Штамм 50311а-продуцент о-дифенолоксидазы

АЪ и—

ОПИС Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ (и) 443060

Союз Советских

Социалистических

Реслублик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 04.08.72 (21) 1818927/28-13 с присоединением заявки № (32) Приоритет

Опубликовано 15.09.74. Бюллетень ¹ 34

Дата опубликования описания 02.06.75 (51) М. Кл. С 12d 13/10

С 12k 3/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР ло делам изобретений и открытий (53) УДК 577.15.08 (088.) (72) Автор изобретения

О. Н. Антропова (71) Заявитель Украинский научно-исследовательский институт целлюлозно-бумажной промышленности (54) ШТАММ PЕNIС!ШUM АРАМETZII I.АI 50311 а—

ПРОДУЦЕНТ о-ДИФЕНОЛОКСИДАЗЪ|

5,0

2,5

1,5

0,5

0,01.

Сульфатный лигнин осины

NH

КН Р04

Мд804 7НеО

FeSO< 7НзО

Изобретение относится к микробиологической промьппленности и касается получения нового штамма Penicillium adametzii l al

50311 а, используемого для получения ферментаа о-дифеннлокспдазы.

Предлагаемый штамм может быть использован при очистке сточных вод от лигнина и его производных, для получения мономеров лигнина, например ванилиновой, п-оксибензойной, сиреневой и других ароматических кислот и мономеров.

Известен штамм Penicillium adametzii Lal

50311.

Предлагаемый штамм получен из штамма

Penicillium adametzii Lal 50311 многоэтапной адаптацией к трудноусвояемому сульфатному лигнину осины и имеет следующую характеристику.

Морфология. Органическая среда. Суслоагар. Мицелий бесцветный, дерновинки зеленые, колонии снизу сине-зеленые с белыми краями шириной 1 — 2 мм. Для выращивания используется следующая жидкая лигнинсодержащая среда, г/л:

Конидиеносцы бесцветные, одномутовчатые, размером 40 —:100;к,2,5 —:3,0 мкм, стеригмы размером 8 2,5 — 2,7 мкм, сближенные ио

5 — 7 в мутовке. Конидии шиповндные, круглые, в диаметре 2,5 — 3,0 мкм. Оболочка н шины темно-коричневого цвета.

Биохиличесние свойства. Штамм гидролизует до 100% сульфатный лигнин осины на

60 сутки роста до ароматических кислот, 10 спиртов, фенолов (например, ванплиновый, и-оксибензойный, сиреневый, ванилинового спирта и фенола в зависимости от суток роста). Распад липшна осуществляется на 3—

5 сутки.

15 Отношение к источнику углерода, При росте на среде Чапека, содержащей в качестве источника углерода сульфатную целлюлозу осины, целлюлоза не разлагалась.

В дальнейшем изобретение поясняется при20 мером получения лигнинразрушающего фермента о-дпфенолокспдазы при поверхностном способе культивирования продуцента-микромицета Penicillium adamctzii Lal 50311 а.

С 5-ти суточной культуры Penicillium adamet25 zii Lal 50311»a сусло-агаре, производят смыв спор стерильной, водопроводной водой. Полученной споровой суспензией производят засев матрацов, содержащих по 200 — 250 мл лигион|содержащей среды.

30 Матрацы термостатиручот прн 27+2 C в тс443060

Х

Е с„= c„, Ео

Составитель М, Ларина

Техред Н. Куклина

Корректор Л. Денисова

Редактор 8. Блохина

Заказ 1428/18 Изд. № 1271 Тираж 506 Подписное

ЦИИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, )К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 чение 8 — 10 суток. Ферментный препарат получают отделением мицелия гриба от культуральной жидкости на фильтре. Концентрируют фильтрат на вакуум-выпарной установке или (вакуум-сушильном шкафу) до 1/10 первоночального объема. В концентрированной культуральной жидкости определяют активность о-дифенолоксидазы по окислению и-крезола колориметрическим методом на

ФЭК-56М. 10

Активность определяют следующим образом.

К 1 мл культуральной жидкости прибавляют 0,5 мл 0,1М раствора п-крезола, 2,5 мл 15 фосфатноцитратного буфера при рН 6,0. Через 1 час производят колориметрирование.

Расчет содержания фермента производят по формуле где с, — искомая концентрация окисленного фенола и соответственно актив- 25 ность, мг/мл;

Ех — оптическая плотность исследуемого раствора;

Е, — оптическая плотность используемого фенола; 30 с, — концентрация используемого субстрата, мг/мл.

Активность о-дифенолоксидазы, продуцируемой Penicillium adametzii Lal 50311 а—

0,05 — 0,1 мг/мл.

Предмет изобретения

Штамм Penicillium adametzii Lal 50311 а— продуцент о-дифенолоксидазы.

Морфология. Органическая среда. Суслоагар. Мицелий бесцветный, дерновинки зеленые. Колонии снизу сине-зеленые с белыми краями шириною 1 — 2 мм. На жидкой среде, содержащей, г/л:

Сульфатный лигнин осины 5,0

N H4NO3 2,5

КН2Р04 1,5

MgSO4 7Н О 0,5

FeSO4 7НзО 0,01 конидиеносцы одномутовчатые размером

40 —:100)(2,5 — 3,0 мкм, стеригмы размером

8)(2,5 — 2,7 мкм, сближенные по 5 — 7 в мутовке. Конидии шиповидные, круглые, в диаметре 2,5 — 3,0 мкм. Оболочка и шипы темно-коричневого цвета.

Биохимические свойства. Штамм гидролизует до 100% сульфатный лигнин осины на

60 сутки роста до ароматических кислот, спиртов и фенолов.

Распад лигнина осуществляет с 3 — 5 суток.

Отношение к источнику углерода. При росте на среде Чапека, содержащей в качестве источника углерода сульфатную целлюлозу осины, целлюлозу не усваивает.