Способ определения активности иммунодепрессора биогенной природы

 

Изобретение относится к фармако-. логино Цель изобретения - упрощение способа. Определяют средгшю массу селезенки у интактных мьшей, у мышей, которым вводят гидрокортизон, и у мышей после введения им иммунодепрессора и гид окортизона(, Рассчитывают индекс массы селезенки и активность иммунодепрессора. Масса селезёнки зависит от дозы гидрокортизона, иммунодепрессора и времени после введе шя препарата. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

П9> <Ш

15 A i дц 4 G Ol N 33/53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3926357/28-14 (22) 30. 04. 85 (46) 07,11.87. Бюл. М 41 (71) Харьковский научно-исследовательский институт медицинской радиологии и 2-й Московский государственный медицинский институт им. Н.И,Пирогова (72) С.М.Гринберг, В.Г.Пухальская, Л.С,Толвинская и И,Б.Жукова (53) 612,015 (088,8) (56) Петров P,Â., Манько В.М, Иммуно,депрессоры, N. Медицина, 1971, с. 9. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

ИММУНОДЕПРЕССОРА БИОГЕННОЙ ПРИРОДЫ (57) Изобретение относится к фармако-. логии. Цель изобретения — упрощение способа. Определяют среднюю массу селезенки у интактных мышей, у мышей, которым вводят гидрокортизон, и у мышей после введения им иммунодепрессора и гидРокортизона. Рассчитывают индекс массы селезенки и активность иммунодепрессора, Масса селезенки завйсит от дозы гидрокортизона, иммунодепрессора и времени после введения препарата. 2 табл.! 3506 !5 где n — количество селезенок в группе, Индекс веса селезенки в группе 1 при введении ИД определяют по формуле! = ((1„- Р„, )/(Р„-P,, Ij 100. (2) Зависимость от величины испы13 тываемой дозы препарата D. может быть удовлетворительно аппроксимирована линейной функцией вида (3) + а,E)D где а, и а, — коэффициенты уравнения линейной регрессии.

Оценку значений коэффициентов управления линейной регрессии выполняют методом наименьших квадратов. ВыИзобретение относится к фармакологии и может быть использовано при определении активности иммунодепрессивных препаратов биогенной природы, в тоьг числе полученных из органов и тканей млекопитающих.

Цель изобретения — упрощение способа эа.счет сокращения числа операций, Способ осуществляется следующим образом.

Животных умерщвляют под эфирным наркозом, извлекают у них селезенку и определяют ее вес. Среди селезенок одной группы мышей могут встречаться органы с весом, значительно отличающимся от веса органов в этом же опыте. Для выявления "выскакивающих" значений применяют метод, основанный на оценке максимальных различий полученных результатов. Эти значения весов селезенок исключают из анализа.

Средний вес селезенок Р вычисляют для следующих групп: у интактных мы-, шей Р„ (контроль 1-ИК); у мышей, Которым за 20-40 мин до введения гидрокортизона (ГК) вводили физиологический раствор, Р, (контроль 2-ГК); у мьппей, которым за 20-40 мин до введения гидрокортизона вводили различные дозы иммунодепрессора (ИД), Р (опытные группы).

Средний вес селезенок в группе вычисляют по формуле и

Р = - Р;, 1 (1) и i-1 числяют активность препарата А — дозу, введение которой позволяет получить индекс веса селезенки, равный 507.

5О-а

А= 10 (4) Значимость связи между !и и 0„, которая описывается уравнением (3), оценивают по величине коэффициента корреляции — r. Минимальное значение модуля г, при котором существует значимая связь между !г, и D. c уровнем надежности — Р 0,01, следующее (N - число сравниваемых пар): (r 0,882 0,833 0,789 0,750 0,715

М 4 5 6 7 8

Вес селезенки в 7 к интактному контролю Y зависит от дозы ГК (ДГК) и времени после его введения Т

Контроль 1 . .Мышам из группы интактного контроля (ИК) вводят 0,4 мп физиологического раствора внутримышечно и спустя 20 — 40 мин 0,5 мл внутрибрюшинно.

