Способ определения мочевины и креатинина в биологических жидкостях
Использование: медицина, для определения мочевины и креатинина в биологических жидкостях. Сущность: определение проводят колориметрическим методом в пробах слезы или пота, при этом потоотделение осуществляют введением в кожу методом ионтофореза парасимпатомиметика в присутствии антихолинэстеразного препарата, а слезоотделение вызывают с помощью тампона, смоченного нашатырным спиртом или соком лука. 1 табл.
Изобретение относится к медицине и касается видов патологии или состояний организма, связанных с нарушениями азотистого обмена, особенно при различных видах почечной патологии, обширных хирургических ранах, ожогах.
В последние годы в связи с возрастающей опасностью заражения СПИДом или другими вирусными инфекциями во всем мире усилия исследователей направлены на разработку неинвазивных методов диагностики. Наличие таких методов особенно актуально тогда, когда это касается хронических заболеваний, при которых необходим постоянный контроль за уровнем тех или иных показателей. Исследование состояния азотистого обмена представляет исключительный интерес как при различных хронических заболеваниях почек, так и при различных осложнениях, связанных с оперативными вмешательствами, травмами, ожогами, при заболеваниях, приводящих к нефропатиям. К числу последних относится, в частности, сахарный диабет, длительное и тяжелое течение которого сопровождается нефропатией, являющейся нередко одной из причин летального исхода. В таких случаях возникает необходимость в постоянном контроле за состоянием азотистого обмена, отражением которого служат такие показатели, как содержание мочевины и креатинина. При этом неинвазивный способ их определения как исключающий риск инфицирования и травматичности особенно важен, в частности, для больных, страдающих инсулинозависимым диабетом (и особенно для детей). Кроме того, существенный интерес для таких больных может представить метод, позволяющий провести исследование при любой тяжести состояния больного, например, при коматозных состояниях, хронических состояниях любой этиологии. В связи с этим наличие быстрого неинвазивного метода, отражающего функцию почек, представляет большой интерес для современной коррегирующей терапии. Наиболее подходящими биологическими жидкостями могут быть пот и слеза, получение которых возможно даже при коме. В настоящее время существует ряд способов для определения содержания мочевины и креатинина в таких биологических жидкостях, как кровь, моча. Наиболее близкими по достигаемому техническому результату к предложенному решению являются способы определения креатинина и мочевины в пробе крови: способ определения креатинина основан на его взаимодействии в щелочной среде с пикриновой кислотой с образованием оранжево-красного окрашивания (Меньшиков В. В. Микрометоды биохимического и иммуноферментного анализа. М: Медицина, 1994, c.205-213); способ определения мочевины основан на ее взаимодействии с диацетилмонооксимом в присутствии тиосемикарбазида и солей железа в кислой среде с образованием окрашенного соединения (там же, c.241-252). Недостатком вышеуказанных способов является необходимость забора пробы крови, что увеличивает возможность инфицирования каким-либо вирусом, и предварительная депротеинизация полученной пробы крови. Задачей изобретения является создание способа определения мочевины и креатинина в таких биологических жидкость, как пот и слеза, исключающего риск инфицирования и устраняющего болевые ощущения, возникающие при взятии крови при инвазивной диагностике. Способ определения вышеуказанных показателей в пробе пота осуществляют следующим образом. У пациента потоотделение вызывали одним из потогонных препаратов (парасимпатомиметиком) пилокарпином, ацетилхолином или каким-либо другим препаратом из этой группы веществ с одновременным введением антихолинэстеразного препарата физостигмина, прозерина, галантамина или оксазила, предотвращающих деградацию ацетилхолина, присутствующего в нервных окончаниях потовых желез, и тем самым обеспечивающих процесс потоотделения. Эти препараты вводили в кожу методом ионтофореза, применяя ток плотностью 0,25-1 мА/см2 в течение 5-15 мин. Предварительно участок кожи (предплечье или ладонь) тщательно промывали водой. Введение 0,1-1%-ного раствора пилокарпина (или 0.02% -ного раствора ацетилхолина) и одновременно прозерина в концентрации 10-5 10-8 М (или физостигмина в концентрации 10-5 10-8 М) сопровождалось появлением под анодом (или вокруг него) пота, который скапливается в течение 5-15 мин под пластмассовой чашечкой, плотно прижатой к коже и затем собирается количественно микропипеткой. Содержание мочевины и креатинина в поте, а для сравнения в крови, определяли, как описано в примере 1. Для определения креатинина в поте необходимое количество пота составляло 40-50 мкл (что вызвано невысоким содержанием креатинина в поте), а для определения мочевины в поте достаточно 10 мкл, как и для определения в крови. Обследованию