Способ получения рубомицина

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскк

Социдпистичюсхих

Республик

Зависимое от авт. свидетельства, А—

Заявлено 21.Ч1.1967 (№ 1166639/31-16) М. Кл. А 61k 21/00 с присоединением заявки _#_-—

Ч осударстаенный комитет

Совета Иинистраа СССР пе делам изобретений и открытий

Приоритет—

Опубликовано 23.V.1973. Бюллетень ¹ 23

УДК 615.779.931 (088.8) Дата опубликования описания 9.XI.1973

Авторы изобретения

М. Г. Бражникова, Н. В. Константинова, E. Б. Кругляк и В. А. Помазкова

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РУБОМИЦИНА

Изобретение относится к способам получения антибиотиков, в частностями рубомицина.

Известен способ, получения рубомицнна путем ферментации Actinomyoes coeruleorubidus. Указанный способ не обеспечивает получение препарата достаточно высокого качества с удовлетворительным выходом.

С целью повышения;выхода и качества рубомицина мицелий экстрапируют органическим расгворителем, например ацетоном, при рН около 4,0. Для очистки антибиотика производят экстрагирование, например, хлороформом при рН 8,8 — 8,9 с последующим подкислением экстракта до рН 3,5 — 3,9. Разделение рубомиц ина,на фракции А, В и С производят хроматографированием на колонке с водной кремниевой кислотой с последующим элюированием органическим растворителем.

Компонент А выделяют смесью хлароформа, бензола и метанола в соотношении 100:

10: 5. Компонент В выделяют смесью тех же растворителей, но взятых в соотношении 100:

10: 15. Компонент С выделяют метанолом.

Пример. 20 кг мицелия, полученного фильтрованием 250 л культуральной -жидкости, экстрагируют двойным количеством ацетона, подкисленпого соляной кислотой до рН 4,0. Экстракцию ведут в течение 1-ape при перемешявании,-после чего экстракт отделяют н повторяют экстракцию одним объемом ацетона, содержащего 10% воды. Объединенный экстракт нейтрализуют до рН упаривают в вакууме и фильтруют, промывая осадок два ,раза по 0,5 л воды, подкисленной до рН 4,0 соляной кислотой. Фильтрат и промывные .воды подщелачивают 10%-ным едким натром до рН 8,9 .и трижды экстрагируют хлороформом порцнями по 4,4, 2,2 и 2,2 л. Экстракт

10 промывают водой, сушат над сернокислы м натрием и упари вают в вакууме до 100 лл.

К остатку добавляют 50 л л безводного ацетона, а затем по капляи при перемешиванип

0,5 н. раствор хлор истого водорода в ацетоне до рН 3,9. Затем добавляют еще 50 ял ацетона, образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают его небольшим количест,вом безводного ацетона и сушат в вакуумэксикаторе.

20 Получают 15,6 г .рубомицина, содержащего 30% компонента А, 28,5 /р компонента В и 41,5% компонента С. Из маточного раствора после отделения осадка упариванием в .вакууме до небольшого объема с последующим

25 вливанием в десятикратный объем смеси серного и петролейнor о эфира выделяют еще

2,2 г препарата.

Для разделения рубомицина на фракции

25. г суммарного препарата а нти биотика раство ряют в 250 мл смеси хлороформа, бензо324 70

Предм ет изобретения

С оста вп тел ь В. 1 аратута

Техред Г. Дворина Корректор H. Прокуратов,i

Редакгор Е. Хорииа наказ 434/1278 Изд. № 591 Тираж 467 Подписное

Ц1-1ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред. 4Патеит» ла и метанола (100: 10: 5) и наносят 1а колонку с водной кремниевой кислотой (250 г кремниевой кислоты с размером частиц 0,1-0,25 мм суспендируют в хлороформе н вносят в колонку диаметром 4 см). Элюцию сначала проводят той же системой растворителей в количе стве 1750 мл со скоростью 40—

48 мл час,с,я2, собирая фракции по 500 .пл.

Затем продолжают элюцию 1700 мл смеси хлороформа, бензола и метанола при соотношении компонентов 100: 10: 15, собирая фракции по 100 мл. Остававшийся на колонке компонент С элю ируют 1100 мл этанола.

Полученные фракции анализируют методом бумажной хро матографии в системе ацетон, бензол, вода при соотно шении 12: 3: и однородные фракции объединяют. Смесь фракций, содержащих компонент А, упаривают в вакууме до 60 мл и осаждают препарат десятикратным объемом петролейного эфира. Выход 5,38 г. Фракции, содержащие компоненты В и С, упаривают в вакууме досуха, растворяют остатки соответственно в 60,и 75 мл метанола и про водят осаждение пятнадцатикратныпм объемом этилового эфи,ра. Выход 5,355 г компонента В и 7,283 г компонента С.

1. Спосоо получения рубомицина пут=м ферментации ActiIIomyces coeruleorubidus, oI5 личающийся тем, что, с целью повышения выхода и качества целевого продукта, мицелий экстратируют органическим растворителем, например ацетоном, при рН около 4,0 антибиотик очищают экстрагировапием, например, 10 хлороформом при рН 8,8 — 9,0, экстракт подкисляют до рН 3,5 — 3,9, далее рубомицин разделяют хрс матографированием на колонке с водной кремниевой кислотой и элюируют компоненты А, В и С органическим раствори15 тел ем.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что компонент А выделяют смесью растворителей хлороформа, бензола и метанола, взятых в соотношении 100: 10: 5.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что компонент В выделяют смесью растворителей хлороформа, бензола и метанола, взятых в соотношении 100: 10: 15.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что компонент С выделяют .метанолом.