Способ получения новых глюкозидов

 

о п 1гс-х н-и.*в

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советскиа

3!3351

Социалистическими

Респуелик

К ПАТЕНТУ

Зависимый от патента №

Заявлено 12.XI I.1967 (№ 1202312/23-4) МПК С 07с 47/18

Приоритет: 13.XII.1966 г. № 17752/66, 17753/66, 17754/66, 17755/66, 17756/66, 17759/66, Швейцария

Комитет по делам изооретений H открытий ори Совете Министров

СССР

Опубликовано 31.VIII 1971. Бюллетень № 26

Дата опубликования описания 2.XII.1971

УДК 547.918.07(088.8) Авторы изобретения

Иностранцы

Камилла Келлер-Жюслен, Макс Кун, Яни Ренц и Альберт фон Вартбург (Швейцария) Иностранная фирма с Сандос АГ» (Швейцария) Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НОВЫХ ГЛЮКОЗИДОВ

R, 0

112 О

К, С=о, Ra

ОСН

СНО

ОН где

Настоящее изобретение касается способа получения новых глюкозидов общей структуры 1

R — водород, R2 — алкил-, алкенил-, циклоалкил-, незамещенный или замещенный аралкил- или аралкенил-, или замещенный арильный остаток, или

R и R2 — алкильные группы или образуют алкеновую цепь.

Новые соединения общей структуры 1 могут применяться для борьбы с паталогическими процессами, сопровождающимися ненормальным размножением клеток, например при злокачественных неоплазмах.

Согласно изобретению способ получения новых глюкозидов основан на взаимодействии

4 -деметилэпиподофиллотоксин+О - глюкозида с кар бонильными соединениями общей

5 формулы где R> и R имеют указанное выше значение; или с соответствующими низшими ацеталями или кеталями в присутствии кислого, обладающего водосвязывающими свойствами катали15 затора.

В качестве катализатора применяют, например, кислоты Льюиса, как безводный хлористый цинк, сульфокислоты, например и-толуолсульфокислоты или сухие катион иты с

20 сульфокислотными группами в Н+-форме.

Конденсацию проводят при комнатной температуре в среде сухого инертного органического растворителя, например в нитрометане, предпочтительно без влаги в атмосфере азота.

25 С целью повышения выхода прн конденсации применяют азеотропную отгонку реакционной воды или образующегося спирта в вакууме при температурах от 20 до 30 С.

Выделение и очистку продукта проводят из30 вестными приемами.

Изготовленное из 4 деметилэпиподофиллотоксин+О-глюкозида и

Точка плавления, С

Соединение ()р = — 1oo,г (с 0,754 в хлороформе) (с )р = — 96,9

24 (с 0,722 в хлороформе) (к) р — — — 96,5

20 (c 0,775 в хлороформе) (<) р — — — 101,9 (с 0,710 в хлороформе) (а) р = — 100,9 (с 1,004 в хлороформе) ()р = — 158,3 (с 0,757 в пиридине) 170 †1 н-Бутиральдсгида

181 †1

Изобу7иральде ида

162 †1

173 †1

234 †2

Г1ивалальдсгида

Валеральдегида

2-Метилпснтанала

143 †1 н-Гсксана

219 †2

31

Счужащие исходными средстваыи для изготовления новых соедичений общей структуры I

4-деметилэпиподофиллотоксин-р-Р— глюкозиды получают, подвергая реакции обмена 4 деметилэпиподофил 7отоксин в безводном ипертном при реакционных условиях органическом растворителе при температурах от — 20 до — 5 С в присутствии связывающего кислоту средства со сложным хлормуравьинобснзиловым эфиром в 4 -карбобензокси-4 -деметилэпиподофиллотоксин, конденсируя затем

4 -карбобецзокси - 4 - деметилэпиподофиллотоксин с 2, 3, 4, 6-тетра-0-ацетил р-Р-глюкозой в присутствии этилэфирата трехфтористого бора и инертном при реакционных условиях органическом растворителе при температуре 0 и(или) отщепляя сначала гидрогеноIIo:I, чепного тетра-0-aqeTII II-4 -карбобензокси-4 — деметилэпиподофиллотоксин-рР-глюко" II;Iа карбобензоксигруппу и подвергая алкоголизу полученный тстра-0-ацетил-4 - деметилэпиподофиллотоксин-р - D - глюкозид в присутствии безводного ацетата цинка. При этом образуется 4 -деметилэпиподофиллотоксин-р-Р-глюкозид.

Пример l. 4 -деметилэпиподофиллотоксин-р-D-aTII 7HgeIII lIOI40aHp,.

1,5 г сухого 4 -деметилэпиподофиллотоксин-P-D-глюкозида суспепдируют в 30 мл нитрометана >Iприбавляют 6,мл ацетальдегиддиметилацеталя и 150 лг п-толуолсульфокислоты.

Размешивают исходную смесь 1 час при комнатной температуре в среде азота и без досТх IIo B 1 àæíocTII. CIIvcTB 3TQ BPeibIЯ IIE Рвоначальная суспензия превращается в прозрачный раствор, и в тонкослойной хроматограмме (плитки из силикагеля, промывное средство: хлороформ-, -6% метанола) не может быть доказан исходный материал. Затем раствор разбавляют 400 мл хлороформа и взбалтывают с водой три раза по 25 мл воды. Полученный после выпаривания высушенной органической фазы сырой продукт хроматографируют

4 -Деметилэпиподофиллотоксин

-D-бутплиденглюкозид

4 -Дсмстилэппподофпллотоксин

-D-изобути 7иденглюкозид

4 -Деметилэпиподофиллотоксин

-D-ппвали7иденгчюкозид

4 -Деметилэпиподофиллотоксин

-D-пснтилиденглюкозид

4 -Дсметилэпиподофиллотоксин

- D- (2-мстилпентилиден) -глюка вид

4 -Дсмстилэпиподофиллотоксин

-D-гсксилпденглюкозид

4 затем на 100 г силикагеля «Мерк» (крупность зерна 0,05 — 0,2 мм), причем хлороформ +6% метанола служат элюентами. Получают единообразный при тонкослойной хроматографии

5 4 -деметилэпиподофиллотоксин - p — - D — этилиденглюкозид. После перекристаллизации из метанола получают бесцветные кристаллы с т. пл. 236 — 251 С, (о.)2р 2=110,5 (с 0,588 в хлороформе), 10

Пример 2. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин-р-Р-пропилиденглюкозид.