подвергались мужчины и женщины (добровольцы, 15 человек) в возрасте 20-65 лет. Зависимость содержания мочевины и креатинина в поте от их уровня в крови приведена в таблице. Пример 1. У пациента X. 25 лет, натощак вызывали потоотделение в области предплечья с помощью раствора пилокарпина в концентрации 0,1-1,0% и прозерина (10-7М). Препараты вводили, используя ионтофорез. Выделяющийся пот собирали количественно и в нем определяли содержание мочевины и креатинина, как описано ниже. Одновременно проводили определение мочевины и креатинина в крови. Определение мочевины проводили унифицированным методом по цветной реакции с диацетилмонооксимом (или с помощью стандартных наборов фирмы "Лахема"). Принцип метода. Мочевина образует с диацетилмонооксимом в присутствии тиосемикарбазида и солей железа в кислой среде окрашенное соединение. Растворы: 1. Cтандартный раствор мочевины 16,65 ммоль/л 2. Диацетилмонооксим 0,5 ммоль + тиосемикарбазид 0,08 ммоль + соль железа трехвалентного 2,5 ммоль растворяют в мерной колбе емкостью 50 мл в приблизительно 30 мл дист. воды при повышенной температуре. После охлаждения доливают водой до метки. Раствор устойчив при комнатной температуре в течение нескольких недель. Наличие небольшого количества нарастворимого осадка не мешает определению. 3. Кислота серная 0,9 ммоль/л 4. Трихлоруксусная кислота 50 г/л Рабочий раствор: Смешивают одну часть раствора 2 с одной частью раствора 3, ежедневно. Ход определения мочевины в поте, слезе или крови. Длина волны 490-540 нм, кювета 1 см. В тонкостенную пробирку отмеривают 10 мкл пота, слезы или сыворотки крови, предварительно депротеинизированной, добавляют 2,0 мл рабочего раствора и содержимое перемешивают, пробирку закрывают алюминиевой фольгой и помещают на 10 мин в кипящую водяную баню. Затем содержимое пробирки быстро охлаждают и измеряют оптическую плотность пробы (А1) и параллельно обработанного стандартного раствора мочевины (А2) против контрольного раствора ( дист. вода). Измерение должно быть проведено не позднее 15 мин. Расчет: Мочевина (ммоль/л) 16,65![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/183.gif)
1.Стандартный раствор креатинина 442.5 мкмоль/л
2.Альбумин 20 г/л
3.Триххлоруксусная кислота 1,22 моль/л
4.Пикриновая кислота 0.04 моль/л
5.Натрия гидроокись 0,75 моль/л
Калибровочный раствор:
Калибровочный раствор креатинина 177 мкмоль/л приготовляют смешиванием 4,0 мл стандартного раствора креатинина с 6 мл раствора альбумины. При температуре 5o раствор устойчив минимально 1 неделю. Ход определения креатинина в поте, слезе или крови. Длина волны 500-510 нм, микрокювета. К 50 мкл пота или слезы добавляют, 200 мкл раствора N 4,200 мкл раствора N 5, перемешивают и точно через 20 мин измеряют оптическую плотность пробы (А1) и параллельно обработанного стандартного раствора креатинина (А2) против контрольного раствора (дист. вода). Стандартный раствор креатинина и сыворотку предварительно депротеинизируют. Расчет:
Креатинин (ммоль/л) 177
![](https://img.poleznayamodel.ru/chr/183.gif)
Пример 2. У пациента У. 65 лет, натощак, вызывали потоотделение с помощью ацетилхолина (0,05 М) и физостигмина (10-6М) и определение содержания мочевины и креатинина в поте и крови проводили, как описано в примере 1. Содержание в поте мочевины составляло 5,5 ммоль/л, креатинина 10,1 мкмоль/л; содержание в крови мочевины составляло 6,0 ммоль/л, креатинина 65 мкмоль/л;
Способ определения мочевины и креатинина в слезе осуществляется следующим образом. Слезоточивость вызывали нашатырным спиртом. Для этого ватный тампон, смоченный нашатырным спиртом (либо кусочек лука подносится к глазу. Через 1-2 мин выделяющуюся слезу собирали в углу глаза микропипеткой. Содержание мочевины и креатинина в слезе, а для сравнения в крови определяли, как описано в примере 1. Для определения креатинина в слезе необходимое количество ее составляло 40-50 мкл, а для определения мочевины достаточно 10 мкл. Обследованию подвергались те же пациенты, что и при исследовании пота. Зависимость содержания мочевины и креатинина в слезе от их уровня в крови приведена в таблице. Пример 3. У пациента X. 38 лет, проводили определение содержания мочевины и креатинина в слезе и крови, как описано в примере 1. Содержание в слезе мочевины составляло 5,8 ммоль/л, креатинина 65,5 мкмоль/л; содержание в крови мочевины составляло -6,0 ммоль/л, креатинина 69 мкмоль/л;
Из данных таблицы видно, что в норме при содержании мочевины в крови от 2,5 до 8,3 ммоль/л, содержание мочевины в поте находится в тех же пределах при содержании креатинина в крови в пределах от 53 до 115 мкмоль/л предел содержания креатинина составляет от 5 до 22 мкмоль/л. В слезе содержание соответствует таковому в крови мочевины и креатинина. Таким образом, предлагаемый способ определения мочевины и креатинина позволяет определять эти соединения в поте или слезе, имея при этом возможность судить об уровне мочевины и креатинина в крови, т.е. позволяет не прибегать к инвазивной диагностике.