Y = 75,52-0,43 ДГК + 0,56 Т (5)

В соответствии с формулой (5) при выполнении способа рекомендуется использовать дозу ГК 90-140 мг/кг, время между введением иммунодепрессо ра 20-40 мин, время регистрации эффекта 48-72 ч, Пример. Определяют биологическую активность ИД, выделенных из печени теленка (препарат 1) и тиму35 са теленка (препараты 2а и 2б).Препарат 2б является продуктом очистки препарата 2а ("сырца") на ионообменной целлюлозе ДЕ-52

В эксперименте использовали мьппей (самцов или самок) массой 18-20 г, Содержание, корм и уход обычные.

Использовали гидрокортизон фирмы

"Гедеон Рихтер 1, лиофилизированные препараты ИД.

Готовили суспензию ГК в физиологическом растворе (концентрация 4 мг/мп) и растворы ИД в стерильном физиологическом растворе, Животных случайным образом (рандомизированно) разде50 ляли по 6 мьппей в группу. Всего на испытание одной серии препарата необходимо 7-9 групп.В примере использовано 9 групп мышей.

1350615

Продолжение табл.1

Контроль 2. Мьппам из группы с ГК вводят 0,4 мл физиологического раствора и спустя 20-40 мин внутрибрюшинно 0,5 мл ГК (2 мг/ьпппь).

Семи группам мьппей внутримьппечно 2а ИК 1 вводят в объеме 0,4 мл различные дозы ИД 0,08; 0,2; 0,4; 1,0; 2,0; 5,0; ГК

10,0 мг/мышь. Через 20-40 мин этим иппам внутрибрюшинно вводят 0,5 мл 10

ГК (2 мг/мьппь), Через 72 ч животных под эфирным наркозом декапитировали, 0,2 извлекали селезенки и взвешивали, 0,08

16,2

33,2

0,4

65,9

1,0

56,7

2,0

79,3

Таблица 1

0;, Вес семг лезенПрела5 0

93,6

10,0

74,7 рат

ИД ки, мг

2б

"25

ИК

ГК

1 ИК 1260+9 7

0,016

38,3

ГК

74,7+5,4

85,6+7,2

92,3+10,4

91,,5+6 8

98,1+12 5

0,08

70,1

21,2

0,08

122,6+14,8 . 93,1

0,2

34,3

0,2

0,4

116,1+7,2

83,2

32,7

0,4

143 ?+12 5

138,6+6,1

152,5+17,5

124,9

117,2

1,0

45,6

1,0

2,0

106,8+8,3

62,6

2,0

138,2

5,0

117,8+5,2 84,0

5,0

73,3

112 3+14 3

10,0

Таблица 2

Удельная А, 1 мг/А ИД

Препарат а, а, 0,900

0,460

0,027

51,34 29,33

60,82 31,66

111,78 39,30

0,952

0,883

0,967

2,17

2а

37,04

2б

Результалы определения параметров для расчета биологической активности

ИД представлены в табл,1, 13,9+6,5

57,8+6,3

66,9+8,6

76,4+7,1

94,8+8,1

89,6+9,2

102,3+11,4

110,3+9,7

99,8+7,8

127,2+6,8

60,9+5,9

86,3+6,0

107,4+8,7

В табл,2 представлены результаты определения активности ИД.

1358615

Составитель Н, Ãóëÿåâà

Редактор П,Гереши Техред M.Моргентал Кор ректор М. Мак симиши нец

Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по деЛам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Заказ 5281/46

Производственно-попиграфическое предприятие, г„ужгород, ул.Проектная,4

Определение активности ИД по предлагаемому способу менее трудоемко и занимает меньше времени, в сравнении с известным способом.

Формула изобретения

Способ определения активности иммунодепрессора биогенной природы путем введения его мьппам с последующим э абоем иисследованием селезенкиу контроль-1Î ных и опытных животных, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения числа операций, через 2Π— 40 мин после внутримьппечного введения различных 15 доэ иммунодепрессора внутрибрюшинно вводят гидрокортиэон, через 2-3 сут животных забивают, определяют вес селезенки, рассчитывают индекс веса селезенки по формуле где 1, - индекс веса селезенки, средний вес селезенки у интактных мышей

Р,„ — средний вес селезенки у мышей, которым вводили гидрс>кортизон„ но не вводили иммунодепрессор;

Р— средний вес селезенки у в мышей, которым вводили иммунодепрессор и гидрокортизон а активность иммунодепрессора определяют по формуле 50-с>„

А 10 где A — активность и>иунодепрессора; а, и а„ вЂ” параметры регрессионной зависимости индекса веса селезенки от дозы иммунодепрессора.