1,5 г сухого 4 -деметилэпиподофиллотоксинP-D-глюкозида суспендируют в 25 мл нитроме15 тана, затем прибавляют 1 мл пропионового альдегида и 125 мг п-толуолсульфокислоты.

Исходную смесь перемешивают 2 час при комнатной температуре в среде азота и без доступа влажности. Через это время первона20 чальная суспензия почти прозрачна и в тонкослойной хроматограмме (плитки из силикагеля, промывное средство: хлороформ +15% метанола) почти не может быть доказан исходн ы и м атер и а л.

25 Раствор затем разбавляют 500 мл хлороформа и взбалтывают четыре раза 25 мл воды, Нейтральную органическую фазу сушат над сульфатом натрия и выпаривают в вакууме, Сырой продукт хроматографируют затем 100 г

30 силикагеля «Мерк» (крупность зерна 0,05—

0,2 мм), причем хлороформ +2 /о метанола служат элюентами. Единообразные в тонкослойной хроматограмме фракции перекристаллизовывают из 10 мл горячего метанола и по35 лучают 4 -деметилэпиподофиллотоксин-р-Рпропилиденглюкозид как бесцветный, кристаллический препарат с т. пл. 178 — 182 С; (а) „ = — 107,2 (с 0,558 в хлороформе).

40 В табл. 1 дан ряд других, не известных до сих пор соединений, синтезированных аналогично примеру 2, их свойствам с примененными в данном случае исходными соединениями.

Таблица 1

Вращение плоскости поляризации

313351

Пример 3. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин-р-Р- (2-бутенилиден) -глюкозид.

1 г сухого 4 -деметилэпиподофиллотоксин+

D-глюкозида суспендируют в 20 мл нитрометана и прибавляют 20 мл кротонового альдегида (свежеперегнанного) и 2 г ионообменника Dowex (тип 50%Х2 сухой). Реакцию проводят как в примере 2 — в среде азота и без доступа влажпосги при комнатной температуре. Через 1 час можно узнавать только главное пятно в тонкослойной хроматограмме (промывное средство: хлороформ +6 "/о метанола). Реакционную смесь отфильтровывают от ионообменника и затем хорошо промывают хлороформом. Разбавляют фильтрат 500 мл хлороформа и взбалтывают четыре раза по

25 мл воды. Органическую фазу фильтруют через сульфат натрия и выпаривают в вакууме. Получают желтое масло, которое очищают 110 г силикагеля «Мерк». Элюентами служат хлороформ +6 /О метанола. Хроматография на колонне дает 4 -деметилэпиподофиллотоксин+Р- (2-бутинилиден) -глюкозид, почти чистый по данным тонкослойной хроматограммы (плитки из силикагеля, промывное средство: хлороформ +6 /о метанола). Вещество перекристаллизовывают два раза из

6 мл горячего этанола и получают бесцветный кристаллизат; точка пл, 195 — 199 С; (o;)" = — 99,2 (c 0,813 в хлороформе).

Пример 4. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин-р-Р-гексагидробензилиденглюкозид.

В растворе 2,0 мл гексагидробензальдегида в 30 мл нитрометана суспендируют 2,0 г 4 -деметилэпиподофиллотоксин-P - D - глюкозида.

После прибавления 100 мг п-толуолсульфокислоты размешивают 1 час при 20 С без доступа влажности, прибавляют затем еще раз 50 г

Il-толуолсульфокислоты и перемешивают еще

5 час. Затем разбавляют 50 мл хлороформа, отфильтровывают нерастворенный материал и фазу хлороформа промывают водой до нейтральной реакции. 11осле сушки раствора над сульфатом натрия и выпаривания в вакууме хроматографируют остаток силикагелем. Хлороформ +2О/о метанола элюируют сперва побочные продукты и затем чистый 4-деметилэпиподофиллотоксин+Р - гексагидробензилиденглюкозид. Из этанола получают соединение в кристаллах с т. пл. 228 — 231 С; (a) = — 98,0 (с 1,020 в хлороформе).

Пример 5. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин-р-Р-фенилэтилиденглюкозид.

К суспензии 1,5 г сухого 4 -деметилэпиподофиллотоксин-р-D-глюкозида в 60 мл нитрометана прибавляют 6 г ионообменной смолы

Dowex (тип 50%К2, сухая) и 1,5 мл фенилацетальдегиддиметилацеталя. Исходную смесь размешивают при комнатной температуре в среде азота и без доступа влажности, Примерно через 90 мин получается прозрачный раствор в тонкослойной хроматограмме (промывное средство: хлороформ +6 метанола) 5

45 можно доказать только следы исходного материала. Отфильтровывают катализатор и разбавляют светло-желтый фильтрат 0,75 мл пиридина (повышение величины рН от 3 — 4 до 6) и 400 мл хлороформа. Затем взбалтывают три раза по 25 мл воды. Органическую фазу фильтруют через сульфат натрия и выпаривают в вакууме, Сырой продукт хроматографируют 80 г силикагеля «Мерк», причем с помощью хлороформа - 1,5 "/О метанола можно элюировать почти чистый продукт (тонкослойная хроматография на плигках сплпкагеля, промывное средство: хлороформ +6 /p метанола; хлороформ +30О/о ацетона). После перекристаллизации из хлороформа — метанола получают бесцветный 4 -деметилэпиподофиллотоксин-P-D-фенилэтилиденглпкозид с т. пл. 165 †1 С, (а) =- — 82,0" (с 0 971 в ацетоне) .

Пример 6. 4 -ДеметилэпиподофиллотоксинфР-гидроциннамилиденглюкозид.