Формула изобретения
РИСУНКИ
Рисунок 1
Похожие патенты:
Изобретение относится к биохимии и ветеринарии и касается способа определения гексоз, например галактозы, в сыворотке крови для ранней диагностики нарушений минерального обмена
Способ прогнозирования эффективности гипокситерапии у больных с бронхообструктивным синдромом // 2098823
Изобретение относится к медицине, в частности - к пульминологии, и может быть использовано при лечении больных с бронхообструктивным синдромом
Способ диагностики туберкулеза // 2098822
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической микробиологии
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии и может найти применение при лечении близорукости
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и патологической анатомии
Система анализа индикаторной полоски // 2093834
Изобретение относится к аналитической биохимии, конкретно к клинической биохимии, и может быть использовано в медицине для диагностики заболеваний различной этиологии
Изобретение относится к медицине, а именно к терапевтической стоматологии и может найти применение при диагностике и оценке эффективности лечения воспалительных заболеваний пародонта
Изобретение относится к медицине, а именно к ревматологии, и предназначено для оценки эффективности противовоспалительной терапии, назначаемой конкретному больному ревматоидным артритом
Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии
Изобретение относится к медицине и может быть использовано в кардиологии, терапии
Способ оценки состояния больного // 2103692
Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии и может быть использовано для диагностики и прогнозирования состояния больного в послеоперационном периоде и при развитии острого воспалительного процесса
Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть использовано при проведении больным с неблагоприятным прогнозом адъювантных методов терапии
Способ диагностики сахарного диабета // 2104537
Изобретение относится к медицине, в частности к эндокринологии, и может быть использовано для проведения дифференицальной диагностики инсулинзависимого и инсулиннезависимого диабета, состояния их компенсации
Способ прогнозирования цирроза печени у больных с хроническими диффузными заболеваниями печени // 2104538
Изобретение относится к медицине, а именно гепатологии, и предназначено для прогнозирования цирроза печени у больных с хроническими диффузными поражениями органа
Способ оценки микросомальной системы печени при действии ксенобиотиков алкилирующего типа // 2104539
Изобретение относится к области исследования или анализа материалов особыми способами, а именно к способам исследования крови при действии ксенобиотиков, и может быть использовано для оценки микросомальной системы печени после воздействия малых доз иприта и люизита при реальных путях поступления ОВ (отравляющих веществ) в организм, а также при решении задач по уничтожению ХО (химического оружия) в районах военно-химических объектов, в частности по обследованию здоровья населения и обслуживающего персонала в местах по хранению и уничтожению ХО
Изобретение относится к оптико-электронной промышленности и может быть использовано для комплексного исследования параметров взвеси частиц микронных и субмикронных размеров (10-8 - 10-4 м): распределения частиц по группам с определенными размерами, химического состава частиц, скоростей изменения этих характеристик
Способ лечения ишемической болезни сердца // 2107910
Изобретение относится к медицине, в частности, к кардиологии, и может быть использовано для лечения любых клинических вариантов ишемической болезни сердца
Способ определения токсичности крови рыб // 2108580
Изобретение относится к медицине, а именно к прогнозированию развития аллергических заболеваний среди детского населения