Способ количественного определения препаратов фенотиазинового ряда в биологических жидкостях1изобретение относится к области медицины,, а именно к методам анализа лекарственных препаратов.известен способ количественного определения препаратов фенотиазинового ряда в биологических жидкостях путем экстракции их с последующим разделением жидкостной хроматографией [1].однако известный способ _трудоёмок, длителен' и не обеспечивает .высокой чувствительности и воспроизводимости результатов..цель изобретения ~ повышение точности способа.эта цель достигается путем экстр^кции препаратов с последующим ра^вделением жидкостной хроматографией. при этом хроматографию ведут на катионите, а в качестве элюентов ис- 20 пользуют смесь этанола и воды, взятых в соотношении 1:5 - 5:1 по объему с добавлением 0,1-5,0% смеси уксусной кислоты и дизтиламин'а в соотношении 5:4.' способ осуществляют следующим образом.образец биологической жидкости, содержащий один или несколько препа_- ратов фенотиазинового ряда, под- ' 30101525вергают экстракции при рн 9,5 хлороформом. затем экстракт упаривают, остаток растворяют в этаноле и вводят в колонку длиной от 10 до 50 см, заполненную сильньм катионитом, например партисилом 10- scx. через колонку пропускают смесь этанола и воды с добавлением диэтиламина и уксусной кислоты. время удерживания фенотиазиновых препаратов различно. детектирование выходящих из колонки разделенных konotohehtob осуществляют по поглощению уф-света в проточной кювете. поскольку все фенотиазиновые 'препараты характеризуются сильным поглощением уф~света, такой метод детектирования гарантирует высокую чувствительность анализа. содержание препарата опреде.пяют по калибровочному графику,пример 1. , построение калибровочного графика для анализа ч нонахлазина и этмозина.к 2 мл плазмы добавляют нонахлазин и этмозин в виде водных райтворов соответствующих гидрохлоридов. прибавляют 0,5 г сульфата аммония и 0,5 мл 10%-ного аммиака. экстрагируют 2 раза по 5 мл хлороформа. объединенный экстракт испаряют'в

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ . (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 140879 (2!) 2818301/28-13 (51)М. КЛ

Союз Советских

Социалистических

Республик с присоединением заявки Й9 (23) Приоритет

6 01 М 33/52

Государственный комитет

СССР но делам изобретений н открытий

Опубликовано 30.04.81 Бюллетень Н9 16 (53) УДК 615.397 (088. 8) Дата опубликования описания 300481 (72) Авторы изобретения

В.К. Пиотровский и В.И. Метелица

t

1

Всесоюзный кардиологический научный центр;

Академии медицинских наук СССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ПРЕПАРАТОВ ФЕНОТИАЗИНОВОГО РЯДА

В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ

Изобретение относится к области медицины,, а именно к методам анализа лекарственных препаратов.

Известен способ количественного определения препаратов фенотиазинового ряда в биологических жидкостях путем экстракции их с последующим разделением жидкостной хроматографией (1).

Однако известный способ трудоемок, длителен и не обеспечивает высокой чувствительности и воспроизводимости результатов.

Цель изобретения — повышение тоЧности способа.

Эта цель достигается путем экстр кции препаратов с последующим р4Вделением жидкостной хроматографией. При этом хроматографию ведут на катионите, а в качестве элюентов используют смесь этанола и воды, взятых в соотношении 1:5 — 5:1 по объему с добавлением 0,1-5,0% смеси уксусной кислоты и диэтиламина в соотношении 5:4. Способ осуществляют следующим образом.

Образец биологической жидкости, содержащий один или несколько препаpcLToB фенотиазиновогo ряда, подвергают экстракции при рН 9,5 хлороформом. Затем экстракт упаривают, остаток растворяют в этаноле и вводят в колонку длиной от 10 до 50 см, заполненную сильным катионитом, напри. мер партисилом 10-SCX. Через колонку пропускают смесь этанола и воды с добавлением диэтиламина и уксусной кислоты. Время удерживания фенотиазиновых препаратов различно. Детектирование выходящих из KostoHKH разделенных компонентов осуществляют по поглощению УФ-света в проточной кювете. Поскольку все фенотиазиновые

15 препараты характеризуются сильным поглощением УФ-света, такой метод детектирования гарантирует высокую чувствительность анализа. Содержание препарата определяют по калибровочно2О му графику.

