Питательная среда для определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам

 

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ К ХИМИРТЕРАПЕВТИЧЕСКИМ ПРЕПАРАТАМ, содержащая источник азота, глюкозу, хлористый натрий и дистиллированную воду, о т л ич а ю щ а я с я тем, что, с целью ускорения определения, она дополнительно содержит тиогликолёвую кислоту, сернокис1П Ей магний, серкокислое железо, хлористый кальций фосфорнокислый двузамещенный калий , в качестве источника она содержит никотиновую кислоту при следующем соотношении компонентов , мас.%: Тиогликолезая 0,0001-0,0002 кислота Никотиновая 0,00014), 0003 кислота Сернокислый 0,01-0,015 магний Сернокислое О,001 -0,002 железо СП Хлористый 0,001-0,0015 кальций Фосфор но кислый двузамещенный 0,05-0,06 калий 0,15-0,2 Глюкоза Хлористый нат0 ,55-0,85 рий 0 ДистиллированN9 9) Остальное ная вода ;О

СО1ОЗ СОВЕТСКИХ

С%И %

РЕСГ1УБ ЛИК (Ю (И? щ) С 12 Q -1/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

0,0001-0,0003

0,001 -0,002

0 05-0 06

О, 15-0,2

Остальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И. ОТКРЫТИЙ (21) 3373389/28-13 (22) 31. -12.81 (46) 07..11.84. Бюл. У 41 (72) В.А. Знаменский, П.В. Лыс, Л.В. Кейсевич, Н.E. Повстяной, П.П. Литовченко., Н:.В. Дехтяр и С.Н. Кузьминский .(7 1) Киевский государственный институт усоверюенствования врачей и

Киевский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови (53) 576.8.093. 1(088.8) (5á) 1. Справочник по микробиологи ческим и вирусологическим методам исследования. Под ред. М.О. Биргера.

М., "Медицина", 1973, с. 178-179.

2. Стратегия и тактика антибиотикотерааии. Краснодар, 1966, с. 44-45 (црототип). (54)(57) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОП РЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ K ХИИИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИМ

ПРЕПАРАТАИ, содержащая источник азота, глюкозу, хлористый натрий и дистиллированную воду, о т л ич а ю щ а я с я тем, что, с целью ускорения определения, она дополнительно содержит тиогликолевую кислоту, сернокислый магний, сернокислое железо, хлористый кальций и фосфорнокислый двузамещенный калий, в качестве источника азота она содержит никотиновую кислоту при следующем соотнощении компонентов, мас.Х:

Тиоглнколевая кислота 0,0001-0,0002

Никотиновая кислота

Сернокислый . магний 0 01-0,015

Сернокислое железо

Хлористый кальций О, 001-0, 0015

Фосфор но кислый двузамещенный калий

Глюкоза

Хлористый натрий 0,55-0,85

Дистиллированная вода

1! 226.9б 2

20

О, 001 "0,002

О. 001-0,0015

Изобретение относится к микробиологии, в частности к определению чувствительности микроорганизмов .к химиотерапевтическим препаратам.

Известна питательная среда—

МПБ — для определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и сульфамидным препаратам методом серийных разведений (1)

Известна также питательная среда для определения чувствитепьности мик роорганизмов к химиотерапевтическим препаратам, содержащая источник азота, глюкозу, хлористый натрий, феноловый красный и дистиллированную воду (2).

Однако известные среды не обеспечивают ускоренного опрЕделения.

Целью изобретения является ускорение определения.

Эта цель достигается тем, что питательная среда для определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам, содержащая источник азота, глюкозу, хлористый натрий и дистиллированную воду, дополнительно содержит тиоглйколевую кислоту, сернокислый магний, сернокислое железо, хлористый кальций и фосфорнокислый двуэамещенный калий, в качестве истбчника азота оиа содержит никотиновую кислоту при следующем. соотнощении компонентов, мас.X:

Тиогликолевая кислота 0 0001-0, 0002 . Никотиновая кислота 0,0001-0,0003

Сернокислый магний 0,01-0,015

Сернокислое железо

Хпористый кальций

Фосфор нокислый двузамещенный калий 0,05-0,06

Глюкоза 0,15-0,2

Хлористый натрий 0,55-0,85

Дистиллировайная . вода Остальное

Питательную. среду используют следумицим образом., Пример 1. Для приготовления среды в дистиллированной воде растворяют исходные компоненты. Среду трехкратно дробно стерилизуют текучим паром на водяной бане при

100 С в течение 15 мин, разливают стерильно по 0,3-0,5 мл в пробирки, закрытые ватно-марлевыми пробками.

Разлитая таким образом среда годна к применению в течение 10-15 ди при условии хранения в холодильнике. Для определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам у больного по обычным правилам берут материал, подлежащий исследованию. Если для исследования взята ткань, ее измельчают и готовят

10-20Х-ную суспензию. Затем в контрольный и опытный ряды пробирок, содержащих по 0,3-0,4 мп жидкой синтетической среды, вносят по

О, 1 мл исследуемой суспеизии. В опытный ряд, кроме того, вводят испытуемые химиопрепараты в объеме по б, 1 мл и количестве, обеспечивающем создание терапевтической концентрации.

Количество опытных рядов соответствует числу испытуемых хнмиотерапевтических препаратов.

