взвесь сефадекса смешивают с цельной сывороткой, инкубируют и отмывают, После инкубации сефадекса с нейтрофилами в пробирки добавляют среду 199. Затем подсчитывают число клеток в супернатанте. Способ может быть использован для оценки состояния защитной системы организма.

1361489

В опыте нейтрофилы активнее присоединяются к.сефадексу, а меньшее их количество, по сравнению с контролем остается в надосадке. Разделив количество нейтрофилов в опыте на количество нейтрофилов в контроле и умножив на 100, получают процент клеток, оставшихся в надосадке. Следовательно, оставшиеся клетки (от

100% вычесть % клеток в супернатанте) присоединяются к сефадексу — это и.есть % клеток, содержащих рецепторы к СЗв-фактору комплемента.

Пример 1. Проводят оценку

СЗв-рецепторов нейтрофилов у исследуемого донора, 21 r. В стерильных условиях из вены получают 2,5 мл кро ви, Нейтрофилы выделяют путем центрифугирования в двойном градиенте плотности (1,116 и 1,077 г/см ) фиколл-верографин. После двухкратного отмывания в среде 199 (общий объем

20 мл) клетки ресуспендируют в том же растворе. Конечная концентрация клеток нейтрофилов 5 млн/мл. Все манипуляции проводят в силиконированной стеклянной посуде, 1 мл взвеси сефадекса смешивают с 1 мп цельной сыворотки, инкубируют

30 мин при 37, трижды отмывают физиологическим раствором (общий объем

15 мл) и взвешивают в физиологическом растворе, конечная концентрация опсонизированного сефадекса 10 мг/мл, В контроле используют неопсонизированный сефадекс, Инкубация 30 мин при 37 С. Во время инкубации сефадекс с нейтрофилами. надосадок переливают в другую пробирку, предварительно измерив его объем, к осадку добавляют еще 3 мл среды 199 для отмывки от свободных (несвязанных) нейтрофилов. Определяют общий объем надосадка. В камере Горяева подсчитывают число клеток в супернатанте после инкубации нейтрофилов с опсонизированным (опыт) и неопсонизированным (контроль) сефадексом, Опыт 2Ь, контроль 88, ПРН СЗв = 71%.

Использование предлагаемого способа определения СЗв рецепции нейтрофилов позволяет упростить способ за счет снижения количества необходимой донорской крови при использовании

50 где опыт — количество нейтрофилов, подсчитанных в 225 квад- 55 ратах камеры Горяева из опытной пробы; контроль- количество нейтрофилов, подсчитанных в 225 квадИзобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для определения наличия

СЗв рецепторов на нейтрофилах и оцен5 ки состояния защитной системы организма.

Целью изобретения является упрощение способа.

Способ осуществляют следующим об- 10 разом, Используют коммерческий сефадекс

G-25, который заливают дистиллированной водой, затем доводят до концентрации 100 мг/мл. Для опсонизации 15 сефадекса используют лиофилизированный пул сывороток крови. Смешивают

1 мл взвеси сефадекса и 1 мл цельной сыворотки, инкубируют 30 мин при

37 С, трижды отмывают физиологическим 20 раствором, взвешивают в исходном л объеме (рабочая концентрация опсонизированного сефадекса 10 мг/мл). Хранят при 4 С. Нейтрофилы выделяют из крови здоровых доноров B двойном

25 градиенте плотности фиколл-верографин (1,116 и 1,077 г/cMз), суспендируют в среде 199 в концентрации клеток

5. млн./мл. Затем смешивают по 0,2 мп взвеси опсонизированного сефадекса . 30 и нейтрофилов (контролем служит реакция с неопсониэированным сефадексом), инкубируют 30 мин при 37,С

После инкубации сефадекса с нейтрофилами B каждую пробирку заливают по

3 мл среды 199. Через 2 мин, когда гранулы сефадекса (присоединившие

Heéòðîôèëbr и беэ них } осядут на дно пробирки, подсчитывают число клеток в супернатанте с помощью камеры Го- 40 ряева. Подсчет клеток для опытной (с опсонизированным сефадексом) и контрольной (с неопсонизированным сефадексом) проб ведется по всей камере Горяева (в 225 квадратах). По- 45 казатель СЗв рецепции нейтрофилов (ПРН) — % нейтрофилов, содержащих рецепторы к СЗв, выражается по формуле

ПРН СЗв = 100 — (----- х 100), опыт контроль ратах камеры Горяева из контрольной пробы, з 1361489 4 свежих донорских эритроцитов в методе Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я определения С3 в рецепторов (1 ) .

Составитель В.Литовченко

Редактор И.Шулла Техред А. Кравчук Корректор О. Кравцова

Заказ 6220/45 Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1 13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. проектная, 4

Кроме того, способ обладает хорошей воспроизводимостью, стабильностью тест-системы (срок годности сефадекса, покрытого комплементом, 12 мес и более), может применяться в клинической практике для динамического наблюдения за больными.

Способ определения СЗв рецепции нейтрофилов человека, включающий инкубацию нейтрофилов с носителем, обработанным комплементом, и подсчет клеток, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве носителя используют сефадекс.