Способ доклинической диагностики аутоиммунного эндотоксикоза при гестации

 

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике. Способ позволяет выявить своевременно на доклиническом уровне группы риска по развитию аутоиммунного эндотоксикоза при беременности. Проводят подсчет числа тромбоцитов в крови, а также исследуют спектрограмму эритроцитов для определения безбелковых экстрактов эритроцитов низкой и средней молекулярной массы, рассчитывают диагностический индекс D по формуле: D=К₁Е₁+К₂E₂+К₃Tr+const, где E₁ и Е₂ - экстинции безбелковых и экстрактов эритроцитов низкой и средней массы (ед.опт.пл.) при ₁=254 нм и ₂=280 нм соответственно; Тr - число тромбоцитов (10⁹/л); K₁, К₂ и К₃ - коэффициенты: К₁= - 4,297; К₂=4,959; К₃=0,0378; const=-3,585, и при значении D более 0,8 диагностируют отсутствие аутоиммунного эндотоксикоза при беременности, а при D менее 0,8 диагностируют развитие аутоиммунного эндотоксикоза.

Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической лабораторной диагностике. Может быть использовано врачами других специальностей - акушерами-гинекологами, анестезиологами, хирургами.

Аналогом данного изобретения являются описанные в отечественной литературе методы параклинической оценки тяжести эндотоксикоза.

Унифицированным маркером эндотоксикоза является уровень среднемолекулярных (СМ) соединений плазмы крови, определяемых экспресс-методом Н.И. Габриэлян (1981). Однако следует отметить, что при начальных доклинических проявлениях эндотоксикоза этот показатель, как правило, остается в пределах нормы. Анализ современной литературы, проведенный за период 1980-2000 гг., позволяет выделить 2 группы методов диагностики данной патологии.

1. Большую часть представляют методы, в основе которых сделана попытка установления количественной зависимости между тяжестью эндотоксикоза и результатами параклинических исследований (Кальф-Калиф Я.Я., 1941 г.; Пафомов Г. А., 1980 г.; Габриелян Н.И., 1981 г.; Абрамченко В.В., 1988 г.; Лаберко Л.А. , Родоман Г.В., Луканин Д.В., Оболенский В.Н., 2000 гг.).

Недостатком этих методов является констатация уже возникших нарушений на основе анализа деятельности лишь одной из систем жизнеобеспечения.

2. Ряд авторов предлагают математические модели для параклинической оценки эндотоксинемии (Тарелкина М.Н., 1991 г.; Малахова М.Я., 1995 г.; Кузнецов Н.Н., 1996 г.; Жилина Н.М., 1999 г.). В этих работах углубленно анализируются возникающие в организме метаболические нарушения и исходя из взаимоотношений эндогенной интоксикации и возможностей функциональной системы детоксикации выделяются основные стадии развития эндотоксикоза. Разработаны нормативные показатели, показана их динамика при шокогенной механической травме, нефрологических заболеваниях, сепсисе, ожогах, а также у населения, проживающего в неблагоприятных экологических условиях. Перечисленные выше методы объединяет использование в основе системного подхода с последующей математической обработкой методами распознавания образов. Однако существенным недостатком является возможность диагностики аутоиммунного эндотоксикоза при манифестации имеющейся уже фоновой нозологической патологии. Малахова М. Я. разработала способ прогноза данного осложнения с ранних сроков, но на основе деятельности одной системы - детоксикации. Кроме того, рассмотренные аналоги не могут использоваться в акушерской практике, так как не учитывают при клинической интерпретации параклинических показателей особенности физиологии беременного организма.

Прототипом предлагаемого метода является описанный в литературе способ параклинической оценки тяжести аутоиммунного эндотоксикоза при патологическом течении гестации (Левченко В.Г. 1999 г.). Диагностика тяжести эндотоксикоза указанным методом осуществляется по формуле с использованием трех показателей: числа тромбоцитов, концентрации мочевины и молекул средней массы (МСМ) в сыворотке крови (при длине волны 280 нм). Однако на начальной (доклинической) стадии развития эндотоксикоза, в так называемой латентной фазе заболевания, спектрограмма плазмы крови не отличается от нормы, повышается только концентрация МСМ на эритроцитах. Недостатком данного способа доклинической диагностики, по нашим результатам исследования, следует считать и использование в качестве маркера эндотоксикоза концентрацию мочевины. Данный показатель, как правило, повышается при манифестации заболевания (в стадии декомпенсации, когда регистрируется повышение МСМ и в плазме и на эритроцитах). Учитывая все вышесказанное, считаем целесообразнее раннюю, доклиническую диагностику эндотоксикоза строить на исследовании спектрограммы эритроцитов.

