Способ количественного определения свободной и связанной нейраминовой кислоты в биологической пробе

Авторы патента:

G01N33/52 - использование соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, например реактивной бумаги

Союз Советских

Социалистических

Респубики

ОПИСАНИЕ

ИЗО6РЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

< 898326 (6I ) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 05.07,76 (21) 2382013/28-13 с присоединением заявки,йв (23) Приоритет

Опубликовано 15.01.82. Бюллетень,йъ 2

Дата опубликования описания 17.01.82 (53)M. Кл.

0 01H 33/52

Веудврстеиаый квинтет

СССР ао делам изебретений н открытей (53) УДK 616-07 (088.8) (72) Авторы изобретения

В. А. Люльева и Г. И. Сименко

Всесоюзный научно-исследовательский институт применения гражданской авиации в народном хо (54) СП СОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СВОБОДНОЙ

И СВЯЗАННОЙ НЕЙРАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ В БИОЛОГИЧЕСКОЙ

ПРОБЕ

Изобретение относится к медицине и касается исследования веществ в тканях человека и животных.

Известен способ количественного определения свободной и связанной нейраминовой кислоты в биологической пробе пу5 тем гомогенизации ее с последующим отделением примесей последовательной обработкой периодатом натрия, арсенитом натрия и тиобарбетуровой кислотой, двой!

О ной экстракции циклогексаном и отделения из экстракта свободной и связанной нейраминовых кислот (1) .

Однако известный способ не позволяет получить точные результаты.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Эта цель достигается тем, что способ количественного определения свободной и связанной нейраминовой кислоты в биологической пробе осуществляют путем гомогенизации ее с последующим отделением примесей последовательной обработкой периодатом натрия, арсенитом натрия и

2 тиобарбитуровой кислотой, двойной экстракции циклогексаном и отделения из экстракта свободной и связанной нейраминовых кислот. К гомогенату ткани после обработки его периодатом натрия добавляют сернокислый аммоний до полного насыщения при 50 С, выпавший осадок удаляют и последующей обработке подвергают надосадочную жидкость.

Пример . Определяют количество свободной и связанной нейраминовой кислоты в эритроцитах. Для этого подготав-. ливают 2 образца гемолизата эритроцитов по 100 мг и каждый из них, помещенный в пробирку, обрабатывают следующим образом.

B пробирку добавляют 0,05 мл 0,2 М раствора периодата натрия и оставляют на 1 ч при комнатной температуре. Затем для отделения гемоглобина туда же добавляют 1 мл насыщенного при 50 С о раствора сернокислого натрия, центрифугируют при 6000 об. мин 15 мин и отделя89832

3 ют надосадочную «» -ть от гемоглобина, выпавшего в осадок, К надосадочной части, освобожденной от гемоглобина, добавляют 0,5 мл 10%ного раствора арсенита натрия и 1,5 мл

0,6% -ного раствора тиобарбитуровой кислоты, взбалтывак т и ставят в кипящую водяную баню на 15 мин.

После этого пробирки охлаждают в воде, Для проведения экстракции примесей 16 в пробирку добавляют 100/0-ный раствор

N аОН в количестве, обеспечивающем рН

8,0 (примерно 0,4 мл) и 1 мл циклогексана, взбалтывают до получения однородного раствора, центрифугируют при

6000 об/мин 5 мин и удаляют слой циклогексана, содержащий примеси. Этот процесс повторяют дважды.

К водной фазе, освобожденной от примесей, добавляют 50%-ную ортофосфорную кислоту до,рН 1,9-2,0 (контроль по индикаторной бумаге) и 0,3 мл циклогексана, встряхивают до получения однородного раствора, центрифугируют при 6000 об/мин

5 мин. В полученном циклогексановом экстракте, содержащем нейраминовую кислоту, определяют ее количество спектрофотометрически на волне 549 ммк. О наличии B экстракте нейраминовой кислоты судят по характерной спектральной кривой образовавшегося хромогена с максимумом поглощения на волне 549 ммк.

6 ф

Предлагаемый способ по сравнению с известным является более точным. Это позволяет более тонко улавливать изменения защитныхреакций клеток организма на воздействие различных патологических агентов.

Формула изобретения

Способ количественного определения свободной и связанной нейраминовой кислоты в биологической пробе путем гомогенизации ее с последующим отделением примесей последовательной обработкой периодатом натрия, арсенитом натрия и тиобарбитуровой кислотой, двойной экстракции циклогексаном, отделения из экстракта свободной и связанной нейраминовых кислот, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, к гомогенату ткани после обработки его периодатом натрия добавляют сернокислый аммоний до полного насьпцения при "-50 С, выпавший осадок удаляют и о последующей обработке подвергают надосадочную жидкость.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР

% 529418, кл. Gj 01 М 33/16, 09.07.75.

