Способ получения биологической оболочки для закрытия ожоговых ран
Оп ИСАНИЕ
Союз Советских
Социалистических
Республик
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ {6! ) Дополнительное к авт. саид-ву (22)Заявлено08.04.81 (2l) 3275610/28 13 (51)NL. Кл. с присоединением заявки М A 01 f4 1/00 Гееудврстееииий кемитет СССР ае йевам иэебретеиий и еткрмтий (23) Приоритет (53) УДЭ(616 001, . 4(088.8) Опубликовано 15,02.83. Бюллетень М 6 Дата опубликования описания 15.02.83 В. Б. Сучков, P. И. Асфандияров, Г. M. Гладче о 4 и С. Б. Моталин 1 - - .с:„:, ; .,, -. 1 2 < Астраханский государственный медицинский институт им. А. B. Луначарского (72) Авторы изобретения (iI) Заявитель.(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ ОБОЛОЧКИ ДЛЯ ЗАКРЫТИЯ OROFOBbIX PAH Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии и может применяться при стерилизации н консервировании амниотической оболочки для закрытия ею ожоговых ран. Известен способ получения биологической оболочки для закрытия ожоговых ран путем помещения ее в слабый pacraop формалина (1 ), Однако данный способ не позволяет достичь достаточного снижения ее иммуноспецифичнос ги. Наиболее близким к предлагаемому является способ получения биологической оболочки для закрытия ожоговых ран пу- 1» тем обработки плодных оболочек в растворах катионного детергента и антисептиков (2.), Однако в процессе консервирования амниотической оболочки не происходит 20 снижения ее иммуногенных свойств, что приводит к развитию реакции отторжения в сроки 14 30 cyr. после наложения ее на ожоговую поверхность, а недостагоч2 ная антисепгичность этого способа не обеспечивает стерильности трансплантага, на всех этапах консервирования Целью изобретения является снижение иммуноспецифичнос ти амнио тической оболочки и придание ей антибактериальной активности. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения биологической оболочки для закрытия ожоговых ран путем обработки плодных оболочек в растворах кагионного детергерта и актисепгиков, производят отмывку от крови плодных оболочек, полученных от рожениц в нестерильных условиях, с одновременной стерилизацией, путем встряхивания в гер« метичном сосуде с раствором Ж 1, содержащем, вес. ч.: Э танолмеркурхлорид 1,0-1,5 Цетилпирэщиний хло рид l,0-1,5 Вода бидистиллированная Остальное 995718 l,0 0,4 3 цри соотношении веса ткани к объему раствора (3.:15-20) цри 18-25 С 6-12 ч до прекращения окращиваиия све-, жей порп .ни раствора в зеленоватый цвет, затем стерилизуют и консервируют в герметичном сосуде с раствором, содержащим, вес. ч.: Этанопмеркурхлорид 0,4 0,6 Цетилпиридиний хлорид 0,4-0,6 1а Натрий хлористый 7,2-7,8 Вода бидистиплированная Остальное цри этом же соотношении веса ткани к объему раствора и той же температуре 5,0 8,5 ч с продолжением хранения ее в этом же растворе при 2-4о С 200240 ч, затем производят отделение амниона от хориона1 в кювете с раствором N 1 при 20-25 о С с последующей стерн-рй лизацией амниона в этом же растворе при 18-25 0 С 6-12 ч, после чего стерилизованную амниотическую оболочку помещают в раствор, содержащий, вес. ч: Фурацилин О, 15-О,2О Магний сернокислый 99,0-101,0 Вода бидистиллированная Остальное при том же соотношении веса ткани к 5й объему раствора при 2-4 С, где хранят до использования 480 4800 ч.. Пример 1. Плодную оболочку, заготовленную от роженицы в нестерильных условиях, помещают в герметичный сосуд с раствором % 1, содержащим, вес. ч.: З5 Э танолмеркурхлорид 1,0 Бетилциридиний хлорид Воде бидис тиллироВен не 997,0. при соотношении веса ткани к объему раствора 1:15 вес. ч. Обработку трансплентата производят при 18 о С путем встряхивания с режимом 45 восемь встряхиваний в минуту. Через 8 мин производят смену раствора. После прекращения окрашивания шестой порции раствора в зеленоватый цвет еллотрансплантат продолжает храниться в этой порции раствора % 1 6 ч. Затем во флако50 не с аллотрансплантатом плодной оболочки производят замену раствора ph 1 на раствор M 2, содержащий (соотношение веса ткани к объему раствора 1:15), вес. ч.: Э танолмерк урхлорид Цетилпиридиний хлоpal 0,4 Натрий хлористый 7,2 Вода бидистиплированная 991,0 в котором он.