Способ определения свободного гидрокси-пролина b плазме крови

Авторы патента:

G01N33/52 - использование соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, например реактивной бумаги

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

< 1834518

/ (6l ) Дополнительное к авт. свил-ву (22) Заявлено 28.02.79 (21) 2730396/28-13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

Опубликовано 30.05.81. Бюллетень № 20

Дата опубликования описания 30.05.8 1 (51)М. Кд.

501 N 33/52

Государственный комитет ио делам изобретений и открытий (53) УДК612 12 . 1 (088.8) (72) Автор изобретения : 1

П. Н. Шараев т

* yà, ЧЯ

Ижевский государственный медицинский институт

Ъ (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СВОБОДНОГО

ГИДРОКСИПРОЛИНА В ПЛАЗМЕ

КРОВИ

Изобретение относится к медицине . а именно к клинической биохимии, и может быть использовано в качестве одного из критериев для диагностики регенеративно-пистрофических и воспалитель5 ных процессов.

Известен способ определения свободного гипроксипролина в плазме крови путем внесения в нее трихлоруксусной кислоты (ТХУ) с последуюшим отделением

1О нацосадочиой жидкости и добавлением к ней окислителя, далее образуюшийся продукт окисления гидроксипролина конденсируют с парадиметилбензальдегидом и измеряют его оптическую плотность 11.

Однако цанный способ не обеспечивает высокой точности.

Бель изобретения - повышение точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что способ определения свободного гидроксипролина в плазме крови осуществляют путем внесения в нее трихлоруксусной кислоты с послепуюшим отделением надосадочной жипкости и добавлением к ней окислителя, цалее образуюшийся нропукт окисления гипроксипролина конценсируют с парапиметилбензальцегидом и измеряют его оптическую плотность, плазму крови перед внесением ТХУ нагревают 2,02;5 мин до 98-1009С, затем охчажцают цо 18-22 С, ТХУ -вносят в концентрации

20% совместно с 55% хлорной кислотой, конденсацию ведут при нагрвевании смеси цо 98-100ОС 75-80 с, а процукт конденсации перец измерением оптической плотности экстрагируют смесью четыреххлористого углероца и H-бутанола, взятых в соотношении 1:3.

Пример . В центробежную пробирку наливают 0,5 мл плазмы крови и нагревают ее 2,0-2,5 мин при 98-100 С.

К охлажденной до 18-22оС пробе добавляют 0,2 мл 20% трихлоруксусной кислоты и 0,4 мл 55% хлорной кислоты. Содержимое пробирки тщательно перемешивают и центрифугируют 10 мин при

3000»4000 об/мин. Надосадочную жид8345 18

3 кость нейтрализуют 6 н. едким натром по фенолфталеину и доводят объем до

2 мл. К 2 мл нейтрализованной смеси добавляют 0,5 мл 5% водного раствора хлорамина 1 или Б. Через 3-4 мин в

5 пробирку добавляют 2 мл 3 н. серной кислоты и 0;5 мл 10% раствора парациметиламинобензальдегида в 96% этаноле.

Пробу тщательно перемешивают, нагревают

75-80 с при 98-100 С и охлаждают 10 до 18-220С. Затем к смеси добавляют

1 мл, четыреххлористого углерода и

3 мл Н-бутанола. Содержимое пробирки тщательно встряхивают и центрифугируют

10 мин при 3000-4000 об/мин. Верхнюю 15. фазу пробы, которая содержиФ характерный цля гидроксипролина хромоген, фотомет"-.руют при длине волны 560 нм или синим светофильтром фотоэлектроколориметра в кюветах с толщиной рабочего слоя 1 см. 20 против смеси четыреххлористого углерода и Н-бутанола (1: 3). Контроль ставят водой. Окраска хромогена не теряет своей интенсивности 30 мин. Расхождение межцу результатами параллельных анализов составляет не более 3%.

Предлагаемый способ позволяет увеличить точность правильной циагностики заболеваний, сопровождающихся деструктивными процессами в соединительной тка-30 ни (ревматизм, системная склеродермия, опухоли кости) особенно на ранних стадиях заболевания,,когда гидроксипролина в плазме крови еще мало. Точность предлагаемого способа по сравнению с известным повышается в 1,5 - 2 раза.

Формула изобретения . Способ определения свободного гицроксипролина в плазме крови путем внесения B нее трихлоруксусной кислоты (ТХУ) с послепуюшим отделением надосадочной жидкости и добавлением к ней окислителя, далее образующийся продукт окисления гицроксипролина конценсируют с парациметилбензальдегицом и измеряют егооптическую плотность, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, плазму крови перед внесением

ТХУ нагревают в течение 2,0-2,5 мин, цо 98-100 С, затем охнажцают до 180

22, ТХУ вносят в концентрации 20% совместно с 55% хлорной кислотой, конденсацию вецут при нагревании смеси до 98-100 С в течении 75-80 с, а продукт конденсации перец измерением оптической плотности экстрагируют смесью четыреххлористого углерода и Н-бутанола, взятых в соотношении 1:3.

