Способ определения аминогликозидных антибиотиков в биологических жидкостях

Авторы патента:

G01N33/52 - использование соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, например реактивной бумаги

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советсимк

Социалнстнчесиик

Республик

III>892278 (61) Дополнительное к авт. свид-ву " (51)М. Кл. (22)Заявлено 04.07.80 (21) 2950162/30-15 с присоединением заявки М (23)ПриоритетG 01 N 21/27

G 01 N 21/78

G 01 N 33/52

9>вуднретвенный кемнтет

СССР ню делам нзобретеннй н открытий

Опубликовано 23 ° 12. 81 Бюллетень № 47

Дата опубликования описания 23. 12. 81 (53).УДК 543.062:

: 543. 43 вЂ” (088.В) 1

* > (IS (72) Автор изобретения

Н.М.Алыков

И г (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИНО-ГЛИКОЗИДНЫХ

АНТИБИОТИКОВ S БИОЛОГИЧЕСКИХ

ЖИДКОСТЯХ

Изобретение относится к аналитической химии и может найти прак" тическое применение, например, в клиническом анализе при определении уровня амино-гликозидных антибиотиков в различных биологических жидкос" тях человека и животных.

Известен способ определения ами" но-гликоэидных антибиотиков в биологических жидкостях, включающий обработку пробы реактивом с последующим колориметрированием, причем в качестве реактива используют периодат тиобарбитуровой кислоты (1 ).

Однако известный способ недостаточно точен, поскольку его чувствительность 2,5 мкг/мл.

Целью изобретения является повышение чувствительности ы точности и определения.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве реактива используют смесь водных растворов соли праэеодима и фталексона-S при их соотношении 2: 8, причем обработку проводят в водноэтанольной среде при аН 5,3-5,8.

В результате реакции формируется соединение, окрашенное в синий цвет (максимум полосы поглощения при

619 нм) с высоким значением молярно. го коэффициента поглощения. Например, для соединения мономицина с праэеодимом и фталексоном-S эта величина равна 145000,для гентамицина

160000, для зигомицина - 155000, При проведении реакции в водном зтаноле (1 .1) взаимодействующие компоненты вступают в комплексообразование в соотношении антибиотик:празеодим:

;фталексон = 1:2:8.

Проведению реакции не мешают сульфаты, нитраты, хлориды, ацетаты щелочных и щелочноэемельных ионов, большинство ионов металлов при рн 5,3-5,8, углеводы, также a l«15

X- =Х

t:р S ll

Антибиотики

Моча

Кровь

Молоко

0,098+0,002

0,099+0,002

О, 098+0, 002 О, 097 0, 003

0,098+0,002 0,097+0,003

Мономицин

Канамицин

8922 кислоты, как глицин, аналин, тирозин, триптофан, новокаин, бензилпенициллин, тетрациклиновые антибиотики (если их содержание в анализируемом образце не превышает 1000-кратное

5 количество по отношению к амино-гликозидным антибиотикам). Мешающее влияние железа (!!1), алюминия, меди, кальция, цинка устраняется введением в исследуемый раствор до 20кратных количеств по отношению к празеодиму фторида натрия.

Пример 1, Определение амино-гликозидных антибиотиков в крови.

К 0,2 мл крови приливают 2 мл воды; 2 мл 30 -ного водного раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 10 мин. Центрифугат переносят в колбу на 20 мл, вносят

0,2 мл 0,01i-ого водного раствора аскорбиновой кислоты; 0,1 мл 0,01 М фторида натрия; 0,2 мл 103-ного водного аммиака; 5 мл ацетатного буяера с рН 5, 5; 1 мл 0,002 М фталексона-S; 0,5 мл 0,001 M хлорида пра-, зеодима и 96:0-ный этанол до 20 мл.

Через 2 мин измеряют оптическую плот" ность раствора в двухсантиметровой кювете при 619 нм относительно воды.

Зо

Содержание амино-гликозидных антибиотиков находят по калибровочному графику, построенному обработкой, проб крови, в которые добавлены различные количества того или иного антибиотика, Пример 2. Определение амино-гликозидных антибиотиков в моче.