сохраняется при 18 С 5 ч и цоследукццим хранением в этом же растворе при 2 о С 200 ч. После этого аллотрансцлантат плодной оболочки извлекают иэ флакона с раствором М 2 и помещают в кювету, наполненную раствором М 1, где производят отделение амниона от хориона при 20 С, затем стерипизуют отделенную амниотическую оболочку во флаконе с раствором No 1 при 18 С 6 ч, После этого производят замену раствора l4 1 на раствор M 3, содержащий (соотношение веса ткани к объему pacraopa 1:15) вес. ч: Фур ецнлин 0,15 Магний сернокислый 99,0 Вода бндис тиллированная 898,80 в котором елпотрансплантат амниотической оболочки хранится при 2 о С 480 ч, При исследовании экстракта иэ этого аллотрансплантата методом дискэлектрофореэа выявляют одну белковую фракцию (до обработки предлагаемым способом в этой емниотической оболочке выявлено восемь фракций). Конденсация общего белка в экстракте иэ этого аллотрансплантата составляет 18% по сравнению с его содержанием в необработанной амниотической оболочке. Методом иммуноэлектррфореза в экстракте иэ еплотрансплантета амниотической оболочки выявляют одну дугу преципитапии (в экстракте нз этой амниотической оболочки до обработки денным способом выявлено шесть дуг преципитации) . Антимикробную активность изучают путем помещения диска диаметром 1 см, вырезанного иэ этого трансплантата, на поверхность arapa, засеянного золотистым стафилококком. Зона задержки роста микробов вокруг аллотрансплантата 8 мм. Вокруг диска, вырезанного иэ емниотической оболочки до обраббтки предлагаемым способом, эона задержки роста золотистого стафилококке не выявлена. Пример 2 ° Плодную оболочку, заготовленную or роженицы в нестерильных условиях, помещают в герметичный сосуд с раствором №. 1, содержащим, вес.ч: Э тенолмерк урхлорид 1,5 Цетилпиридиний хлорид 1,5 995718 Вода бидистиллиро--, ванная .. - 998,0 при соотношении веса к обьему раствора 3.:20. Обработку трансплантата про-— изводят- при 25 С путем встряхивания s с режимом десять встряхиваний в минуту. . Через 5 мин производят смену раствора.— После прекращения окрашивания восьмой порции раствора в зеленоватый цвет, аллотраисплантаг йродолжает храниться в t0 атой порции раствора № 1 12 ч. Затем во флаконе с аилотрайсплантагом плодной оболочки производят замену раствора ¹ 1 на раствор 34 2, содержащий (соотношение веса ткани-к объему -расгвора М 3.:20), вес. ч: Э танолмеркурхлорид 0,6 Бетилпиридиний хло; рид 0,6 Натрий хлористый 7,8 29 Вода бидистиллированная 992,0 в котором он хранится при-25 С S,5-g с последующим хранением в этом же растворе при 4о С 240 ч. После этого аллотрансцлантат плодной оболочки извилекают иэ флакона с раствором № 2 и помешают в кювету, наполненную раствором ¹ l, где производят отделение амниона от хориона при .25 о С, затем стерилиэуют отделенную амниотическую оболочку во флаконе с. раствором N l при 25 С о 6 ч. После этого производят замену рас твора № 1 на раствор №. 3, содержащий (соотношение веса ткани к объему рас- Зз гвора 4.:20), вес. ч: Фурацилин . - - 0,20 Магний сернокислый 101,0 Вода бндрован ная 899 0 40 в котором аллотрвнсплангаг амниогичес кой- оболочки хранится при. 4 о С 4800 ч, При.исследовании экстракта из этого; вллотранспиантвта методом дискэлектро- .. 4$ фореэа выявлены две белковые фракции .