Питательная среда для получения эпигидрокортизона
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союз Соеетских
Социалистических
Республик
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Зависимое от а|вт, свидетельства №
Заявлено 08.Ч.1969 (№ 1328071/31-16) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 17.1Ч.1973. Бюллетень № 18
Дата опубликования описания 14Х1.1973
М. Кл. С 12d 1,3/00
С 121с 1/06
Комитет по делам изобретений и открытий при Спеете Министров
СССР
УДК 577.47:615.779.9 (088.8) Авторы изобретения
М. Б. Куплетская, В. В. Туровцева и Г. К. Скрябин
Заявители
Московский государственный университет им. М. В. Ломоносова и Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ
ЭПИГИДРОКОРТИЗОНА
0,40
0,35
0,15
0,02
КНгР04
КгНР04
Мî-SO 7Н,О
FeSO4 7Í О
1,0 (стерилизация отдельно)
28,5 — 30,0
Мочевина
Глюкоза
Известна питательная среда для получения эпигидрокортизона, содержащая 1% кукурузного экстракта и 2,5% сухого вещества и глюкозы.
Недостатком известной среды является наличие кукурузного экстракта, имеющего сложный и непостоянный состав, что приводит к образованию дополнительных побочных продуктов и затрудняет выделение конечного продукта.
Качество целевого продукта повышается за счет того, что п итательная среда содержит, г/л: глюкозу 28,5 — 30,0, мочевину 1,0 — 1 1, фосфат калия однозамещенный 0,35 — 0,50, фосфат калия двузамещенный 0,30 — 0,40, сульфат магния 0,13 — 0,15, сульфат железа
0,015 — 0,02.
Пример. Для подготовки посевного материала гриб Tieghemella 1|уolospora выращивают в пробирках на скошенном сусловом агаре в течение двух недель. Затем культуру смывают водой и используют для засева посевной среды из следующего расчета: смыв с одной пробирки на 500 мл посевной среды, Посевная среда имеет следующий состав, г/л:
Кукурузный экстракт 0,5 (на сухое вещество), водопроводная вода, рН доводят после стерилизации 10% -ным раствором NaOH до
7,5 — 7,6.
10 Посевной материал выращивают на качалке в колбах емкостью 750 лтл го 100 лтл среды в течение 30 час. Полученным посевным материалом засевают синтетическую среду в количестве 3% по объему.
15 Синтетическая среда, на которой выращивают культуру для проведения трансформации стероидов, имеет тот же состав, что посевная среда, но без кукурузного экстракта.
Выращивание ведут также иа качалке В кол20 бах емкостью 750 лял со 100 л|л синтетической среды.
Спустя 30 — 36 час культуру разводят водой в два раза, после чего разливают по 50 л|л в колбы емкостью 750 лтл. На 50 лтл жидкости
25 вносят по 20 >яг 21-ацетата вещества «S»
Рейхштейна в 1,5 лтл этанола. Колбы помещают на качалку. Через 18 час жидкость экстрагируют пять раз равными объемами хлороформа и проводят хроматографическое раз30 деление с последующим количественным оп377,326
Предмет изобретения
Составитель С. Щенева
Редактор К. Шанаурова Техред 3. Тараненко Корректоры: М. Гарцевич и Е. Миронова
Заказ 167178 Изд. Ке 1427 Тираж 467 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, 5К-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 ределением стероидов на спектрофотометре, Находят эпигидрокортизон с выходом 74 /, и гидрокортизон с выходом 8 /о (выход в расчете на количество внесенного ацетата вещества
«$» Рейхштейна).
Выращивание гриба и трансформацию сте.роидов ведут при 28 — 30 С, используют качалку с 190 — 200 об/.нин.
1. Питательная среда для получения эпигидрокортизона, содержащая источники азота и углерода, отличающаяся тем, что, с целью повышения качества целевого продукта, она содержит глюкозу, мочевину, фосфат калия, сульфаты магния и железа.
2. Питательная среда по и. 1, отличающая5 ся тем, что компоненты среды содержатся в следующих количествах, г/л:
Мочевина 1,0 — 1,1
Глюкоза 28,5 — 30,0
Фосфат калия однозамещенный 0,35 — 0,50
Фосфат калия двузамещенный 0,30 — 0,40
Сульфат магния 0,13 — 0,15
Сульфат железа 0,015 — 0,02