1,5 г сухого 4 -деметилэпиподофиллотоксин-р-D-глюкозида успендируют в 30 мл нитрометана и затем прибавляют 1,5 мл гидрокоричного альдегида (свежеперегнанного) и

300 мл п-толуолсульфокислоты. Исходную смесь размешивают при комнатной температуре в среде азота и без доступа влажности до получения прозрачного раствора (через

30 мин). Затем разбавляют реакционный раствор 500 мл хлороформа и взбалтывают четыре раза по 25 мл воды. Нейтральную органическую фазу сушат над сульфатом натрия и выпаривают в вакууме. Остаток хроматографируют 100г силикагеля «Мерк». Путем элюирования хлороформом можно отделить непревращенный гидрокоричный альдегид. Последующие фракции (хлороформ +2 р метанола) дают производное гидроциннамилидена, которое после перекристаллизации из 5 мл горячего этанола превращается в чистый 4 -деметилэпиподофиллотоксин - p-D-гидроциннамилиденглюкозид как бесцветные кристаллы с т. пл. 193 †1" С; (к)„ †1,9" (c 0,605 в хлороформе).

Пример 7. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин-p-D- (о-нитроциннамилиден) -глюкозид.

К суспензии 1,5 г сухого 4 -деметилэпиподофиллотоксин-р-D-глюкозида в 75 мл нитрометана прибавляют 6,0 г о-нитрокоричного альдегида и 6,0 г ионообменной смолы Dowex (тип 50W)<2, сухая), и размешивают в среде азота без доступа влаги. Примерно через

2 час получается прозрачный раствор, в тонкослойной хроматограмме (плитки силикагеля, промывное средство: хлороформ +6 /о метанола) можно обнаружить только незначительные количества исходного материала. Затем отфильтровывают катализатор и промывают хлороформом. Соединенные фильтры разбавляют 400 мл хлороформа и взбалтывают три раза по 25 мл воды. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и выпарива313351

7

?от. Полученный сырой продукт хроматографируют 100 г силикагел?1 «асср«», причем элюентами служат сначала хлороформ, затем хлорофор?i? +2% IPT2110 lB. Сосдиня?от I?icT«IO по данным тонкослойпой хроматографии фракции (проверенные хлороформом —, 6% мстаНОЛЯ КЯК ПРОМЫВПЫМИ СРЕДСТВЯМИ На ПЛИТКЯХ из силикагеля) и псрскристаллизовыва1от из

50 лл горячего метанола. 4 - 1еметилэпиподофиллотоксин-(3 - Р-(о - нптроцшшамилидеп)глюкозид получается в форме бесцветны: кристаллов с т. пл. 2- 14 — 254" С; а ",, == — 76,9= (с 0,639 в ацетоне) .

П р и м с р 8. 4 - IIoileTH.lýïèïoäoôHëëoòo«сип-I3-D-циппамплидепгл:окозид.

1(1,5 г сухого 4 -деметилэчиподофиллотоксип-13-D-i люкозида приб??вля?от 30 HA дистиллирован;IОГО коричнОГО альдсГида H

3,0 г иопообмсппого порошка 1?огсх (тип 50

%>2, сукой). Исходную смесь размешивают при комнатной температуре в среде азота и без доступа влаги. Через 15 час почти нельзя обнаружить исходный материал в топкослойпой хроматограмме (система: плитки сплпкагеля и хлороформ+15% метанола как промывпые средства) . 11осле отфпльтровьшания катализатора и добавочного промывания хлороформом очищают выпаренпый фильтрат хроматограсрией па колонне на 100 г силикагеля «?Черк». Злюиру?от непрсвращепныи «оричный альдсгид хлороформом и оставшееся всщество хлороформом +2% метанола. В топКОСЛОЙНОй ХРОМЯТОГРЯММЕ ПОЛУ IQIOT ИПДИВИдуальный продукт. Перекристаллизация пз

20 лл этапола дает 4 -деметилэпиподофиллотокс?п?-13-В-циппамилидепглюкозид с т. Пл.

239 †2 С; (сс), = — 86,1 (с 0,564 в ацетоне) .

Пример 9. 4 -Деметилэп??подофиллотоксин Р-И- (и-фторбепзплиден) -глюкозид.

Раствор 0,5 г сухого 4 -деметилэпиподофиллотоксин-I3-D-глюкозида в 10 ??л п-фторбензальдсгида взбалтывают 3 — 4 час после добавления 0,26 г безводного хлористого цинка в среде азота без досгупа влаги и при комнатной температуре. Пример?о чсрез 3 час можно обнаружить только следы непревращенпого глюкозпда в тонкослойпой хроматограмммс (плитки сплпкагсля, промывное средство: хлороформ —, -б,, метанола). Затем разбавляют реакционный раствор 30 1?л хлороформа и взбалтывают три раза, употребляя по 10 лл воды. Сушат фазу хлороформа сульфатом па.рпя и выпарива?от в вакууме. Получаемый при этом маслянистый остаток прибавляют по каплям и при перемешпвании в 150 ?ял пентана, причем образуется хлопьсвидпый осадок.

Если сырой продукт выделяется маслообразно, то растворяю Г небольшим количество я ацетона и повторяют осаждение прис?авлснис. м по каплям в 150 л?л свежеГО пептана.

Сырой продукт очищают путем хроматографии 100 г силикагеля «Мерк» (крупность

55 б0

65 зерна 0,05 — 0,2 ??л). Из элюированных хлороформом --; 2% метанола главных фракций пол, а?от чистый 4 -деметилэппподофиллотоксип-8-D- (и — фторбензилидеп) - глюкозид. Из абсолютпого спирта получают бесцветные кристаллы с т. пл. 265 — 270 С; (а) " = — 105 (с 0,509 в хлороформе).

Пример 10. -1 -Де етилэппподофиллотокс? í-(a D càëHöIIëHäåíãëþêoçèä.

1,5 г сухого 4 -деметилэпиподофиллотоксинP-D-глюкозида прибавляют к 30 л л сухого салицилового альдегида и 3,0 г ионообменного порошка Dowex (типа 50 ?VX2), сушенного ; ac HpH 120 С I? высо?сом вак"i"? х?е. Возду х в колбе ытссняют ",çîòîì и размешивают реакционную смесь без доступа влаги при комнатной Terai??cpa Type. Наолюда?от за ходом конденсации прп помощи тонкослойной хром ;тографии па плитках силикагеля с . лороформом --,1O% мстапо IQ средствами.