Первые пробирки контрольнога и опытного рядов служат для определения исходного значения рН, вторые, третьи, четвертые и пятые — для выявления изменения рН. Рекомендуется измерять значение рН сразу же после посева и спустя 2, 3 и 4 ч инкубирования (4 измерения для каждого исследуемого химиотерапевтического препарата, T.е. 4 пробирки)

Замер рН через 1 ч производить нецелесообразно, поскольку эа это время, как правило, сдвиг рН несущественный. Поэтому при малой концентрации микроорганизмов в материале (менее 10 s 1 мп) и неубедительных данных, полученных спустя

2-3 ч, могут потребоваться дополнительные измерения рй через 4-5 ч. т.е. действие калдого взятого в оПыт химиотерапевтимского npensрата проверяют не в трех, а в пяти пробирках (две резервные).

Такой же набор пробирок испольэу1 ется и s контрольном ряду, где вместо химиотерапевтического препарата вводят по 0,1 мл физиологического раствора хлористого натрия.

Пробирки контрольного и опытного рядов инкубируют при 37 С. По истечении срока наблюдения, т.е, через 2, 3, 4 и 5 ч, содержимое контрольных, а затем опытных пробирок

1122696 последовательно переносят в микроканюли„ входящие в комплект рНметра.

Электрод, служащий для измерения рН в мнкроканюле перед погружением в нее, обрабатывают. 7О -ным спиртом .о трехкратно с последующей трехкратной промывкой стерильной дистйллированной водой и определяют рН среды. 1й

После каждого определения (в контрольной, а затем опытной пробирках) электроды обрабатЫвают указанным об" разом. Учет результатов проводят путем установления разницы,рЮ s.опыт- 15 ком и контрольной рядах. При чувствительности микроорганизмов к исследуемому химиотераневтическому препарату средняя величина разницы в показаниях рН между исходньм.и пос- . 20 ледукицим значениями его в оаытном ряду составляет менее 0,05.

По сравнению с. контролем эта раз.ница, как правило, более 0,1, причем t > 2. В случае устойчщюсти 25 микрофлоры динамика иэменензж рН в контрольном и опытнбм рядах однотипна, а различие значения рй s опы. те и контроле статистически недостоверно (менее 0,05 рЯ, t 4 2). зо

0,012

0,0002

0,002

40

55 При чувствительности микрофлоры к исследуемому препарату средняя величина разницы между исходным и последующими значениями рН среды е1

Пример 2. Готовят три серии питательной среды.

Первый состав содержит, мас.X:

Глюкоза 0,15

Никотиновая кислота 0,0001

Тиогликолевая кислота 0,0001

Хлористый кальций 0,00 f

Сернокислый магний 0901

Сернокислое железо 0,001

Фосфорнокислый двуэамещенный калий 0,05

Хлористый натрий 0,55

Дистиллированная вода Остальное рН 7,4, температураФ37 С.

Второй состав содержт, мас.X:

Глюкоза ОФ17

Тиогликолевая кислота 0,00015

Никотиновая кислота 0,0002

Хлористый кальций 0,0012

Сернокислый магний

Сернокислое железо 0,0015

Фосфор нокислый двузамещенный калий 0,055

Хлористый натрий 0,7

Дистиллированная вода Остальное

Третий состав, мас.X:

Глюкоза 0,2

Никотиновая кислота 0,0003

Тиогликолевая кислота

Хлористый кальЦий 0,0015

Сернокислый магний. 0,015

Сернокислое железо

Фосфорнокислый двузамещенный калий 0,06

Хлористый натрий 0,85

Дистиллированная вода Остальное о рН 2,28, температура+37 C.

В качестве исследуемого материала используют биоптаты из раны больного, определяют чувствительность микроорганизмов биоптатов к пенициллину и гентамицину..

Контрольный и опытные ряды, сос- . тоящие as пяти пробирок каждый, saполняют 0,3 мл среды и О, 1 мл суспензии инфицированной ткани в pasведении 1 20.

В опытный ряд вносят 0,1 мл раствора антибиотика, в контрольный ряд — 0,1 мл физиологического раствора. Инкубируют 3-4 ч и учитывают результаты с помощью рН-метра.

В случае устойчивых культур рН среды в контрольном и опытном рядах кислый, при этом накопление кис— лых продуктов жизнедеятельности микроорганизмов достоверно определяется через 2 ч инкубирования.

1122696

Составитель Г. Смирнова

Редактор И. Николайчук Техред С.Легеза Корректор, А.Тяско

Заказ 8100/23 Тирах 521

ВНИИПИ Государственного комитета СССР но делам изобретений и открытий

113035, Москва, 3-35, Рауиская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП Патент", г. Ухгород, ул. Проектная, 4

on@pre менее 0,05 в то .хе время по сравнению с контролем, где увеличи-. вается накопление кислых продуктов хизнедеятельности микроорганизмов, более 0,1.

Результаты определения чувствительности микроорганизмов с использованием известкой среды получают через 5 ч, с использованием предломанкоВ среды - через 2-3 ч.

Использование предлохенной среды позволяет ускорить определение, повысить его точность за счет учета результатов с помощью рН-метра, 5 а такхе унифицировать способы определения, так как питательная среда пригодна для определения чувствитеаьности микроорганизмов к ширркому кругу химиотерапевтических пре

1о.,паратов и не трерует выделения чис той культуры.