Влажная камера для исследования нативных клеток

Полезная модель относится к устройствам для исследования нативных клеток методом атомно-силовой микроскопии (АСМ), и может быть использована в области физиологии и морфологии крови. Влажная камера для исследования нативных клеток включает чашку из пластикового материала, на дне которой установлены рельсы, с возможностью крепления на них предметного стекла с исследуемым образцом. Сверху, на ободе чашки, закреплена эластичная мембрана с отверстием для кантилевера. Предлагаемое техническое решение обеспечивает расширение арсенала средств для сканирования при изучении нативных клеток крови методом атомно-силовой микроскопии и позволяет получить объективные сведения о геометрических параметрах нативных клеток.

Полезная модель относится к устройствам для исследования нативных клеток методом атомно-силовой микроскопии (АСМ), и может быть использована в области физиологии и морфологии крови.

В области биотехнологии известен метод часовых стекол для выращивания клеток и тканей. Для осуществления данного метода используют чашку Петри, в которой размещено часовое стекло, а сверху чашка закрыта влажной ватой или фильтровальной бумагой для предотвращения высыхания. Существуют модификации подобного устройства, при которых часовое стекло покрывается крышкой, приклеенной воском и другие (http://www.biotechnolog.ru/acell/acell2_1.htm).

Недостатком устройства является то, что чашка плотно закрыта для предотвращения высыхания. Кроме того, использование этого устройства для выращивания культур не позволяет экспериментатору проводить манипуляции в ходе культивирования клеток.

Наиболее близким по своей сущности к заявляемому техническому решению является жидкостная ячейка MP3LC к АСМ, включающая титановую чашку, штуцера для подачи жидкости (газа), мембрану, которая одевается на держатель зондового датчика, и плотно закрывает чашку сверху при измерениях, держатель чашки на унифицированной каретке для установки чашки на сменное основание, установочную насадку для установки держателя с мембраной на измерительную головку (Руководство пользователя «Зондовая НаноЛаборатория ИНТЕГРА Вита (конфигурация на базе инвертированного оптического микроскопа Olympus X71), Москва, 2006 г.).

Недостатком жидкостных ячеек, используемых в зондовых микроскопах является сканирование клеток в жидкости, что не позволяет получить объективные результаты, так как подготовка образцов требует прочной адгезии клеток к подложке. Обработка клеточных поверхностей химическими агентами (например, полилизином, ионами Са2+ и др.), вызывает разрушение или активацию клеточных структур и искусственное искажение их формы. Кроме того, в процессе сканирования возможно «сталкивание» с подложки клеток крови острием зонда или их прилипание к кантилеверу. Все это затрудняет получение сканов и объективных данных о форме и размерах клеток.

Задачей предлагаемого технического решения является расширение арсенала средств для сканирования при изучении клеток крови методом атомно-силовой микроскопии, обеспечивающих получение объективных сведений о геометрических параметрах нативных клеток.

Поставленная задача решается с помощью предлагаемой влажной камеры для исследования нативных клеток, включающей чашку, держатель чашки на унифицированной каретке для установки чашки на сменное оптическое основание, установочную насадку для измерительной головки с эластичной мембраной, причем, чашка выполнена из пластикового материала, на дне которой установлены рельсы, с возможностью крепления на них предметного стекла с исследуемым образцом, кроме того, эластичная мембрана выполнена с отверстием для кантилевера и закреплена на ободе чашки.

Отличительными признаками предлагаемого устройства являются то, что:

- чашка выполнена из пластикового материала, прозрачность которого позволяет выбирать объект сканирования в инвертированном микроскопе;

- на дне чашки установлены рельсы, на которых крепится предметное стекло с исследуемым образцом, что позволяет в пространство между дном чашки и стеклом с исследуемым образцом добавлять жидкость, позволяющую создавать влажную среду для сохранения нативности клеток;

- эластичная мембрана выполнена с отверстием для кантилевера и закреплена на ободе чашки, что позволяет исключить помехи со стороны мембраны при настройке лазерного луча на кантилевер и точно определить его резонансную частоту, с которой он сканирует клеточную поверхность.

Устройство представлено чертежами, на которых изображено:

Фиг.1 - вид открытой камеры сверху;

Фиг.2 - продольный разрез камеры в сборе для сканирования.

Влажная камера для исследования клеток включает чашку 1, рельсы 2, прикрепленные ко дну чашки, на которых закреплено предметное стекло 3 с исследуемым образцом 4, эластичную мембрану 5, в центре которой выполнено отверстие 6 для кантилевера 7.

Принцип работы влажной камеры: чашка 1 до уровня рельсов 2 заполняется жидкостью, на рельсы 2 крепится предметное стекло 3 с исследуемым образцом 4, сверху чашка 1 закрывается эластичной мембраной 5 с отверстием 6 для кантилевера 7. Чашка 1 устанавливается на оптическое сменное основание 8 инвертированного микроскопа, устанавливается сканирующая головка (на рис. не показано) инвертированного микроскопа, таким образом, чтобы кантилевер 7 попал в отверстие 6 эластичной мембраны 5. В ходе сканирования во влажной камере образуются пары жидкости под действием лазерного луча, который отражается от кантилевера 7. С помощью системы видеонаблюдения на образце находят клетки и выполняют процедуру сканирования. Полученные результаты (сканы клеток с высоким разрешением) обрабатывают с помощью программного обеспечения.

Таким образом, предлагаемое техническое решение обеспечивает расширение арсенала средств для сканирования при изучении нативных клеток крови методом атомно-силовой микроскопии и позволяет получить объективные сведения о геометрических параметрах нативных клеток.

Влажная камера для исследования нативных клеток, включающая чашку, сменное оптическое основание и эластичную мембрану, отличающаяся тем, что чашка выполнена из пластикового материала, на дне которой установлены рельсы с возможностью крепления на них предметного стекла с исследуемым образцом, кроме того, эластичная мембрана выполнена с отверстием для кантилевера и закреплена на ободе чашки.