Способ размораживания биологических объектов

О П И С А Н И Е („,997640

ИЗЬВРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 30.10.79 (21) 2832965/28-13

Ф с присоединением заявки №вЂ” (51) М. К .

А 01 N 1/02

Гесудлрстееиимй кемитет

СССР (23) Приоритет— (53) УДК 620.192..42 (088.8) Опубликовано 23.02.83. Бюллетень № 7

Дата опубликования описания 28.02.83 де делам иаабретеиий и еткрмтий

1 ,:„. 1

1: й, Ь; д фа.;

"1

" - ««-;&.««

Институт проблем криобиологии и криомедицины

AH Украинской CCP (71) Заявитель (54), СПОСОБ РАЗМОРАЖИВАНЙЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ

ОБЪЕКТОВ

Изобретение относится к криобиологии, а именно к способам размораживания биологических материалов.

Известен способ размораживания спермы быков в ампулах объемом 1-1,5 мл путем погружения их-в воду с температурой

30 — 40 С на 1 — 1,5 мин и выдерживания в ней до тех пор, пока в ампулах останется тонкий стержень льда. Дальнейшее оттаивание проводится при комнатной температуре (1) о

Известен способ размораживания био.логических объектов в водяной бане при воздействии колебаний (механических) (21 .

Недостатками известных способов является низкая выживаемость клеток, обусловленная неравномерностью распределения температуры по объему контейнера и длительностью процесса размораживания.

Целью изобретения является повышение выживаемости клеток.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу размораживания биоло-. гических объектов в водяной бане при воздействии колебаний, колебания производят ультразвуком интенсивностью — 3 Вт/см и частотой 20 — 2640 кГц.

Способ осуществляют.следующим образом.

Замороженный в ампулах или в контейнерах биологический материал погружают в теплую воду (водяную баню) с температурой 40 — 45 С. Одновременно через воду пропускают ультразвуковые колебания интенсивностью 1 — 3 Вт/см2 и частотой 20—

2640 кГц. Оттаивание длится до тех пор, пока температура клеток не достигнет 5—

l0 С. После чего ампулы или контейнеры с биологическим материалом вынимают из ванны и прекращают воздействие ультразвуковыми колебаниями.

Пример 1. Контейнеры с костным мозгом, замороженным до -196 С с 15% ПЭ0-400, опускают в водяную баню с температурой

40 С. Одновременно с этим головку преобразователя ультразвуковых колебаний вводят в акустический контакт с баней. Интенсивность УЗ-колебаний составила

1,0 Вт/см, а частота 20 кГц. После того, как температура оттаявшего костного мозга достигла 37 С, контейнер вынимают из бани, а УЗ-колебания отключают. Выживает в среднем 92,2+3,5%клеток.

997640

Составитель Н. Алексеева

Редактор Н. Джуган Техред И. Верес Корректор г1. Бокшан

Заказ 980/1 Тираж 719 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035; Москва, Ж вЂ” 35, Раушская иаб., д. 4/5 филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Пример 2. Контейнер с костным мозгом, замороженным до - 196 С с 15 /о ПЭΠ— 400, опускают в водяную баню с температурой

40 С. Включают источник УЗ-колебаний, находящийся в акустическом контакте с

5 банеи. Интенсивность УЗ-колебаний

3.5 Вт/см, частота 3500 кЦ. После того, как температура оттаявшего костного мозга составила 37 С, контейнер вынимают из бани, а источник УЗ-колебаний отключают. Выживает 93,9 +- 3,9о/о клеток. 1а

Пример 8. Контейнер с костным мозгом, замороженным до -196 С с 15 /р ПЭ0-400, опускают в водяную баню с температурой

40 С, включают источник УЗ-колебаний с интенсивностью 0,8 Вт/см, частотой 15 кГц.

После того, как температура оттаявшего костного мозга составит 37 С, контейнер вьшимают из бани, источник УЗ-колебаний выключают. Выживает 83,0 +- 4,5 /о клеток.

Пример 4. Контейнер с костным мозгом, замороженным до - !"96 -С с 15% ПЭΠ— 400, опускают в водяную баню с температурой

40 С одновременно включают источник

УЗ-колебаний, интенсивность колебаний

3,5 Вт/см, частота 3500 кГц. После того, ка к температура оттаявшего мозга составила 37 С, контейнер вынимают из водяной 25 бани, а источник УЗ-колебаний отключают

Выживает 84,5 4,0 /о клеток.

Приведенные примеры показывают, что сочетание действия нагрева и УЗ-колебаний способствует повышению сохранности живых клеток в среднем на 20 — 25/о в

30 диапазоне частот 20 — 2640 кГц и интенсивности колебаний — 3 Вт/см . При выходе характеристик УЗ-колебаний за указанные пределы выживаемость клеток резко снижается.

Сочетание действия нагрева и УЗ-колебаний ускоряет теплообмен между стенками контейнера и теплой водой с одной стороны и между нагреваемыми стенками и содержимым контейнера с другой стороны.

Ускорение теплообмена происходит с одновременным увеличением равномерности распределения температур в ванне и размораживаемой жидкости, что устраняет опасные градиенты температур и способствует выживаемости клеток на 20 — 25 /,.

Формула изобретения

Способ размораживания биологических объектов в водяной бане при воздействии колебаний, отличающийся тем, что, с целью повышения выживаемости клеток, колебания производят ультразвуком интенсивностью 1 — 3 Вт/см и частотой 20 — 2640 кГц.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Осташко Ф. И др. Рекомендации по замораживанию и хранению спермы быков при температуре — 196 С. Харьков. «Пра11ор»

1963.

2. Виноград-Финкель Ф. P. и др. Методы долгосрочного хранения в замороженном состоянии эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, предназначенных для трансфузий. Методическое письмо. М., 1969 (прототип).