Патент ссср 317215
О П И С А Н И Е 3I7215
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союэ Советских
Социалистических
Республик
К ПАТЕНТУ
Зависимый от пате!гга М
Заявлено 09.V1.1969 (¹ 1337123 30-15) МПК С 12d 9114
Приоритет 11 VI.1968, М 17570 А,68. Италия
Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров
СССР
Опубликовано 07.Х.1971. Вюл ieicIII, ¹ 30
УДК 615.779.9(088.8) Дата опубликования описания 7.I.1972
Авторы изобретения
Иностранцы
Эрнесто Котта, Пьера Джулита (Италия) и Аврора Санфилиппо (Австрия) Иностранная фирма
«Сосьета Фармасеутикив и «Фармиталияв (Италия) Заявитель
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИЬЙ01ЙЧЕСКО10 КОМПЛЕКСА
Изобретение относится к спосооам полу пения антибиотиков с использованием грибовпродуцентов, в частности к способам, при которых в качестве продуцентов берут грибы из группы Streptomycetes.
Известен способ получения, например, антибиотического комплекса либаномицина, который основан на культивировашш ряда штаммов Str. 1тоат!! В азроог!ых т словиях на питательной среде, содержащei»icioчники усвояемого углерода, усвояемого азота и минеральные соли.
Для получения антибиотического комплекса аксеномицина, включающего аксеномицин
А (F. I. — 2604А) и аксеномицин Ь (1 .1.—
2604В) предлагается способ, ociioiiaII»iiii также на кулы ивировании !редставителя
Streptomycetes, а именно Streptoiiiyces Iisandr п. sp. (Streptomyces 1 . 1. — 2604) (Societa FarmaceIItici Ital i a) .
Str. lisandri выделы из образца почвы с участка в Лизандоро Олмос (Аргентина), зарегистрирован и депонирован в Инстит те фитопатологии при Миланском университете (Италия) под ¹ IPV1951, затем в Университете Руджера (США) под ¹ 1МК()3935 и в
Государственном микологическом институт те в Ферри Лейн, Кью, Сюррей (Великобритания) под _#_o. 137178. Я
11ри выра!ц: ванин на обычной среде всгстативный Мицелий состоит из более или менее тонких гиф толщиной 0,5 — 0,9 л!к, длинных H обильно разветвленных, конидофоры
5 длинные и прямолинейные, толщиной 1,1—
1,3 лк. Гифы развствля!отся по моноподиальному типу, образуя споры нормальной длинь!, завитые в плотную спираль H
15 В табл. 1 обобщены свойства культур, полученных на различных среда при 28 <. . 1lав бл!одсния дел;, iii на 3, 8, 15, 20»30-и деш !o ;Ie инокулирован:!я. Микроорганизмы хар;!ктсризуются быстрым и обильным размножс20 нием с образованием компактного плотного вегетативного мицелия, поверхность когорого гладкая при выращивании на си}ггстичсской среде и слегка складчатая при выращивании ла орган!пиеской среде. На синтетической сре25 .Ie вегстатии!ый м !целий бесцветен, в то
i3 ;eìÿ как его обратная сторона может быть окрашена в различные цветовые оттенки от соломеш о-желтого до темно-желтого, каштаново-коричневого или серого с фиолетоЛ -;;; f:ij 11:!1(11!1 ! 8„)". С.) "8 8;::11.!. 5((! (-! )"(., (. = 11;51.) .С! 1-: ". "!) С 3;
1(1, 1; 1 >гД
Г) (1
1, I:, tI! I1f.: С.(С11, ili! :I i :1 Р! I lj (И вЂ”: 1 . I!() I >1 1>С(1 i)J . !.
1 i) ) ) ), 1,:"); —.)):1,, "1 1 (1; ) (.!),:;I >« I5 t . (:! I (1,1С>, (;! i() " (С:f i li 1> l I Л С.1 j !!, !1!! . 1 )!! i, 6) 1 I:, !8)Î л1.51) . ()(8 ;1 1: 1. l I(I !, .,! 1 11:-; 1.3 I! t l(I. :
1!(!1(! t t)1>i(lf). l l, I f
) (I!. 5.!! ); 7: — i> i!(t) !8,1 — ) — 8 t)
1 (5,()() - - t (),-1() ) (), " 6 — ) 8
lf j>I I (l fl -) f 1 . > .f fl > f(8;)8 (! ): 1,!15
) )(! (-!)".-"- = — — .,), 1) 1 (),() 1: 1,".1,1>....; .;,! 11, ! 1, ; 1 Г) 1 1 1 1 !» ., ) > .:: С . . Л11 Р 1. ф 1! (),!; -1) 5 1,5.