Цель изобретения заключается в разработке способа доклинической диагностики аутоиммунного эндотоксикоза при осложненном течении беременности, не требующего специальных диагностических наборов, а следовательно, и больших материальных затрат, доступного в исполнении любой биохимической лаборатории. Предлагаемый метод позволит своевременно на доклиническом уровне выявить группы риска на развитие данного осложнения. Способ основан на биохимическом и гемостазиологическом исследовании крови у беременных женщин в 3 триместре беременности с последующим подсчетом диагностического индекса.

Способ осуществляют следующим образом.

Исследование крови проводят натощак в утреннее время. Для выполнения анализов берут 3 мл венозной крови путем пункции вены на верхней конечности в гепаринизированный шприц (25 ЕД на 1 мл крови). Кровь осторожно выдавливают в пробирку, центрифугируют при 3000 об./мин в течение 30 мин. Далее эритроцитарную массу отделяют и используют для определения веществ низкой и средней молекулярной массы (ВНиСММ). К 0,5 мл эритроцитов прибавляют 0,5 мл 15%-ного раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ), пробы перемешивают и через 5-7 мин центрифугируют при 6000 об./мин в течение 15 мин. Отбирают надосадочную жидкость (супернатант) в количестве 0,5 мл, разводят дистиллированной водой в соотношении 1:9 и фотометрируют против контроля в кюветах с длиной оптического пути 1 см при ₁ = 254 нм и ₂ = 280 нм.

Количество тромбоцитов в крови определяют фазово-контрастным методом (G. Brecher et al., 1953).

В работе использованы методы кластерного и пошагового дискриминантного анализа. Расчеты производились с помощью пакета прикладных программ "Квазар-Плюс".

На основании математической обработки полученных результатов методом дискриминантного анализа выведено решающее правило, представляющее собой алгоритм информационной поддержки клинического решения: аутоиммунный эндотоксикоз.

Решающее правило для скринингового обследования беременных женщин с целью выявления группы риска заключается в определении диагностического индекса D: D=K₁E₁+К₂Е₂+К₃Тr+const, где E₁, E₂ - экстинкции безбелковых экстрактов эритроцитов (ед. опт. пл. ) при ₁ = 254 нм и ₂ = 280 нм соответственно; Tr - число тромбоцитов (10⁹/_л), K₁, K₂, К₃ - коэффициенты: K₁= - 4,297, К₂=4,959, К₃=0,0378, const=-3,585.

При D более 0,8 делают достоверное заключение (р<0,001) об отсутствии признаков эндотоксикоза.

При D менее 0,8 прогнозируют развитие эндотоксикоза.

Предлагаемый способ дает вероятность правильного выявления здоровых в 98% и больных в 97% случаев при уровне значимости Р<0,001. Анализируя концентрацию ВНиСММ на эритроцитах, можно говорить о функциональной состоятельности системы детоксикации, поскольку уже в первой латентной фазе интоксикации отмечается компенсаторное повышение уровня среднемолекулярных соединений на эритроцитах.

Чувствительность метода - 98,1%, специфичность - 97%, эффективность - 97,6%.

Пример 1. Соловьева О.В., беременность 39-40 недель. Поступила на подготовку к родам в 1 акушерское отделение ( 6847). Проведено углубленное клинико-лабораторное обследование. Подтверждено неосложненное течение гестационного периода. При исследовании крови на эндотоксикоз получено D=1,64, что также соответствует неосложненному течению беременности без признаков эндотоксикоза. Беременность завершилась стремительными срочными родами в 40-41 неделю, ребенок в удовлетворительном состоянии 8/9 баллов по шкале Апгар.

Пример 2. Морозова Л.А., беременность 38-39 недель, поступила на лечение в отделение патологии беременности ГУ НИИ ОММ по поводу отечной формы гестоза ( 565). При клиническом обследовании подтвержден диагноз "гестоз легкой степени тяжести" (по шкале Г.М. Савельевой). Исследование крови на определение тяжести эндотоксикоза показало: D= - 0,14, т.е. имеются признаки аутоиммунного эндотоксикоза. Проводилось лечение гестоза. Беременность завершилась срочными родами. Ребенок в удовлетворительном состоянии.