Источники информации, принятые во внимание при эксрертизе

1. Крель А. А.,Фурцева Л. Н. Методы определения оксипролина в биолог ических жидкостях .и их применение в клинической практике.вЂ” "Вопросы мецицинской химии, т. 14, вып. 6, 1978, с. 635-640.

Составитель С. Малютина

Редактор М. Митровка Техред Ед аврипешко Корректор С. Щомак

Заказ 4093/67 Тираж 907 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Мбсква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,. 4

Способ определения свободного гидрокси-пролина b плазме крови

Способ количественного определения препаратов фенотиазинового ряда в биологических жидкостях1изобретение относится к области медицины,, а именно к методам анализа лекарственных препаратов.известен способ количественного определения препаратов фенотиазинового ряда в биологических жидкостях путем экстракции их с последующим разделением жидкостной хроматографией [1].однако известный способ _трудоёмок, длителен' и не обеспечивает .высокой чувствительности и воспроизводимости результатов..цель изобретения ~ повышение точности способа.эта цель достигается путем экстр^кции препаратов с последующим ра^вделением жидкостной хроматографией. при этом хроматографию ведут на катионите, а в качестве элюентов ис- 20 пользуют смесь этанола и воды, взятых в соотношении 1:5 - 5:1 по объему с добавлением 0,1-5,0% смеси уксусной кислоты и дизтиламин'а в соотношении 5:4.' способ осуществляют следующим образом.образец биологической жидкости, содержащий один или несколько препа_- ратов фенотиазинового ряда, под- ' 30101525вергают экстракции при рн 9,5 хлороформом. затем экстракт упаривают, остаток растворяют в этаноле и вводят в колонку длиной от 10 до 50 см, заполненную сильньм катионитом, например партисилом 10- scx. через колонку пропускают смесь этанола и воды с добавлением диэтиламина и уксусной кислоты. время удерживания фенотиазиновых препаратов различно. детектирование выходящих из колонки разделенных konotohehtob осуществляют по поглощению уф-света в проточной кювете. поскольку все фенотиазиновые 'препараты характеризуются сильным поглощением уф~света, такой метод детектирования гарантирует высокую чувствительность анализа. содержание препарата опреде.пяют по калибровочному графику,пример 1. , построение калибровочного графика для анализа ч нонахлазина и этмозина.к 2 мл плазмы добавляют нонахлазин и этмозин в виде водных райтворов соответствующих гидрохлоридов. прибавляют 0,5 г сульфата аммония и 0,5 мл 10%-ного аммиака. экстрагируют 2 раза по 5 мл хлороформа. объединенный экстракт испаряют'в // 826242

Патент 826241 // 826241

Способ определения фосфоновыхкислот b биологических жидкостях // 819721

Средство для очистки сыворотки при фотометрических измерениях // 791267

Способ диагностики раковых заболеваний // 428278

Способ определения чнсла аминокислотных остатков в молекулах белков // 303569

Способ определения микроколичеств полихлорпинена в растительных объектах // 275501

Техническая №/ ^^лиотекаi // 249028

Количественного анализа смесей желчныхкислот // 247600

Способ определения антиоксидантной активности плазмы крови // 2102757

Способ дифференциальной диагностики гемморрагической лихорадки с почечным синдромом от острых распираторных вирусных инфекций и воспалительных заболеваний почек // 2104540

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии и инфекционным болезням

Способ прогнозирования острого инфаркта миокарда // 2105981

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и предназначено для прогнозирования течения инфаркта миокарда

Способ определения влияния со*002 на генерацию супероксидного анион-радикала фагоцитами // 2108572

Изобретение относится к медицине и касается исследования влияния CO2 на генерацию супероксидного анионрадикала фагоцитами

Способ определения степени магниточувствительности человека // 2108581

Изобретение относится к медицине, в частности, к гигиене, может быть использовано для определения индивидуальной магниточувствительности человека при профотборе

Способ определения естественной киллерной активности лимфоцитов человека в условиях гипербарии // 2109288

Изобретение относится к области водолазной медицины и физиологии подводных погружений и может быть использовано для определения влияния факторов гипербарии (величины общего давления, вида используемой газовой смеси, типа водолазного спуска, параметров микроклимата в гипербарических комплексах и т.д.) на естественную киллерную активность лимфоцитов крови водолазов

Способ диагностики перинатальных нефропатий на стадии предболезни // 2110799

Способ определения бактериальных липополисахаридов // 2114436

Изобретение относится к медицине, а именно к способам количественного определения бактериальных липополисахаридов в процессе производства медицинских иммунобиологических препаратов

Способ обнаружения идентификации и/или количественной оценки материала, набор для анализа, оптический волновод, биосенсор // 2116349

Изобретение относится к генной инженерии, а именно к способу проведения анализов с помощью генных зондов и с использованием биосенсора, включающего детектор затухания колебаний

Способ определения количества бактерий в биопрепарате // 2117291

Изобретение относится к способам исследования биологических материалов с использованием соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, в частности к способам определения количества бактерий в биопрепаратах, и может быть использовано в медицинской микробиологии и микробиологической промышленности