1" I !,:, .. 111 !(О.I Å,:(,f!()" 1,;;11. 3!
tljjjj :. l " l!. :(l< lI1;Jj>; )>J!
) — 2.)-! 11 ЗЗГ: ))j-: t,t;> tf.. . (1>1 1()) С .1(!) 1! !>i. : СI I; !".! ))>) 3
;I 1fj i*! 1, > j I 3 ();1(1 " j (,->! г; 11 1: ) f l",. !С 1. !>,J() . ; ) 1 ССС: . 1(). (6,"-: — 6.86 - - ""- —: () . ),-) () (у() )() (! ) (! )8 г
> t!jTjj 1."г(! (>1>|1!Т1(((3)3 11 I(T! (5 t!f)" :. г г> j l )! Г (5 1 !3()Л. - :I:) 11 3Ñ. .(!t. .
1г>С -г тС(11!11л -1(г -, .1
) ) j, l, I 1 г
l1. 1!1:: IС:.С I! j!;.I: I 3! : 13 > Ji!> . : : ! 11 \ I Р 0;!1 ::()!!(С( 5 3(:
1 !!> )1 Iт,>!>,,, 1,1> 11 1 !! ! (f, С !", >.; 1: )) 1 С .,!
Т >1, J> 1 l 1()it j тт);!(-(), (° г(, . )! . 1 .. 11, 3 i j : );) 1) ::;) г) : ., ; ! . !, 1! 5 (1 I I>! 1 11;)1!! f! " I.!.13 >: (! Itl (!,г;1
1,1С::С,11111:,:,- (! "3
Jt!I II . li, .I Jf l, !,.. 1С:1:!
:. )),: . г (Р (), :. I Ill I,J I . !3 If )1(С ! 1,1 Л
)),:,. Г:,;!;! !,1 I - ":! — ., ) j (3!(7(1(t;! 1113; " П 1.> "J I:.11>!Х 1,) .(1 1 !
);) 3 1;: 1; (>1 .
t 1 с ..1(>, !O I i!;5 1,, 3 (>1,:1.."5>.1," :; !
11!С вЂ” 31) !.1:(Ч ."СС(3"..:1. .;. !
31?215
48 час определяли показатель ДИМ. Полученные данные приведены в табл. 5.
Таблица 6!
ttI Ю,С
С33
v t= 2 C> и о о !
Таблица 5
Виды животных
Результат
Значение показателя
Д И Л!,!1у;з/с.!1В
Ак сеномицин А
Аксеном;1цин Б!
Очень с iëüíî устойчивьш,даже при двукратном введении его в течение месяца
Крупный рогз10 тый скот
Sacchar0myccs св!.1ВЬсгgсияis . 0,04 !
Candida a1bicans 1,25
0,04
1,25
Овцы
Собаки
Очень сильно тстойчивый
30 Очень сильно устой гивый
Испытание на выносливость
Испи!Тания на выносливость проводили, ь на крупном рогатом скоте, 013133х и сооаках путем введения аксеномицина Л и акссномицина Б в дозе 20 л!г. кг. Результаты приведены в табл. 6.
