Способ внутривидовой дифференциации @ @ биотипа эль тор
СПОСОБ ЙНУТРИВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ VrBRIO CH01ERAE БИОТИПА ЭЛЬ ТОР путем выращивания микроорганизмов на питательной среде в присутствии индикатора с последующей дифференциацией по литической активности , о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью упрощения способа, выращивацие осуществляют На поверхности питател| ной среды, содержащей в качестве индикатора деэЬксихолат натрия в Кондейтрации 0,5-3 мг/мл среды.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (5п С 12 Q 1/04
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
1
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3360151/28-13 (22) 16.12.81 (46) 23.07.83. Бюл. Р 27 (72) Т.A. Кудрякова (7l) Ростовский-на-Дону государственный противочумный институт (.53) Д 616-07(088.8) (56) 1. Гончарова Н.С., Карасева 3..Н.
Особенности бактериоциногении у холер ного вибриона. — Проблемы ООИ, 1970, в ° 2 (12), Саратов, институт Микроб, с, 24,,SU„„1030410 A (54) (57 ) . СПОСОБ ВНУТРИВИДОВОЙ ДЙФФЕРЕНЦИАЦИИ VIBRI0 CHOlERAE SHOTHIlA
ЭЛЬ TOP путем выращивания микроорганизмов на питательной среде в присутствии индикатора с последующей дифференциацией по литической активности, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, выращивание осуществляют на поверхности питательной среды, содержащей в качеетве индикатора. деэоксихолат натрия в. концентрации 0,5-3 мг/мл среды.
1030410
Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам дифференциации штаммов холерных вибрио-. нов, и может быть использовано в диагностических и научно-исследовательских целях. 5
Известен способ внутривидовой дифференциации vibrio cholerae биотипа Эль Тор путем выращивания микроорганизмов на питательной среде в толще arapa B присутствии индикатора-10 чувствительных к вибриоцину микроорганизмов, с последующей дифференциацией по литической активности - величине зоны лизиса индикаторного штамма tl).
Однако известный способ сложен в осуществлении., Целью изобретения является упрощение способа.
Эта цель достигается тем, что согласно способу внутривидовой дифференциации vibrio choleiaе.биотипа Эль
Тор путем выращивания микроорганизмов на питательной среде в присутствии индикатора с последующей дифференциацией по литической активности, выращивание осуществляют на поверхности питательной среды, содержащей в качестве индикатора дезохсихолат натрия в концентрации 0,5-3 мг/мл среды. 30
Способ осуществляют следующим образом.
Одну петлю агаровой. культуры засевают в 5 мл бульона (рН 7,7-7,8), выращивают 4. ч при 37 С. Затем одну 35 каплю полученной бульонной культуры наносят на поверхность агара Мартена, содержащего дезоксихолат натрия. Рецепт приготовления агаровой среды:
: навеска 50 мг дезоксихолата натрия 40 вносится в 100 мл растопленного агара Мартена (рН 7,6-7,8). Среду разли-. вают в 5.чашек Петри, после застывания агар совершенно прозрачный. Через сутки выращивания при 37 С,культуру убивают парами 40%-ного формалина в течение 48 ч, помещая смоченную Формалином вату в крышку. чашки Петри при комнатной температуре. Учитывают результаты после удаления ваты с формалином. Среда приобретает молочносерую окраску, непрозрачная. Вокруг колоний культуры образуется зона про- . светления агара в виде ореола. Каждый штамм холерного вибриона имеет характерный ореол и различается по величине, степени прозрачности и по количеству ободков мутных и прозрачных. По количеству ореолов холерные штаммы дифференцируются иа 2 типа:
Х.тип - образующие один ореол, и 60
XI тип - 2 ореола; по величине ореолов: б размеров - 0,5-1-1,5 2-3
4 мм; по степени прозрачности на 3 типа - мутный, полупрозрачный и прозрачный. Так, штамм 517/130 образует .65 один узкий (1 мм), мутный ореол, что свидетельствует о его слабой литической активности. То есть величина ореола при измерении радиуса от края макроколонии до края плотной среды у штаммов, обладающих слабой литической активностью, будет 0,5-1 мм, и возрастает от 2 до 4 мм у активных по лизису культур. По этому признаку штаммы легко дифференцируются между собой. Так же культуры, образующие два ореола, отличаются от куль- тур с одним ореолом. Но и внутри штаммов, имеющих два ореола, возможна дифференциация. Так, штамм 2635 образует у края колонии прозрачный узкий ореол (1 мм), а потом мутный (1,5 мм), в то же время штамм 8556 полупрозрачный широкий ореол (3 мм) и узкий мутный (1 мм).