Через 5 час отфильтровыва?от катализатор и промыва1от еще раз хлороформом. Выпареппый фильтрат очища?от 100 г силикагеля (крупность зерна 0,05 — 0,2 я?,я). После отделения салпциловогс альдсгида (экстракт хлороформа) элюирую г вещество хлороформом

-/-5% метанола. Получают индивидуальный при тонкослойной хроматографии продукт.

Для анализа растворяют вещество в 5 ял ацетона ll этст раствор прибавляют по каплям при персмешиванип к 100 ял находящегося в приемнике пептана. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин-fl-D-салицилиденглюкозид получаетc5I как бесцветный аморфный порошок с т. Пл.

182 — 188 C; сс), =103,7 (с 0,633 в хлороформе) .

В табл. 2 дан ряд других, не известных до сих пор соединений, синтезированных аналогично примеру 11, с их свойствами и примененными ь данном случае исходными соединениями.

Пример 11. 4 -ДеметилэпиподофиллотоксН?i-j3-D-(î-метоксибензилиден) -глюкозид.

9 г О-метоксибензальдегида растворяют в 60 я?л питрометана, прибавляют 1,5 г сухого

4 -деметилэпиподофилотоксин-13 - D — глюкози,а и 150 лг II-толуолсульфокислоты. Серо-желтую суспспзшо размешивают в среде азота без доступа влаги при комнатной температуре. За ходом реакции конденсации наблюдают при помощи тонкослойной хроматографии (система: хлороформ+6% метанола; хлороформ— метанол — вода (70:25:5). Через 5 час имеется только нехшого исходного материала кроме продукта и возникающего немного медленнее побочного вещества. Затем разбавляют реакLlHоппую смесь 500 ял хлороформа и взбалтывают четыре раза по 25 .чл воды. Органическую фазу фильтруют через сульфат натрия и выпаривают в вакууме. Получают маслянистый, буро-желтый продукт, который очи313351

Таблица 2

Изготовленное из 4 Точка плавления

Соединение деметилэпиподофиллотоксин+Э-глюкозида и (а) о — — — 84,5 (с 1,044 в анетопе) 206 †2

4 - Деметилэпиподофениллотоксин- лг-Метоксибензальдеда

-р-D-(лг-метоксибензилидсн) - глюкозид (а) о — — — 91,3 (с 1,084 в хлороформе) (а)о = — 1017 (с 0,803 в хлороформе) 179 †1 о-Хлорбепзальдегида

173 †1.и-Хлорбензальдегида метана и затем прибавляют 9 лгл о-толуплового альдегида и 150 гил и-толуолсульфокислоты. Исходную смесь размешивают при комнатной температуре также без возду«а и вла5 ги. Через 2 час возникает прозрачный раствор и в тонкослойпой «роматограмме (промывное средство: хлороформ +15% метанола) исходнь,й материал почти исчез. Реакционный раствор разбавляюг 500 лгл хлороформа и затем

10 взбалтывают четыре раза по 25 игл воды. Органпческую фазу сушат над сульфатом натрия и выпарпгают, Остаток поглощают на заполненной 70 г сплпкагеля «Черн» колонне.

Путем элюированпя хлороформом можно от15 делить непревращенный еще о-толуловый альдегид. Последующие фракции (с хлороформом —, 2% метанола) дают чистое при тонкослойной хроматографии производное о-метплбензплидепа. Для анализа растворяют веще20 ство в 3 лгл ацстона и этот раствор прибавляют по каплям и при перемешпвашги к 300 игл на«одящегося в приемнике пентана.

4 -Деметилэпиподофиллотоксин-P - D - (о-метилбензплиден)-глюкозид получается как бес25 цветный аморфный порошок с т. пл. 174—

180 С; (с )"-„ = — 94,7 (с 0,730 в хлороформе) .

П п и t c p 14. 4 -1)гнетилэппподофиa.IDTo i30 си-6-D- (лг-гидроксибензилпден) -глюкозид.

K раствору 9 г лг-гпдроксибензальдегпда в

75 лг.г нитрометана приоавляют 1.5 г сухого

4 -деметплэпиподофпллотокспн — P - D-глюкозида и затем 150 лиг п-толуолсульфокпслоты.

35 гКелтоватую суспензию рамешпвают 5 час в азотной среде без доступа воды, прп этом образуется прозрачный раствор. Затем разбавляют реакционный раствор 500 игл хлороформа и промывают пять раз по 25 лиг воды.

40 Органическую фазу фильтруют через сульФат натрия и выпаривают в вакууме. Получают светло-желтое порошкообразное вещество, которое хроматографируют 110 г силикагеля « Черн» После отделения альдегида хло45 роформом +3р/р метанола элюируют оставшееся вещество «лороформом+6oр метанола. Индивидуальные при тонкослойной хроматографии фракции растворяют в аце4 -Деметилэпиподофиллотоксин

-D- (о-хлорбензилидсн) -глюкозид

4 -Деметилэпиподофиллотоксин

-D- (лг-хлорбензилиден) -глюкозид щают 120 г силикагеля «гЧерк». После отделения альдегида (экстракт хлороформа) элюируют оставшееся вещество хлороформом

+2% метанола, Эта хроматография дает производное о-метоксибензилидена, чистое по данным тонкослойной хроматограммы. Перекристаллизация из 13 мл горячего спирта дает бесцветные кристаллы с т. пл. 243—

250 С; (аJ — 74 4 (с 0 884 в ацетоне) Пример 12. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин-P-D- (n-гидроксибензилиден) -глюкозид.

