Производные 3-метил-2-азафлуоренона-9,обладающие свойствами ингибиторов глутатионредуктазы

 

Производные З-метил-2-азафлуоренона-9 общей формулы Л О, когда RX НСг или где R NOH, когда RX СНз, обладающие свойствами ингибиторов глутатионредуктазы. С € (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

UHIIHOIH

РЕСПУБЛИК (19) (11) 3(51) С 07 D 221/06 А 61 К 31 40

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21 ) 3469247/23-04 (22) 14 0 (82 (46) 23 ° 02.84. Бюл.9 7 (l2) Н.С.Простаков, Т.Т.Березов, Н.Н.Чернов, С.A.Ñoëäàòoâà, Франсиска

Рохас Эччеваррия (Перу) и Ханна ВуХабиб (Ливан) (71) Университет дружбы народов им.Патриса Лумумбы (53) 547.678.3(088.8) (56) 1. Чернов H. "Энзимология опухолей. М., "Медицина", 1979, с.96.

2. Березов Т. и др. Новый класс ингибиторов глутатионредуктазы в

4 Рефератах докладов и сообщений )) 2

ЯЦ Менделеевского съезда по общей и прикладной химии". М., Наука", 1968, с.117.

3. Вейганд-Хильгетат. Методы эксперимента в органической химии. М., "Химия", 1968, с.413. (54 ) ПРОИЗВОДНЫЕ 3-МЕТИЛ-2-АЗАФЛУОРЕНОНА-9, ОБЛАДАЮЩИЕ СВОЙСТВАМИ ИНГИБИТОРОВ ГЛУТАТИОНРЕДУКТАЗЫ (57) Производные 3-метил-2-азафлуоренона-9 общей формулы са, RXp где R = О, когда RX = PCl или

R = ИОН, когда RX = СР3, обладающие свойствами ингибиторов глутатионредуктазы.

1074870

Изобретение относится к новым производным 2-азафлуорвнона-9, обладающим ферментингибирующей активностью, Известно ингибирование глутатионредуктазы азофеном (дигидрохлорид 2(4-пиперазинил)-10-метил-3,4-диазафенонксазина), который полностью подавляет активность фермента в концентрации 4 10 4 (1$

Недостатком этого соединения является его сравнительно невысокая ингибирующая активность.

Наиболее близким к изобретению является З-метил-2-азафлуоренол, который в концентрации 10 подавляет активность глутатионредуктазы на 30% (2J .

Недостатком этого соединения является его низкая ферментингибирующая активность, Цель изобретения — новые производные 2-азафлуоренона-9, обладающие более высокой ингибирующей активностью по отношению к глутатионредуктазе.

Поставленная цель достигается производными 3-метил-2-азафлуоренона-9 общей формулы (T) 10

da, -RX

1 где R = О, когда НХ = НС7 „или яОН, когда ВХ = CH I, обладающими свойствами ингибиторон глутать онредуктаэы„

Предлагаемь.й способ получения соединений основан на реакции солеобразования (3J и включает взаимодействием 3-метил-2-аэафлуоренона-9 с хлористым водородом или 3-метил-2азафлуоренон-9-оксима с иодистым метилом, Пример 1. Гкдрохлорид 3метил-2-азафлуоренона-9 (соединение

1).

Пример 2. йодметилат 3-ме-тил-2-аэафлуоренона-9-оксима(соединение 2). К 0,3 г (1,4 ммоль) 3:ме1

В раствор 0,5 г 3-метил-2-азафлуоренона-9 в 50 мл абсолютного эфира 50 пропускают ток сухого хлористого водорода до прекращения выпадения осадка. Осадок отфильтровывают, сушат над щелочью, кристаллиэуют иэ абсолютного спирта. Получают 0,51 г (86%) хлоргидрата 3-метил-2-азафлуоренона-9 т.пл.199-200 С

Найдено, % : С 66,8 Н 4,5,N 5,94.

С НюиосХ

ВычисленорВ: С 67 4 Н 4 З N 6 04.

ИК-спектр: 17/О см (С=О) 2800, 60

1700 шир.(=N-). тил-2-аэафлуоренон-9-оксима добавляют 0,32 мл (5 ммоль) йодистого метила. Сразу после растворения оксима вын -осадок йодметилата. Реакционную массу нагревают и течение

20 мин до кипения йодистого метила..

Затем осадок отфильтровывают, сушат н вакууме, кристаллиэуют иэ этанола.

Получают 0,45 г (90%) целевого продукта с т.пл. 240 С (c разложением).

Найдено, В : С 47,8",Н 3,6 И 7,7

Сл НЛИ201

Вычислено%: С 47, 7; Н 3, 7, N 7, 9.

ИК--спектр: 3200 см (ОН) 2800, 1700 (=Л-), 1710 (С=-С, C=N)

Ингибированне глутатионредуктаэы.

Испольэовали высокоочищенные препараты глутатионредуктаэы (ГР), полученные иэ печени н гепатомы крыс с использованием методов фракционирования сульфатом аммония, гель- фильтрации и афинной хроматографии.

Активность глутатионредуктаэы.определили спектрофотометрически по уменьшению оптической плотности НАДФ.

Н при 340 нм н термостатиронанных кюветах при 30 С. Система для опрео деления активности содержала н конечном объеме 2 мг 0,1 N калий.--фосфатного буфера, рН 7,6, 0,1 м НАДФ.Н, 0,5 мм ЭДТА, 1,0 мМ окисленного глутатиона.

Растворы субстрата, кофермента и ннгибиторов готовили непосредственно перед работой. Исследуемые вещества вносили н кювету перед добавлением субстрата. Растворы ингибиторов готонили н исходной концентрации

2 10 М, конечная концентрация достигалась последовательным разведением исходных растворон непосредственно в кювете для определения активности, Начинали Ферментативную реакцию добавлением субстрата, Полное ннгибиронание ГР достигалось при конечной концентрации (1)

5 ° 10 5 М и { 2,) — 4 10 М. Ингибирова,ние на 50% наблюдалось соответственно при концентрации (1) — 2,5 10 М и (2) — 2 .10 9N. Ингибиронание обратимо, так как активность ГР восстанавливалась после снижения концентрации ингибитора разведением спустя 1 ч после предварительной инкубации фермента с избытком ингибитора.

Ингибиронание носит конкурентный характер по отношению к субстрату

{глутатиону) и бесконкурентный по отношению к коферменту (НАДФ.Н,.

Ингибирующее действие (1) и (2) на ГР превосходит ранее показанное влияние аэофена, .который полностью ингибировал ферменты н концентрации

4 10 " N, а также действие хлоргидрата З-метил-2-азафлуоренона, подавляющего н концентрации 10 N активность

ГР всего на ЗОВ.

1074870

Составитель A Орлов

Редактор Г.Волкова Техреду,Гергель Корректор C.(аекмар

Заказ 452/23 Тираж 410 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, ßîñêâà, F-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r.ужгород, ул.Проектная-,4

Такии образом, соединения (1 ) и (2) обладают специфическим ингибирующим действием на фермент глутатионредуктаэу, превосходящим действие аналога азофена и хлоргидрата 3-метил-2-аэафлуоренона.