К 0,5 мл мочи приливают 0,5 мл воды; 0,2 мл 0,014-oro водного раствора аскорбиновой кислоты; 0 1 мл

0 01 М фторида натрия; 10 мл ацетатного буферного раствора с рН 5,5;

1 мл 0,002 М водного раствора фталексона-S; 0,5 мл 0,001И хлорида празеодима перемешивают и вносят

96ь-ный этанол до 20 мл. Через 2 мин измеряют оптическую плотность раство78

Д ра в двухсантиметровой кювете при

61 9 нм относительно воды.

Содержание амина-гликозидных антибиотиков находят по калибровочному графику, построенному обработкой проб мочи, в которые вносятся возрастающие количества тех или иных,амино-гликозидных антибиотиков.

Пример 3. Определение амино-гликоэидных антибиотиков в молоке.

К 0,2 мл молока приливают 2 мл воды; 0,2 мл 303-oro раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 10 мин. Центрифугат фильтруют в колбу на 20 мл, промывают осадок на фильтре 5 мл ацетатного буфера с рН 5,5; в колбу вносят 0,2 мл

0,011-ого водного раствора аскорбиновой кислоты; 0,1 мл 0,01 M фторида натрия; 0,3 мл 101-ого водного аммиака, перемешивают содержимое, колбы, приливают 1 мл 0,002 M водного раствора фталексона-S; 0,5 мл

0,001 М хлорида праэеодима и 961-ный зтанол до 20 мл. Через 2 мин измеряют оптическую плотность раствора в двухсантиметровой кювете при 619 нм относительно воды.

Содержание антибиотиков находят по калибровочному графику, строящемуся путем обработки проб молока, в которые вносятся возрастающие количестваа того или иного антибиотика.

Результаты определения амино-гликозидных антибиотиков в различных материалах представлены в таблице.

Метрологические характеристики способа определения амино-гликозидных антибиотиков в биологических материалах следующие: число опытов n=20, критерий Стьюдента tp=2,10 при степени надежности р=0,95. X вЂ” среднеарифметическое из п определений, S - квадратичная ошибка, Введено 0,1 мкг антибиотика в 1 мл исследуемого материала.

- Продолжение таблицы

Антибиотики

Х=Х t S/n

Кровь

Молоко

Моча

0,098+0, 0 02 О, 097+0, 003

Зигомицин

Гентамицин

О, 099+0, 002

О, 099+0, 002 О, 097+0,003 0,099+0,002

Составитель 1.Рубинова

Редактор И,Николайчук Техред А, Бабинец

Корректор M.Êîñòà.

Заказ 11240/64 Тираж 910 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д.4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4

Изобретение позволяет определять

0,01-50 мкг мономицина, кинацина, неомицина, зигомицина, наромомицина, гентамицина, стрептомицина и гидроксимицина в крови, молоке и моче человека и животных. Результаты идентичны, независимо от того, от какого обьекта (человека, собаки, кролика или мышей) был взят материал для проведения исследования.

Чувствительность способа О,ОI мкг/

/мл .

Формула изобретения

Способ определения амино-гликозидных антибиотиков в биологических жидкостях, включающий обработку пробы реактивом с последующим колориметрированием, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения чувствительности и точности определения, в качестве реактива используют смесь водных растворов соли празеодима и фталексона-S при их соотношении 2:8, причем обработку проводят в водноэтанольной среде при рН 5,3-5,8.

Источники информации,,принятые во внимание при экспертизе

1. Fukumoto Hisako J.Hyg.Chem., щ 1976, р.22, 380-38".

Способ определения аминогликозидных антибиотиков в биологических жидкостях

Способ определения пировиноградной кислоты в крови // 877436

Способ определения активности супероксиддисмутазы в биологическом материале // 855502