К 2 г сухого 4 -деметилэпиподофиллотоксин-P-D-глюкозида придают 12 г гг-гидроксибензальдегида, 4 г ионообменной смолы Dowex (тип 50 1Ч 2, сукой) и 100 .ил нитрометана. Реакционную смесь размешивают без влаги в среде азота при комнатной температуре и контролируют ход конденсации при помощи тонкослойной хроматографии (плитки силикагеля, хлороформ 15% метанола как промывные средства) . Примерно через

3 час реакция вполне кончена. Суспензию фильтруют, промывают остаток на фильтре

3 раза хлороформом. Затем разбавляют соединенные фильтраты 300 лгл хлороформа и взбалтывают три раза по 25 лгл воды. Из органической фазы получают после сушки над сульфатом натрия и после выпаривания светло-желтоокрашенный остаток, который хроматографируют для очистки 80 г силикагеля.

Путем элюирования хлороформом +2,5% метанола можно сначала удалить избыточный альдегид. Дальнейшие элюенты, полученные хлороформом +4% метанола, содержат индивидуальный при тонкослойной хроматографии кондепсационный продукт. Сырой препарат растворяют в 4 лгл пентана. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин - P-D- (n-гидроксибензилиден)глюкозид выделяется при этом как бесцветный аморфный порошок с точкой плавления

196 †2 С; (а) — 96,2 (с 0,981 в метаноле).

Пример 13. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин-P-D- (о-метилбензилиден) -глюкозид.

1,5 г сухого 4 -деметилэпиподофиллотоксинf-D-глюкозида суспендируют в 30 лгл нитроВращение плоскости полярггзации

313351 тоне, затем концентрируют их в вакууме примерно до 7 мм и прибавляют 20 лтл простого эфира. 4 -деметилэпиподофиллотоксин-Р-Р- (м-гидроксибензилиден) -глюкозид получается в форме бесцветного, амопфного порошка с т. пл. 189 — 194oC. (сс)" =- — 99 9 (с 0,766 в метаноле) .

Пример 15. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин-P-D- (м-нитробензилиден) -глюкозид.

30 г лт-нитробензальдегида растворяют в

45 мл нитрометана и затем прибавляют 1,5 г сухого 4 -деметилэпиттодофиллотоксин р-1.тглюкозида и 6 г ионообменной смолы Dowex (тип 50 % 2, сухая). Исходную смесь размешивают в среде азота без доступа влаги и при комнатной температуре. Через час имеется только небольшое количество исходного материала в тонкослойной хром атограмме (промывное средство: хлороформ -т-6,то метанола) . Катализатор отфильтровывают и промывают хлороформом. Темноокрашенный фильтрат разбавляют 400 лтл хлороформа и затем взбалтывают три раза по 25 мл воды.

Фазу хлороформа сушат над сульфатом натрия и выпаривают. Получают жидкость, которая постепенно кристаллизуется, Сырой продукт растворяют в 30 мл хлороформа и хроматографируют 120 г силикагеля «Мерк». После отделения альдегида (экстракт хлороформа) элюируют оставшееся вещество хлороформом +2О/о метанола. Эта хроматографическая очистка дает в тонкослойной хроматограмме индивидуальный продукт. Для анализа растворяют вещество в 20 мл ацетона и раствор прибавляют по каплям к 100 мг находящегося в приемнике пентана. Получают светло-желтый аморфный порошок с т. пл.

178 — 185 С; (и) д = 77,5 (с 0,831 в ацетоне) .

Пример 16. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин-Р-О- (и-метилбензилиден) -глюкозид.

1,5 г 4-деметилэпиподофиллотоксин-Р-Рглюкозида суспендируют в 30 мл нитрометана, прибавляют 9 мл м-толуилового альдегида в 75 мг и-толуолсульфокислоты и перемешивают исходную смесь при комнатной температуре без доступа кислорода и влаги, Примерно через 45 мин разбавляют реакционную смесь 450 мл хлороформа и взбалтывают три раза по 25 мл воды. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и испаряют растворители в вакууме. Получаемое при этом желтое масло хроматографируют для очистки

80 г силикагеля «Мерк». 3а отделением избыточного альдегида хлороформом как элюентом следует при помощи хлороформа +1,5 /о метанола индивидуальная по тонкосл айной хроматографии фракция продукта (проверенного на плитках из силикагеля с хлороформом +6 /о метанола как промывными средствами). Перекристаллизацией продукта из хлороформа — метанола (1:1) и из чистого метанола получается чистый 4-деметилэпиподофиллотоксин-6 - D-(и-метилбензилиден) -глю10

Зо

12 козид с т. пл. 248 †2 С; (и) = †1,8 (с 0,791 в пиридине).

П тт и м е -р 1?. 4 -Деметилэпиподофтт злотокспн-P-D - (4-гидпокси-3 - тстоксибсттзилттдетт)глюкозид.

К суспензии 1,5 г сухого 4 -деметилэпиподофиллототссин-P-D-глюкозича в 30 мл нитрометатта чппбавляктт 30 г ванилина и 6 г ионообменной смолы DowI x (тип 50 AV>2, сухая) и взбалтызатот реакционную смесь в среде азота без доступа влаги. Примерно через

90 лтттн отфильтровывают катализатоп, разбавляют фильтрат 500 мл хлороформа и взбалтывают три раза по 25 мл воды. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и затем выпаривают растворитель в вакууме.

Для чистктт хооматографирутот остаток 100 г сттлитгагс ля «Мерт<». причем элтосттта ттт служат хлороформ +6 /о метанола. Соед:тняют ттпдивидуа,тьньте по топкосчойной xпоматографии фракции (плитки сттлтткагсля, промывное средство: хлороформ +15О .; метаттолат и перекристаллизовывают из 15 мг горячего метанола. Получатот 4-деметилэпиподофиллотокситт-P-D-(4 — гидрокси-3 - метоксибензилиден) -глюкози.т, как бесцветные кристаллы с т. пл. 243 — 250 С; (n) p =- — 169,9 (с 0,637 в пиридине).

Пример 18. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин - P-D -(2,3-диметоксибепзилиден) - глюкозид.

