Субстрат щелочной фосфатазы
ОЛ ИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советскик
Социапистическик
Республик ( Государстоениый комитет СССР ло делам изобретений н открытий Опубликовано 07.08.81. Бюллетень М29 Дата опубликования описания 10 .08.8 1 Ю. 10 Кулис, В. Й. Разумас и А. А. Малинаускас (72) Авторы изобретения (71) Заявитель Институт биохимии АН Литовской CCP (54)СУБСТРАТ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ и измерении количества продуктов, образующихся в результате этой реакции. Однако известные субстраты позволяют определять активность щелочной фосфатаэы только в прозрачных средах(т.е. спектрофотометрическим путем)и не применимы в непрозрачных 10 средах- Определение активности щелочной фосфатаэы электрохимическим путем с использованием известных субстратов невозможно, так как последние образуют при гидролизе продукты, ко1$ торые легко окисляются при наложении напряжения. Х О и 0-P-OH т 011 Целью изобретения является повышение универсальности .субстратов, применяемых для определения активности щелочной фосфатазы, т.е. обеспечение возможности определения активности щелочной фосфатазы в мутных и окращенных средах. Изобретение относится к применению моноэфиров ортофосфата общей формулы где Х вЂ” ОН в орта-положении или йн в пара-положении, в качестве субстрата для определения активности щелочной фосфатазы. В литературе описаны субстраты для определения активности щелочной фосфатазы, например моноортофосфат нитрофенола, дифосфат фенолфталеина, фенилфосфат (11. Определение активности щелочной фасфатазы заключается в проведении ферментативной реакции(в результате чего происходит гидролиэ субстрата) (5l)M. Кл. G О1 N 31/14 С 12 и 9/16 . С 07 F 9/09 С 07 С 39/02 С 12 (} I/42 (53) УДК 661.635. .5(088.8) где Х-ОН в орто-положении или NH в пара- о положении, в качестве субстрата для опрделения активности щелочной фосфатазы. Указанные соединения получают известными способами 2,31. Используемый в качестве субстрата моноортофосфат.п-аминофенола применяли ранее для синтеза в органической химии, а именно для синтеза N арилтиокарбамоил -и-аминофеноловых эфиров (2). Моноортофосфат пирокатехина использовали ранее в качестве соединения, обладающего антиокислительными свойствами 31. Пример.Для определения активности щелочной фосфатазы берут термостатированный буферный раствор, в конкретном случае 0,1 M раствор трис-НС1, содержащий 0,01 моль Mg504 (pH 8,0,температура 25оС)и субстрат2 ммоль моноортофосфата пирокатехина или 1 ммоль моноортофосфата . аминофенола. В раствор погружают электрохимический преобразователь, 35 состоящий из платинового анода, электрода сравнения и вспомогательного электрода, и вводят пробу определяемой щелочной фосфатазы. Потенциал анода в случае моноортофосфата пирока40 техника устанавливают 0,3 В, а в случае моноортофосфата п-аминофенола — 0,18 3. Регистрируют увеличение тока во времени, скорость увеличения тока прямо 45 пропорциональна гидролазной активности. Измерение занимает 1-3 мин. Формула изобретения Применение моноэфира ортофосфата общей формулы 0 и О-Р-OH 0Н где Х вЂ . ОН в орто-положении или 1ЧМ в пара-положении, в качестве субстрата для определения активной щелочной фосфатазы. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1, Berqmeyer H.0.,"Hethods of Fnzymatic Analysis"Academic Press, N-y., london, 1965, 783. 2. Галстухова Н. Б., Панкина З.А., Берзина И. М, и Щукина И.Н. Синтез производных тиомочевины- Журнал органической химии,1974, 10,(1), 804-807. 3. Humphris КJ. Gerald S. néåchanlsms of Antioxidant Action: Products of tne Reaction between Hydrope oxides and î-Phenylene Phosphites", J. Chem Soc Реги!п 11, 1о. 6, 1973, 831-835. .Результаты измерения активности щелочной фосфатазы при использовании в качестве субстрата 2 ммоль моноорто-5О фосфата пирокатехина следующие: ВНИИПИ Заказ 5643/20 Тираж 907 Подписное Филиал ППП "Патент", г„ Ужгород,ул.Проектная,4 3 853536 4 Указанная цель достигается приме- Скорость изменения Количество щенением моноэфира ортофосфата общей тока преобразова- лочной фосфатаформулы теля, нА/мин тазы„10 ед/мл 3,66 2,6 5,0 5,2 И 6,71 7,8 Х 0-Р -ОН 8,0 10,4 0Н 11,6 13,0 13,0 15,6 12,66 18,2 19,33 23,4 Результаты измерения активности щелочной фосфатаэы при использовании в качестве субстр,"та 1 ммоль моноортофосфата и -аминофенола следующие: Скорость изменения Количество щетока преобразовате- лочной фосфателя, нА/мин тазы, 10 ед.мл 5 2,6 12 3 7,8 20,7 13,0 29,3 33,4