Способ определения степени фибринолиза тромба // 855501

Способ определения гистамина в би-ологическом материале // 845099

Способ определения свободного гидрокси-пролина b плазме крови // 834518

Способ определения тканевой несов-местимости донора и реципиента // 828087

Способ количественного определения препаратов фенотиазинового ряда в биологических жидкостях1изобретение относится к области медицины,, а именно к методам анализа лекарственных препаратов.известен способ количественного определения препаратов фенотиазинового ряда в биологических жидкостях путем экстракции их с последующим разделением жидкостной хроматографией [1].однако известный способ _трудоёмок, длителен' и не обеспечивает .высокой чувствительности и воспроизводимости результатов..цель изобретения ~ повышение точности способа.эта цель достигается путем экстр^кции препаратов с последующим ра^вделением жидкостной хроматографией. при этом хроматографию ведут на катионите, а в качестве элюентов ис- 20 пользуют смесь этанола и воды, взятых в соотношении 1:5 - 5:1 по объему с добавлением 0,1-5,0% смеси уксусной кислоты и дизтиламин'а в соотношении 5:4.' способ осуществляют следующим образом.образец биологической жидкости, содержащий один или несколько препа_- ратов фенотиазинового ряда, под- ' 30101525вергают экстракции при рн 9,5 хлороформом. затем экстракт упаривают, остаток растворяют в этаноле и вводят в колонку длиной от 10 до 50 см, заполненную сильньм катионитом, например партисилом 10- scx. через колонку пропускают смесь этанола и воды с добавлением диэтиламина и уксусной кислоты. время удерживания фенотиазиновых препаратов различно. детектирование выходящих из колонки разделенных konotohehtob осуществляют по поглощению уф-света в проточной кювете. поскольку все фенотиазиновые 'препараты характеризуются сильным поглощением уф~света, такой метод детектирования гарантирует высокую чувствительность анализа. содержание препарата опреде.пяют по калибровочному графику,пример 1. , построение калибровочного графика для анализа ч нонахлазина и этмозина.к 2 мл плазмы добавляют нонахлазин и этмозин в виде водных райтворов соответствующих гидрохлоридов. прибавляют 0,5 г сульфата аммония и 0,5 мл 10%-ного аммиака. экстрагируют 2 раза по 5 мл хлороформа. объединенный экстракт испаряют'в // 826242

Патент 826241 // 826241

Способ определения фосфоновыхкислот b биологических жидкостях // 819721

Способ определения антиоксидантной активности плазмы крови // 2102757

Способ дифференциальной диагностики гемморрагической лихорадки с почечным синдромом от острых распираторных вирусных инфекций и воспалительных заболеваний почек // 2104540

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии и инфекционным болезням

Способ прогнозирования острого инфаркта миокарда // 2105981

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и предназначено для прогнозирования течения инфаркта миокарда

Способ определения влияния со*002 на генерацию супероксидного анион-радикала фагоцитами // 2108572

Изобретение относится к медицине и касается исследования влияния CO2 на генерацию супероксидного анионрадикала фагоцитами

Способ определения степени магниточувствительности человека // 2108581

Изобретение относится к медицине, в частности, к гигиене, может быть использовано для определения индивидуальной магниточувствительности человека при профотборе

Способ определения естественной киллерной активности лимфоцитов человека в условиях гипербарии // 2109288

Изобретение относится к области водолазной медицины и физиологии подводных погружений и может быть использовано для определения влияния факторов гипербарии (величины общего давления, вида используемой газовой смеси, типа водолазного спуска, параметров микроклимата в гипербарических комплексах и т.д.) на естественную киллерную активность лимфоцитов крови водолазов

Способ диагностики перинатальных нефропатий на стадии предболезни // 2110799

Способ определения бактериальных липополисахаридов // 2114436

Изобретение относится к медицине, а именно к способам количественного определения бактериальных липополисахаридов в процессе производства медицинских иммунобиологических препаратов

Способ обнаружения идентификации и/или количественной оценки материала, набор для анализа, оптический волновод, биосенсор // 2116349

Изобретение относится к генной инженерии, а именно к способу проведения анализов с помощью генных зондов и с использованием биосенсора, включающего детектор затухания колебаний

Способ определения количества бактерий в биопрепарате // 2117291

Изобретение относится к способам исследования биологических материалов с использованием соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, в частности к способам определения количества бактерий в биопрепаратах, и может быть использовано в медицинской микробиологии и микробиологической промышленности