К суспензии 1,5-4 -деметилэпиподофиллотоксин-P-D-глюкозида в 30 мл нитрометана прибавляют 15,0 г 2,3-диметоксибензальдегида и 6,0 г сушенной ионообменной смолы (Dowex тип 50 X(I+2, сухая). После взбалтывания реакционной смеси в течение 1 час в среде азота и без доступа влаги в тонкослойнои хроматографии можно установить превращение почти на 85% (контроль в тонкослойной хроматограмме: плитки силчкагеля и хлороформ — метанол — вода 70: 25: 5 как промывные средства). YBT3ëèçàòîð отфильтровывают и промывают остаток на фттльтре хлороформом. Разбавляют сое",èíI.ííûå фильтраты

400 мл хлороформа и взбалтывают три раза по 25 мл воды. Органическую фазу вт- па;птвают после сушки над сульфатом натрия. Остаток хроматографируют 100 г силикагеля

«Мерк», причем элюентами служат хлороформ +2 /о метанола. Растворяют сосдиненньте фракции индивидуальный по тонкослойной хроматографии материал — в 10 .;:л ацетона и этот раствор прибавлятот по каплям к 100 мл находящегося в приемт:тткс тп нтана, причем осаждается аморфный 4 -,",еметилзпиподофиллотоксин — Р-D- (2,3 - диметоксибензилиден)-глюкозид, т, пл. 174 — 177 С; (Ix)pз =

= — 86,1 (с 0,803 в хлороформе) .

Пример 19. 4 -Деметилэпиподофиллотоксип-Я-D- (2-этокси-3 - метоксибензилидет:, -глюкозид.

3!335!

13

К суспензии 1,5 г 4 -деметилэпиподофиллотоксин+Р-глюкозида в 30 мл 2-этокси-3-метоксибензальдегида прибавляют 0,760 г сухого хлористого цинка и размешивают исходную смесь в среде азота и без доступа влаги. Примерно через 2,5 час в тонкослойной хроматограмме (плитки из силикагеля, промывное средство: хлороформ+б метанола) можно обнаружить только небольшое количество непревращенного глюкозида. К суспензии прибавляют 100 мл хлороформа и 100 мл воды и хорошо взбалтывают. Затем экстр агируют водную фазу еще два раза по 30 мл хлороформа. Соединяют все фазы хлороформа, фильтруют над сульфатом натрия и затем BbIIIBpHBBIGT. Остаток желто-оранжевый раствор хроматографируют 75 г силикагеля

«Мерк». После элюирования избыточного альдегида хлороформом можно при помощи хлороформа+2 /о метанола извлекать продукт.

Соединяют индивидуальные при тонкослойной хроматографии фракции, растворяют в

25 мл метанола и размешивают 10 мин при комнатной температуре с небольшим количеством активированного угля. После фильтрации до осветления над тальком выпаривают светложелтый раствор. Получаемую желтоватую пену растворяют в 5 мл ацетона и при перемешивании прибавляют по каплям этот раствор к 100 мл находящегося в приемнике пентана, причем выпадает хлопьевидный осадок. Фильтрование и сушка дают 4 -деметилэпиподофиллотоксин - P-D- (2-этокси-3-метоксибензилиден) -глюкозид как бесцветный порошок с т. пл. 166 — 175 С; (а) „ = — 83,2 (с 0,863 в хлороформе).

Пример 20. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин+Р-анисилиденглюкозид.

К 0,5 г сухого 4 -деметилэпиподофиллотоксин-р-Р-глюкозида прибавляют 10 мл анисового альдегида и 0,25 г безводного хлористого цинка и взбалтывают реакционную смесь в среде азота при комнатной температуре.

Спустя 6 час в тонкослойной хроматограмме можно обнаружить только следы исходного материала (плитки силикагеля, промывное средство: хлороформ+6 /о метанола). Реакционный раствор разбавляют 30 мл хлороформа и промывают несколько раз водой.

Выпариванием сушенной над сульфатом натрия фазы хлороформа получают маслянистый остаток. Масло поглощают 5 мл ацетона и этот раствор прибавляют по каплям при перемешивании к 200 мл пентана, причем выделяется сырой кристаллизационный продукт в виде хлопьев. Для очистки хроматографируют на 100 г силикагеля (крупность зерна

0,05 — 0,2 мм). Соединяют элюированные хлороформом+2О/о метанола главные фракции и перекристаллизовывают из абсолютного спирта. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин+Ранисилиденглюкозид получают как бесцветные кристаллы с т. пл. 248 — 250 С; (а) = — 92,5 (с 0,503 в хлороформе).

14

К смеси 1,5 г .сухого 4 -деметилэпиподофиллотоксин-р-D-глюкозида в 75 л л ацетона прибавляют 3,0 г безводного хлористого цинка и размешивают в среде азота при 20 С без доступа влаги. За ходом конденсации наблюдает при помощи тонкослойной хроматографии (плитки силикагеля, промывное средство: хлороформ — метанол — вода 70:25:5 и (или) хлороформ+6 /о метанола). После перемешивания в течение 90 ли н прибавля .от по каплям прозрачный реакционный раствор к 500 мл холодного «лороформа и отфильтровываютт обр азу ющнйся осадок. Фильтр ат промывают водой до нейтральной реакции, сушат над сульфатом натрия и выпаривают. Остаток

«роматографируют 100 г силикагеля («Мерк», крупность зерна 0,05 — 0,2 мм), причем элюентаъ и служат «7ороформ+5 /o метанола. Соединяют индивидуальные главные фракции, ",or7oùàþò 10 мл ацетона и этот раствор прнбавляloT по каплям прп перемешивании и 100 мл 11-пентана, причем осаждается 4-деметилэпиподофиллотоксин-р - Р - изопропилиденглюкозпд в форме бесцветны««лопьев.

После отфильтровывапия и сушки получают аморфный бесцветный порошок с т. пл. 173—

176 С; (аЯ = — 106,3 (с 0,938 в «лороформе) .

Пример 22. 4 -Деметилэпиподофиллотокспн-р-D-циклопентилиденглюкозид.