Пример 3. Липина В.Н., 32 года, беременность 35-36 недель, поступила на лечение в отделение реанимации и интенсивной терапии ГУ НИИ ОММ по поводу отечно-гипертонической формы гестоза ( 323). Состояние оценивалось как тяжелое: 14 баллов по шкале Г.М. Савельевой. Исследование крови на наличие признаков эндотоксикоза показало следующее: D= - 0,53, т.е. признаки эндотоксикоза.

Беременность завершена преждевременными оперативными родами. Ребенок оценен на 4/7 баллов по шкале Апгар и переведен в палату интенсивной терапии новорожденных.

Таким образом, предлагаемый способ выявления групп риска на развитие аутоиммунного эндотоксикоза позволяет своевременно решить вопрос о необходимости проведения комплексного параклинического обследования с последующей терапевтической коррекцией выявленных нарушений, особенно на начальных стадиях заболевания. Нам представляется возможным предложить для широкого применения данный способ выявления групп риска на развитие эндотоксикоза при скрининговом обследовании беременных женщин в динамике гестации. Методика не требует дорогостоящей материально-технической базы, специальных реактивов, удобна в исполнении при использовании минимального количества исследуемого материала, обеспечивает получение необходимой информации в течение часа, воспроизводима на любом уровне (от женской консультации до перинатального центра).

Источники информации 1. Абрамченко В.В., Костюшов Е.В., Щербина Л.А. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве. - СПб., 1995.

2. Владыка А.С., Левицкий Э.Р., Поддубная Л.П., Габриэлян Н.И. // Анестезиология и реаниматология. - 1987. - 2, - С. 37-42.

3. Ершов А.Л. // Эндогенные интоксикации. - СПб., 1994. - С. 70-71.

4. Жилина Н. М. Оптимизация диагностики эндогенной интоксикации: Дис. кан. биол. наук. - Тула, 1999.

5. Колемаев В.А., Староверов О.В., Турундаевский В.Б. Теория вероятности и математическая статистика. - М., 1991.

6. Лаберко Л. А., Родоман Г.В., Луканин Д.В., Оболенский В.Н. Фракционирование среднемолекулярных соединений сыворотки крови в ранней диагностике гнойно-септических осложнений у больных с распространенным перитонитом. Материалы Всероссийской конференции "Новые направления в клинической медицине". - Ленинск - Кузнецкий. 2000. - С. 41-42.

7. Левченко В.Г. // Клиническая лабораторная диагностика. - 1999. - 11. - С. 36.

8. Малахова М.Я. Метод регистрации эндогенной интоксикации: Пособие для врачей. С-Петербург, МАПО. - 1995.

9. Малахова М.Я. // Экстремальные состояния и постреанимационная патология: Сб. трудов Новосибирского мед. ин-та. - Новосибирск, 1989. - С. 89-91.

10. Медицинские лабораторные технологии и диагностика: Справочник. В 2-х т. Т. 2: Медицинские лабораторные технологии. / Под ред. Карпищенко А.И. - СПб., 1999.

11. Оболенский С.В., Малахова М.Я., Ершов А.Л. // Экстремальные состояния и постреанимационная патология. - Новосибирск, 1989. - С. 79-86.

12. Романов Ю.А., Маркина В.В., Антохин А.И. и др. Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы. - М., 1996.

13. Энциклопедия клинических лабораторных тестов. Под ред. Тица Н.У: Пер. с анг. - М., Лабинформ, 1997.

Формула изобретения

Способ диагностики аутоиммунного эндотоксикоза при беременности, включающий подсчет числа тромбоцитов крови, отличающийся тем, что исследуют также спектрограмму эритроцитов для определения безбелковых экстрактов эритроцитов низкой и средней молекулярной массы, рассчитывают диагностический индекс D по формуле
D=K₁E₁+К₂E₂+К₃Tr+const,
где E₁ и E₂ - экстинкции безбелковых экстрактов эритроцитов низкой и средней массы (ед. опт. пл.) при ₁=254 нм и ₂=280 нм соответственно; Тr - число тромбоцитов (10⁹/л); K₁, К₂ и К₃ - коэффициенты: K₁= - 4,297; К₂= 4,959; К₃= 0,0378; const= -3,585, и при значении D более 0,8 диагностируют отсутствие аутоиммунного эндотоксикоза при беременности, а при D менее 0,8 диагностируют развитие аутоиммунного эндотоксикоза.