Пример 1. Отсевают в две пробирки с 5 мл бульона по одной. петле агаровых культур вибрионов Эль Тор
9949 и 517/130. Выращивают в течение 4 ч при 37 С так, чтобы концентрация микробных клеток составляла
h ° 10 -,П ° 10 кл/мл.Готовят плотную пи9 тательную среду, содержащую 0,5 Mr/ìë деэоксихолата натрия, для чего навеску 50 мг дезоксихолата натрия растворяют в 100 мл агара Мартена и разливают в 5 чашек Петри по 20 мл.
На подсушенный агар на расстоянии
4 см друг от друга наносят по одной капле выросших бульонных культур и ставят в термостат при 37 С на сутки.
Затем посевы культур убивают парами формалина путем нанесения 40%-ного раствора Формалина на тонкий слой ваты, помещенной в крышку чашки Петри. Чашки оставляют при комнатной . температуре 48 ч. Учитывают резуль таты по наличию и величине (в мм) зоны просветления вокруг макроколоний сравниваемых штаммов. Штамм вибрионов Эль Тор 9949 образует широкий (2 мм) прозрачный ореол просветления в агаре. Штамм 517-130 образует узкий (1 .мм) мутный ореол вокруг макроколонии.
Пример 2. Отсевают в две .пробирки с 5 мл бульона по одной . петле агароВых культур вибрионов
Эль Тор 9949 и 517/130. Выращивают в течение 4 ч при 37 С. Готовят плот.ную питательную среду с 1 мг/мл дезоксихолата натрия, для чего навеску 100 мг дезоксихолата натрия растворяют в 100 мл агара Мартена и разливают в 5 чашек Петри по 20 мл. По" сев и учет проводят так же, как в.. примере 1.
Пример 3. Отсевают в 2 про.бирки С 5 мл бульона по одной петле агаровых культур вибрионов Эль Tgp
9949 и 517/130 Выращивают в течение 4 ч при 37. С. Готовят плотную питательную среду с 2 мг/мл диэоксихо3 1030410 4
Т. лата натрия. Для этого навеску 20 мг чительных признаков не позволяет исдезоксихолата натрия растворяют в пользовать компетентные доноры и ре100 мл агара Мартена и разливают в ципиенты. Кроме того, способность
5 чашек Петри по 20 мл. Посев и учет к продукции вибриоцина проявляется проводят так же, как в примере l. у штаммов только после 10-15 пересевов на жидких и плотных питательных
Предлагаемый способ дает возмож- средах. ность легко дифференцировать как ти- Эффективность предлагаемого спопичные штаммы холерных вибрионов, соба составляет 100В, в то время как так и мутанты, полученные различны . по известному способу ни в ФД йЖ слуми методами. IIpa этом облегчается f0 чае не удается выявить .вибриоцины у дифференциация шзаммов одного серо- заведомо известных продуцейтов с ис.вара и фаговара, что является крайне пользованием в качестве индикаторных удобным при проведении генетических культур .типичных штаммов холерных исследований, когда отсутствие отли- вибрионов.
Составитель P. Смирнова
Редактор О. Полозка . 1ехред. С,Мигунова: Корректор. А. Зимокосов . йее е «й» вай» е мв мюю
Заказ 5134/29 Тираж . 523 .. Подписное
ВНИИПИ Росударственного комитета СССР по делам изобретений и открытий:
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
МаВ @аа . Филиал ППП Патент, r.: УжгорОд,:ул. Проектная, 4