Пример 1., Построение калибровочного графика для анализа нонахлазина и этмозина.

K 2 мл плазмы добавляют нонахлазин и этмозин в виде водных растворов соответствующих гидрохлоридов.

Прибавляют 0,5 г сульфата аммония и 0,5 мл 10%-ного аммиака. Экстрагируют 2 раза по 5 мл хлороформа.

30 Объединенный экстракт испаряют в

826242

Формула изобретения ою юесл.ам юд опт,усчъэь 1 а7

08K

0 Юlб токе азота при 50 С, прибавляют

0,2 мл этанола и 100 мкл раствора вводят в колонку.

На фиг.1 представлена типичная хроматограмма. Минимальное детектируемое количество этмозина в пробе 5 нг, нонахлазина-10 нг. Выполняют ряд однотипных анализов при соотношении добавленных к плазме этмозина н нонахлазина ат 1:5 до

5:1 в интервале концентраций от

20 нг/мл до 5 мкг/мл. Соотношение площадей пиков, определенных с помощью электронного цифрового интегратора, линейно зависит от соотношения концентраций препаратов во всем диапазоне концентраций. Точность при параллельном анализе нескольких одинаковых проб 5Ъ.

Пример 2. Определение концентраций этмозина в плазме крови больного после внутривенного введения 150 мг препарата.

К образцу плазмы добавляют 0,5 мл раствора нонахлазина (0,5 мкг) в качестве внутреннего стандарта и проводят экстракцию и анализ аналогично примеру 1. Для изучения фармакокинетики препарата анализируют ряд образцов плазмы, взятых у больного через различные промежутки времени после инъекции.

Яа фиг.2 показаны результаты такого исследования в виде графика в координатах логарифм концентрации—

BPeMR*

Л р и м е р 3. Определение концентрации нойахлазина в плазме крови больного после приема 220 мг препарата., К образцу плазмы добавляют 0,5 мл раствора этмозина (50 нг) в качестO ве внутреннего стандарта и проводят эк& ракцню и анализ аналогично примеру 1.

На фиг.3 в координатах логарифм концентрации — время представлены результаты фармакокинетического иследования нонахлазина.

Предлагаемый способ является высокочувствительным и точным. Чувствительность способа порядка 10нг/пробе (20 нг/мл), в то время, как у известного способа — 2 мкг/мл, т.е. отличается на два порядка, ° Предлагаемый способ дает возмож10 ность определять содержание препаратов фенотиазинового ряда в биологических жидкостях больных, проходящих курс лекарственной терапии; исследовать влияние препаратов на результаты лечения. В конечном счете то позволяет проводить индивидуальный подбор лекарств каждому больному, выявлять эффективность новых препаратов фенотиазинового ряда.

Способ количественного определения препаратов фенотиазинового ряда в биологических. жидкостях путем экстракцйи их с последующим разделением жидкостной хро.латографией, о т л и ч а ю щ и .й с я тем, что, с целью повышения точности способа, хромато30 графию ведут на катионите, а в качестве элюентов используют смесь эта .нола и воды, взятых в соотношении

1:5 — 5:1 по:объему с добавлением

0,1-5,0% смеси уксусной кислоты и

«4$ диэтиламина в соотношении 5:4.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе, 1. Хирц Ж. Аналитические методы

4() исследования метаболизма лекарственных веществ. N., "Медицина", 1975, с. 55.

826242

naiop p нонцвитроции В моно по)ина мам/ фие. Р

С (н /гчл)

В0 б Врс ма (voc) фиа8

Составитель С. Малютина

Редактор Е. Дичинская Техред Т.Маточка Корректор, М. Коста

Заказ 2368/33 Тираж 907 Подписное

BHHHfIH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1!3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППН Патент, r.Óæãîðoä, ул.Проектная, 4