Составитель С. Малютина

Редактор М. Циткина Техред M. Ha дь Корректор A. Ференц

Заказ 11939/60 Тираж 882 Подписное !

3!-!ИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Способ количественного определения свободной и связанной нейраминовой кислоты в биологической пробе

Способ количественного определения карбидина // 890250

Способ определения пировиноградной кислоты в крови // 877436

Способ определения активности супероксиддисмутазы в биологическом материале // 855502

Способ определения степени фибринолиза тромба // 855501

Способ определения гистамина в би-ологическом материале // 845099

Способ определения свободного гидрокси-пролина b плазме крови // 834518

Способ определения тканевой несов-местимости донора и реципиента // 828087

Способ количественного определения препаратов фенотиазинового ряда в биологических жидкостях1изобретение относится к области медицины,, а именно к методам анализа лекарственных препаратов.известен способ количественного определения препаратов фенотиазинового ряда в биологических жидкостях путем экстракции их с последующим разделением жидкостной хроматографией [1].однако известный способ _трудоёмок, длителен' и не обеспечивает .высокой чувствительности и воспроизводимости результатов..цель изобретения ~ повышение точности способа.эта цель достигается путем экстр^кции препаратов с последующим ра^вделением жидкостной хроматографией. при этом хроматографию ведут на катионите, а в качестве элюентов ис- 20 пользуют смесь этанола и воды, взятых в соотношении 1:5 - 5:1 по объему с добавлением 0,1-5,0% смеси уксусной кислоты и дизтиламин'а в соотношении 5:4.' способ осуществляют следующим образом.образец биологической жидкости, содержащий один или несколько препа_- ратов фенотиазинового ряда, под- ' 30101525вергают экстракции при рн 9,5 хлороформом. затем экстракт упаривают, остаток растворяют в этаноле и вводят в колонку длиной от 10 до 50 см, заполненную сильньм катионитом, например партисилом 10- scx. через колонку пропускают смесь этанола и воды с добавлением диэтиламина и уксусной кислоты. время удерживания фенотиазиновых препаратов различно. детектирование выходящих из колонки разделенных konotohehtob осуществляют по поглощению уф-света в проточной кювете. поскольку все фенотиазиновые 'препараты характеризуются сильным поглощением уф~света, такой метод детектирования гарантирует высокую чувствительность анализа. содержание препарата опреде.пяют по калибровочному графику,пример 1. , построение калибровочного графика для анализа ч нонахлазина и этмозина.к 2 мл плазмы добавляют нонахлазин и этмозин в виде водных райтворов соответствующих гидрохлоридов. прибавляют 0,5 г сульфата аммония и 0,5 мл 10%-ного аммиака. экстрагируют 2 раза по 5 мл хлороформа. объединенный экстракт испаряют'в // 826242

Патент 826241 // 826241

Способ определения антиоксидантной активности плазмы крови // 2102757

Способ дифференциальной диагностики гемморрагической лихорадки с почечным синдромом от острых распираторных вирусных инфекций и воспалительных заболеваний почек // 2104540

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии и инфекционным болезням

Способ прогнозирования острого инфаркта миокарда // 2105981

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и предназначено для прогнозирования течения инфаркта миокарда

Способ определения влияния со*002 на генерацию супероксидного анион-радикала фагоцитами // 2108572

Изобретение относится к медицине и касается исследования влияния CO2 на генерацию супероксидного анионрадикала фагоцитами

Способ определения степени магниточувствительности человека // 2108581

Изобретение относится к медицине, в частности, к гигиене, может быть использовано для определения индивидуальной магниточувствительности человека при профотборе

Способ определения естественной киллерной активности лимфоцитов человека в условиях гипербарии // 2109288

Изобретение относится к области водолазной медицины и физиологии подводных погружений и может быть использовано для определения влияния факторов гипербарии (величины общего давления, вида используемой газовой смеси, типа водолазного спуска, параметров микроклимата в гипербарических комплексах и т.д.) на естественную киллерную активность лимфоцитов крови водолазов

Способ диагностики перинатальных нефропатий на стадии предболезни // 2110799

Способ определения бактериальных липополисахаридов // 2114436

Изобретение относится к медицине, а именно к способам количественного определения бактериальных липополисахаридов в процессе производства медицинских иммунобиологических препаратов

Способ обнаружения идентификации и/или количественной оценки материала, набор для анализа, оптический волновод, биосенсор // 2116349

Изобретение относится к генной инженерии, а именно к способу проведения анализов с помощью генных зондов и с использованием биосенсора, включающего детектор затухания колебаний

Способ определения количества бактерий в биопрепарате // 2117291

Изобретение относится к способам исследования биологических материалов с использованием соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, в частности к способам определения количества бактерий в биопрепаратах, и может быть использовано в медицинской микробиологии и микробиологической промышленности