(до обработки предлагвемъ1м способом в этой амниотической оболочке выявлено девять фракций) . Концентрация общего белка в экстракте as этого аллотрансппантата составляет 46% по сравнению с его 30 содержанием в необработанной амниогической оболочке. Методом иммуноэлектрофореза в эксграге as аллотрансплантвта амниотической оболочки выявлена одна дуга преципитации (в экстракте из этой амниотической оболочки:до обработки .предлагаемым способом выявлено семь. -дуг препнпитации) . б Антимикробная активность изучена путем помещения:диска диаметром 1 см, вырезанного из этого аипотрансплан тата, на поверхность arapa, засеянного золотистым стафилококком. Зона задержки роста микробов вокруг аллотранспланта та составляет 9 мм. Вокруг диска, вырезанного из амниотической оболочки до обработки предлагаемым способом, зона задержки роста золотистого стафилококка не выявлена. Полученная биологическая ооолочка, стерилизованная, консервированная и насыщенная антисептиками, была применена у больного Д, 10 лет, диагноз: ожог I — Й! А степени шеи, груди, спины, площадью 10%. Ожоговая рана была одномоментно закрыта на площади около ,500 см2 . Лечение больного завершилось . выздоровлением с полной эпигелизацией ожоговой поверхности через одиннадцать суток после наложения на нее биологической оболочки, обрабо1анной предлагаемым способом .. Предложенный способ позволяет цолучить биологическую оболочку со сниженной иммуноспепифичносгью, о чем сшщетельствует уменьшение содержания в экс. трактах из нее общего белка, обеднение ее ангигенной структуры, с антибактериалькой aKTHBHocr насыщенную вн гисептиками. Формуиа изобретения ! Способ получения биологической оболочки для закрытия ожоговых ран путем обработки плодных оболочек в растворах катионного дегергента и антисептиКов, о r л и ч а ю щ и и с. я тем, что, с пелью снижения иммуноспецифичнос ги амниотической оболочки и придание ей антвбактериальной активности производят отмывку or крови пиодных обоиочек, по« лученных or рожениц в нестерильных условиях, с одновременной стерилизацией путем встряхивания в герметичном сосу:де с раствором ¹L, содержацим, вес. ч: Э танолмеркурхлорид . 1,0-1,5 Цетилйирнднйнй хлорнд 1,0-1,5 Вода бидистнллнрован« ная Остальное при соотношении веса ткани к объему раствора (1:15 20) при 18-25 С 6-12 ч до прекращения окрашивания свежей порции раствора в зеленоватый цвет, затем стерилнзуют и консервнруюг в rep0,4-0,6 7,2-7,8 7 9@5718 8 метичном сосуде с раствором, содержа- Фурацилин О, 1 5-0,20 шими весs ч Магний сернокислый 99,0 -101,0 Этаиолмеркурхлорид 0,4 0,6 Вода бидистилпированБетилпиридиний хло- RasI Ос тальное рид при том же соотношении веса ткани к обьНатрий хлористый ему раствора при 2-4 С 480-4800 ч. Вода бидистиллированная Ос тальное Ис точники информации, при том же соотношении веса ткани к объ- принятые во внимание при экспертизе ему раствора и той же температуре 5,0- 16 l. Козлова Лавриненко Т, Е., Круг8,5 ч с продолжением хранения ее в этом ллоов вК М. Использование слабых Расже растворе при 2 4о С 200 240 ч, за- твоРов фоРмалина длЯ хРанениЯ кожных тем производят отделение амниона or xo- трансплантатов, — В кн.: Ожоговая бориона в кювете с раствором % 1 при . лезнь, патогенез, клиника, лечение. Киев, 20-25о С последующей стерилизацией . 13 1975, с. 10-30. амниона в том å растворе при 18-25 С о 2. R. Kl en. .n Research tn burus 6-12 ч,после чего стерилизованную амни- (Eds), P. Hotter. Т.1 . Bare!aó, L. Коотическую оболочку помещают в pacrsop, ni skara, Bern, Stutgart. Vienna. содержащий, вес. ч: Hans Huber, 197I, р..289-292. Составитель С. Малютина Редактор В, Ковтун Техред Л.Пекарь Корректор В. Прохненко Заказ 750/1 Тираж 719 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Филиал ППЛ Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4