К смеси 2 г сухого 4 -деметилэпиподофил7îòîêñèí-8-D-глюкозида в 40 мл циклопентанона прибавляют 4 г ионообменного порошка (Dowex W+2 сухого) и размешивают исходную смесь прн комнатной температуре без доступа влаги в среде азота. За ходом конденсации наблюдают при помощи тонкослойной хроматографии (плиткн из силикагеля, промывное средство: хлороформ-, -15 /o метанола). Примерно через 2 час фильтруют от катализатора. Фильтрат разбавляют 500 мл

«лороформа и затем промывают несколько раз водой. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и выпаривают. Получаемый остаток «роматографируют 120 г силикагеля («Мерк», крупность зерна 0,05 — 0,2 мм), причем элюентами служат хлороформ +4О/о )c:, QI1o 7а. По,1$92IoT главные фракции, рь.е, однако слабо очищены. Для получения гпстого препарата хроматографируют вновь при помощи 80 г силикагеля причем теперь применяюг хлороформ+ЗОО/о ацетона для элюированпя. Соединяют индивиду альные при тонкослойной хроматографии фракции и перекристаллизовывают из этанола — простого эфира. Получают чистый 4 -деметилэпиподофиллотоксин-(I- D - циклопентилиденглюкозид с т. пл. 176 — 182 С; Яв„ = — 105)8 (с 0,834 в хлороформе).

Пример 23. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин+Р-циклогексилиденглюкозид.

К 1 г сухого 4 -деметилэпиподофнллотоксин-P-D-глюкозида прибавляют 20 мл цикло313351

15 гексанона и 0,5 г безводного хлористого цинка и взбалтывают смесь без доступа влаги в среде азота и при комнатной температуре. За ходом конденсации наблюдают с помощью тонкослойной хроматографии (плитки силикагеля, промывное средство: хлороформ+6 /о метанола). Через 2,5 час разбавляют прозрачный раствор 60 лсл хлороформа и взбалтывают несколько раз водой, Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и выпаривают в вакууме. Получаемый остаток хроматогряфируют на 100 г силикагеля («Мерк», крупность зерна 0,05 — 0,2 ям), причем элюентами служат xëoðoôoðм+2 Д метапо Tà. Соединяют индивидуальные главные фракции и перекристаллпзовывают из абсолютного спирта. 4,7еметилэпиподофиллотоксин - Д - D-циклогексилиденглюкозид получают в форме бесцветных кристаллов с т. пл. 188 — 190 С; Icv) o

= — 103,0 (с 0,515 в хлороформе).

Пример 24. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин-P- (D-изопропилбензплиден) -глюкозид.

К раствору 1,5 г сухого 4 -деметилэпиподофи.7лотокс rrr-p-D-глюкозида в 30 ril кумиволого яльдегида прибавляют, 0,750 г сухого хлористого цинка и затем размешивают в среде азота и без доступа влаги. Примерно через

2,5 час можно обнаружить только немного свободного глюкозида в тонкослойной хроматограмме (плитки силикагеля, промывное средство: хлороформ+6 метанола). Ке7товатую суспензиlo погзощают 200 л!л,;Iopoформа, прибавляют 150 .ил воды и хорошо промывают. Разделяют водную фазу и экстрагируют еще два раза, употребляя по 40 л г хлороформа. Все фазы хлороформа соединяют, промывают три раза по 30 лл воды, сушат пад сульфатом натрия и затем выпаривают.

Остаток — оранжево-красное масло хроматографируют 75 г силикягеля «Мери». Путем элюирования хчорофоpмом можно удалить избыточный альдегид. Хлороформом+2% метанола извлекают копденсациопный продукт из колонны. Индивидуальные при тонкослойной хроматографии фракции растворяют в

25 ил метанола и размешивают 10 лгии при комнатной температуре с 700 иг яктивпрованного угля. Фильтрованный через тальк расгвор выпаривают в вакууме и поглощают остаток 5 лл ацетона. Прибавлением по каплям этого раствора в 75 лл находящегося в приемнике пентаня осаждают 4 -деметилэпштодофиллотоксин-P — D- (n-изопропилбснзилидеп)глюкозид, слегка розовый порошок; т. пл.

172 — 179 С; (сс)" = — 97,3 (c 0,958 в хлороформе).

4 -Деметилэпиподофиллотоксип - б - D-глюкозид, служ ащий исходным м атер налом для изготовления новых соединений обгцей структуры 1, изготовляют по описываемым ниже методам.

А. Деметплэпиподофиллотокспн. 2 г 4 -деметилподофнл,7отокспна растворяют в 25 лл

16 ацетона и 15 лл воды и после прибавления

5 лл концентрированной соляной кислоты разогревают 2 час с обратным холодильником.

Затем нейтрализуют кислоту твердым карбонатом бария, отгоняют в вакууме при 40 С ацетон. Осажденный материал поглощают в хлороформе+5 / ацетона, сушат раствор над сульфатом натрия и выпаривают в вакууме.

Остающийся остаток хроматографируют на силикагеле хлороформом+1 /д метанола, причем получают сначала загрязненный, затем чистый 4 -деметилэпиподофиллотоксин и непревращенный исходный материа l.

Кристаллизация чистых фракций 4 -деметилэпиподофиллотоксина проводится из хлороформа и 230 С; (а) o ——

= — 69,8 (с 0,630 в хлороформе).

Б. Карбобензокси-4-деметилэпиподофиллотоксин. 60 г пульверизованного как пыль 4 деметилэпиподофиллотоксина суспенднруют в

1000 ял безводного этиленхлорида и после прибавления 19 ял абсолютного пиридина охлаждают до — 10 С. При перемешивании без доступа в.7ажности прибавляют rio каплям при — 10 С в течение 2,5 час раствор 34 г бепзилового эфира хлормуравьиной кислоты в100 л,л эти Icнхлорида и затем дают реагировать еще 30 мин. Затем промывают реакционный раствор, сушат органическую фазу над су7ьфатом натрия, выпаривают в вакууме и сушат остаток в высоком вакууме при 70—

80 С. Кристаллизация сырого продукта из ацетона — простого эфира и затем двукратная кристаллизация из метанола дает 4 -карбобензокси-4 -деметилэпиподофиллотоксин с двойной т. пл. 117 — 119 С. Путем сушки в высоком вакууме сначала при 95 — 110 С и затем при 130 С или путем кристаллизации из ацетона — — простого эфира получают свободную от растворителя форму с т. пл. 201—

204"-С; (я) „ = — -43,9 (c 0,535 в СНС41.