l>. 3i3.!l:. Iи 13 до:3(. 20 .3!г ьг . Г1, 3и0.1изитель!!o после 18 час испыти11ия. После обрабо "i! зксементы пгдвсргали исследованию для регу20 л:.1: Oва11ня !!ыбрал1вания параз1!тов. 1ерез
- 4 t((Ic после обработк11 двс собак!! оыл1! уби1: . а I! X К 11Ш Е Ч 1 И и О 1>1 Л П 0 Д13 Е Р Г И У т И С С Л Е ДO В a1 l!Iii ДЛЯ Р:1;3с 11 10>Н:1Я НаЛ!«1ИЯ СКОЛЕКС 313 оста в>11 имися собаками вели наблюде25 н11Я и !ерез 30 дней после обработки. Экскремс: ты исслсдога I!I 11а:1аличие яиц ленто ll!î-! i3 310 "313ß. Роз льтаты п,3:!ведены B табл. ii. Антигельминтная активность при введении собакам Лнтигельминтную активность проверяли на 1 6 iic I I B O T II bi X > к о г о р ь1 м 0 f >f л 11 в 13 Сдевы ленто!IIblc черви (Cestoda). Лнтиб:1отик Таблица 7 1Iеслсдовинис кишcчникa 1битого животного 11сследованис экскрементов через 30 дней КОЕП1ЧССТВО ЖИВОТНЫХ 11Ге Ic10I3auIIi экекреs .cliто!3 через Н3, к!>лько чзееs Паразиты Dicilidium caninum ВЫДЕ1CIIIIC I:1300.:0ÒÈ:IÎÂ И СК0 1 II K0 I3 !Е реэ 1 !а С 0Tpltuà TcnüII0C о-,ридатсльнос ВЬ!ДЕ. !ЕЧ!НЕ Н РОГ.ТОТИДО!3 ЧГрез 1 — Ii ñ вы,".Гленис рез 1- 3 час ИООГЛ..ТИ„-ОЗ:!Е отрiiuaтсльпос ПИОГЛОТИДОВ ВЫ !Е.ТЕН:i! рсз 2 час ll»0vn0TII,T0I3 «сВЬ!ДЕ. CIIII рез 2 час ВЫДЕЛЕ!Ii .C i:Pi>C. ОТИ 3013 iCроз 1 -" час ". Р О: Л 0 -.11" 0 В Ч ЕВЫ Е.II ii!".. рез 3 час Il m ë I Ii 0â:C ВЫДСЛЕIIИ С.i1>0ãë0Tunîâ че131>1;IC:IЕ11И Г рсз 2 час ВЫДСЛЕНИЕ ПРОГ.IOT".1013 IC 1303 1 час выделе:!Нс .:рога.>тид013 !срез 2 inc ИРОГЛОТНДОВ: Евыделениi рсз 3 час Данные табл. 7 показывают, что Во всех новению паразитов. что было подтверждено подве13гн3 Tblx обраб3отке ккивотных BIIT!IOIIO- а11;1 I!1303: 3!xo!I;IBxIB!ITOB !1 кишсчни1 а; битык тические вещества привели к полному исчез- 30 3к:.::ютных. т;, (((!) T; t-; )); 11 )(. !(! t() . . (1 т. Б! ) .1 (! (, ° ) It Р(!.(! ! ) 8 — —. 1 1 ) ) 1 (! 1 1 (Г!, "((,! ( (.!)(! ! л Й:) :. ((1 .,;, I I t, 1 )! (), (1!))1 ", I )Д . ° !! f .(1 1 1 .! ((1! i t :! !. . (! : . (; 1 )! . 1. !: ) ) 1 () - I (, ! ! (, . i,!)(,)!, () 1) ) \ 1. ) ) 1! (:! )! 1, ) ) 1,(i (! .! С,, 11 1! !) (i ) ): () (! . I i (! !,. i 1 () 317215 13 Лммоний ccPIIOI lfc;II>li I Моиофосфат калия Вод2 водопроводн 211 0,1 0,01 до 100. Предмет изобретения Составитель М. Дранишников Техрсд Т. Ускова Редактор Д. Пинчук Кор!ректоры: Е. Зимина и E. Усова Заказ 3926,119 Изд. М 1440 Тираж 473 Подписное ЦИИИПИ Ком!!тета по делам изобретений и откр стии при Согс,с,ЧИ33истров СССР 1Ч«сква,,3К-35, Раушская наб., д. 4,,5 Типография, пр. Сапунова, 2 Бульон перемсшива!От при 400 o0,в!!!н, 2эрируют примерно одним обьсмом воздуха 112 один обьсм среды в 1 Гиии и и;!кубируют при 27 — 28 С в течение примерно 24 час. К концу этого периода для инокулироваиия 50 л ферментационной среды применя!От 3 л полученной суспензии мицелия. Ферментационная среда им ст следующий состав, /о. Глюкоза 8 Мука соевая 3 Экстракт кукурузы 2 Кальций углекислый 1 Натрий хлористый 0,25 Масло соевое 0,5 Вода водопроводная до 100. После стерилизации при 121 С в течение 30 л1ии и инокулирования среду перемешивают с помощью турбинной дисковой мешалки с четырьмя плоскими лопастями и аэрируют путем подачи 0,7 л воздуха на 1 л среды в 1 мии при 27 — 28 С в течение 120 час. Мицелий, собранный после фильтрования 5 л культуры в бульоне, экстрагируют 4)(3 л метанола. Экстракты объединяют и упаривают в вакууме. Водный остаток промыва от .1етролейным эфиром, после чего экстрагируют четыре раза равными объемами н-бутилового спирта. Экстракты смешивают и упаривают в вакууме досуха. Остаток растворяют в 100лл метилового спирта. Нсрастворившуюся часть отбрасывают, а раствор упаривают. OcTaTOI суспендируют в 200 лл хлороформа и затем отфильтровывают. Хлороформный раствор концентрируют и осаждают петролейным эф 1ром. Получается 2,0 г сырого продукта. Oîдержащего антибиотик аксеномицин Л и аксеномицин Б. Сырой продукт очищают путем распределения по принципу противотока в двухфазной системе хлороформ: четыреххлорис1ый углерод: метанол: вода=3:2:4:1. Фракционирование Но 50 пробиркам показывает, что максимум активности получают в проб:Ip»ax от 10 до 20 0,20 г чистого комплекса аксе IoМИ iil:.Ic! !ОЛУЧ2ЮТ УПИР!122НИС<М ОДСРжИМО О ; l l!х I;!30(>i!00» .!Осcxa. 110,!<
110КИЗЫ132 Т ПРИ cli12.1ИЗС llo МСТО;1У ГОН»ОСЛОЙil 0H; 0:
3H iciCИИЯМИ К1 0,-10 ci 0,61 ОО!.иСТСтВСН 10. 1 !3дслсlii!c д13у; 1!»3 ив!1ы. 13cùcc Г13 Осуlцссl l3;I f1oi с i!oil!0!II!HO xi 031210! Рафии на си.lик2 Голc 13 I!o.ioli кс. < c. :i;f или ва lот р11 7,0 с no)0 тощ! !О 0,00 М fpo.ôaTIIO:0 б>фсра. Добавляют 33 )f3 !!0130131»000p23!Ioii цслл!Олозы. Для 1 < . I.ом ii:! <: al.. а 11! TH OHÎ 1И к2 с poo) СТ< Я кол011ка диаметром 2,4 cd! и высотой 30 ст!. IIри эл10ир0132:IH>I смесью и-бути;1013ый cllHpT: у кci elias кисло Га: вода =4: 0,5: 1 (по объему) пол<:lc! Ioò фракции, содержащие 0,60 г соеди ciIfI» ь и затем 0,25 г сосдинениЯ А. Каждый 11з c!!ITI!биоти ов, выделен:1ый с помощью метанола Н3 остатка после выпар:!вания элюагов, извле:,аюг путем удаления растворителя и высушивания до постоянного веса над пятиокисью фосфора при остаточном давле;и:i 0,2 лл рт. cr.;1ри комнатно11 температуPC. 1. Способ получения антибиотическо-о ком" 30 f.ëc са на основе культивирования грибаиродуце1!та из гру31кы Streptomvcetes в аэробных условиях на жидкой среде, содержащей и!сто шики свояемого углсрода, усвояемо:0 азо-.а и минеральные соли, отличаю-! ц!тра
Л 11т. I.— 260-EA) и,.ксе:1омицин Б (1т. 1.— 2604В) в ка<1сстве Гр:!ба продуцента берут Stre;:tali!i cps 1isaIIcIri n. sp. 181ГС1310пl ccs 40 I . I.— 2604) (Societa I aroiaccH(ici 11а11;!), 2. Способ п0 и. 1, огла1а<01цш ci 45 3. С пособ по 1. 1, 0Tлfcча10ЩИ110Я Tcм, что c!:!ТибИОт11ЧССКИй КОМ!-.ЛСК раЗдсляЮт На 2Кс С! I 0 f I I I H H Л H 2 к с С И О м И ц И н Ь . 4, Способ по пи. 1 и 3, отличаю1ц!1йг31 тем, 1!О акссномицин Л и а cei!Oi;:щин Ь:!ерсво50 Ят в соли нетокс11чных кислот.