В. Тетра-о-ацетил-4 -кар бобензокси-4-деметилэпиподофиллотоксин Р-В-глюкозид. 26,8 г

4 - карбобензокси-4 - деметилэпиподофиллотоксина растворяют при подогревании в 70 лл этиленхлорида. Раствор ох,7аждают до +15 С и и нему прибавляют прп нсремешпвании

26,0 г 2,3,4,б-тетра-о-ацети.-.-"- D-глюкозы. Как только растворилась преоб7я raющая часть тетраацетил-8-D-глюкозы, охлаждают быстро до температуры от — 11 до — 12 С без влаги.

1-1есмотря на небольшие количес;ва нсрастворспных исходивших соединений прпоявляют зятем по каплям при внутрсннеп тс,,шерятуре от — 10 до — 12 С 17,5 .ил предварпте.7ьно ох.7аждснногс до — !О С этилэфпра трехфтористого бора (48 / ВГ ) в течение 1О лиц и затем размешивают еще 40 лак при — 10 С.

Затем прибавляют по каплям при перемешиванги и охлаж IcIIHH смесь 17,5 лил аосолюткого пирпди и 35 нл этиленхлорида и после приоавлепия еще 200л лэтиленхлорида взбал7ывают етыре раза по 100 лил воды. После сушки над сульфатом натрия выпаривают органическую фазу в вакууме и сушат остаток при 70 С в высоком вакууме. Сырой продукт растворяют в 125 мл горячего этанола, прибавляют при перемешивании 375 лгл воды и размешивают при охлаждении извне ледяной водой, пока маслообразный комковатый вначале осадок не превратится в рассыпчатый порошок. Затем отсасывают осадок, промывают смесью из этанола — воды (1: 3) и сушат в высоком вакууме при 70 С. Этот сырой продукт растворяют в 300 мл горячего метанола, фильтруют от немногих нерастворенных хлопьев и выпаривают фильтрат в вакууме. После сушки остатка в высоком вакууме при

70 С получают тетра-о-ацетил-4 -карбобензокси-4 -деметилэпиподофиллотоксин-/ - D-глюкозид как белую пену, (а) „ = — 41,7 (СНС1з) .

Для дальнейшей чистки можно кристаллизовать из бензолапентана или смеси из бензола-циклогексана. Чистейший тетра-о-ацетил-4 -карбобензокси-4 - деметилэпиподофиллотоксин-Р-Р-глюкозид плавится при 167—

9оС. fajго = — 46,6 (СНС1з).

Предмет изобретения

1. Спосоо получения новых глюкозидов общей формулы I

Я 0

0Н

25 тый 4 -деметилэпиподофиллотоксин-P-D-глюкозид. Отдельные фракции исследуют в тонкослойной хроматограмме на плитках силикагеля при помощи промывного средства изо5 пропилацетат — метанол (4: 1), насыщенный водой, и соединяют фракции глюкозида и кристаллпзуют два раза из метанола. 4 -Деметилэпиподофиллотоксггн-Р-Р-глюкозпд плавится прп 222 — 230 С, другая модификация

10 при 262 — 264 С; (а),", — 88 (с 0,507 в метаноле).

Г. Тетра-о-ацетил-4 -деметилэпиподофиллотоксин-Р-Р-глюкозид. Для отщепления карбобензоксиостатка из тетра-о-ацетил-4 -карбобензокси-4 - деметилэпиподофиллотоксин - рD-глюкозида растворяют 13,4 г этого соединения в 100 лгл ацетона-этанола (1: 2), к этому прибавляют 0,5 мл ледяной уксусной кислоты и 2 г палладия на угле (с 10О О Pd) и гидрируют при 20 С. Затем отфильтровывают катализатор, промывают его добавочно теплой смесью из ацетона — метанола и выпаривают фильтрат в вакууме. Остаток заливают 100 лгл кипящим этанолом, дают ему кристаллизоваться и сушат кристаллы после отсасывания и промывания метанолом в вакууме. Чистейший тетра-о-ацетил-4 -деметилэпиподофиллотоксин-Р-D-глюкозид кристаллизуется в тонкие иголки с т. пл. 225 — 227 С; (а)грг — — — 64,4 (с 1,024 в хлороформе).

Д. 4 -Деметилэпиподофиллотоксин+Р-глюкозид. 2,0 г полученного по методу Г тетра-оацетил-4 - деметилэпиподофиллотоксин-P - Dглюкозида и 1 г безводного ацетата цинка разогревают в 30 лгл абсолютного метанола

25 час с обратным холодильником. Возникший белый осадок растворяют затем прибавлением нескольких лгл ледяной уксусной кислоты и легким подогреванием, удаляют растворитель в вакууме при 40 С и поглощают остаток в 50 лгл хлороформа — бутанола (4:1).

Органическую фазу промывают два раза по

10 лгл воды, выпаривают после сушки над сульфатом натрия в вакууме и хроматографируют остаток силикагелем. Изопропилацетат — метанол (9: 1), насыщенный водой, элюирует сперва неполярные части, затем чис0СН

ОН

30 где

Rt — водород;

Кг — алкил, алкенил-, циклоалкил-, незамещенный или замещенный аралкпл- или аралкенил-, замещенный арил-, 35

Кг и Кг — алкил-, или вместе образуют алкиленовую цепь, RÄ

С=о, R3

50 где Rt и R2 имеют указанное значение; или с соответствующими низшими кеталями илп ацеталями в присутствии кислого, водосвязывающего катализатора в сухом инертном органическом растворителе с последующим вы55 делением продукта известными приемами.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве кислого катализатора применяют кислоты Льгоиса или катионит с сульфокислотными группами в Н+-форме.

60 3. Способ по пп. 1, 2, отличающийся тем, что процесс ведут с азеотропной отгонкой реакционной воды или образующегося спирта в вакууме прп температуре от 20 30 30 С.

40 отличающийся тем, что, 4 -деметилэпиподофпллотоксин-P-D-глюкозид подвергают взаимодействию с карбонильным соединением общей формулы II