Способ размножения боверии beauveria bassiana bals (vuill)

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

2II945

Союз Советских

©Вциалистичвских

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 11.IX.!965 (№ 1028479(30-15) с присоединением заявки №вЂ”

Приоритет—

V,. 4Я, 15i00

30h, 14 ба, 14

МПК А 01п

С 12k

С 12k

УДК 632.937.14(088.8) Комитет оо делам изобретений и открытий ори Совете Мииистров

СССР

Опубликовано 19Л1.1968. Бюллетень № 8

Дата опубликования описания 24.IV.1968

Авторы изобретения

3. М. Корецкая и 3. Г. Крячко

Заявитель

СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ БОВЕРИИ

BEAUVERIA BASSIANA BALS (VUILL) Изобретение относится к способам размножения одного из возбудителей белого мускардиоза на питательных, средах с мелассой.

Известны способы выращивания боверии на стерильных средах в стерильных условиях.

Г1ри осуществлении этнх способов делают большие затраты на стерилизацию среды, оборудования и помещения.

Известен способ выращивания боверии на среде, |предварительно прокипяченной и стерилизованной антибиотиками, например стрептомицином.

По предложенному способу конидиоспоры перед посевом на среду с мелассой предварительно проращивают. Это позволяет избежать губительного влияния аспергиллов и пенициллов, попадающих на поверхность среды из воздуха. Кроме того, мелассу, как один из компонентов среды добавляют под одно-двухсуточную культуру гриба.

Благодаря этому устраняют стерилизацию среды в автоклавах и ограничиваются простым кипячением в течение 20 — 30 мин, во время которого набухшие споры грибов теряют жизнеспособность.

Пример приготовления питательной среды и .выращивания гриба.

В 700 г кукурузной муки грубого помола или 600 г тонкого помола наливают 20 л воды комнатной температуры. Через 2 час раствор выливают в 8 л кипящей воды, добавляют 10 г КН.РО, и 10 г хлористого натрия и все это кипятят в течение 30 лтин. При использовании муки тонкого помола можно кипятить

20 мин. После кипячения рН среды доводят серной кислотой до 5,0 — 5,2. Готовую среду в горячем состоянии разливают в чистые эмалированные кюветы размером (30 — 35) Q (35—

45) см, которые помещают в несколько ярусов в термостаты или этажерки.

После остывания среды производят посев на ее поверхность спор боверии. Посевной материал должен легко оседать на поверхность среды, так как даже незначительное погруже15 ние проросших спор в среду, например, под давлением струи пульверизатора, вызывает ее загрязнение другими грибами из воздуха.

Чтобы не забивался пульверизатор во время посева, инокулиум фильтруют через один слой предварительно прокипяченной марли.

Первые пять дней температуру для роста мицелия поддерживают в пределах 22 — 23 С.

Более высокие температуры, особенно в первый день, могут привести к сплошному загрязнению аспергиллами и пенициллами.

При образовании пленки гриба под нее подливают мелассы. Для этого 400 — 500 г мелассы добавляют в 2 л водопроводной воды и выливают в кюветы под пленку по 100—

30 200 см. К этому времени студенистая пита211945

Составитель М. Дранишников

Редактор Т. А. Рыбалова Текред Л. Я. Бриккер Корректоры: Е. H. Гудзовй и А. П. Татаринцева

Заказ 810/11 Тираж 530 Подписное

ЦНИИГ1И Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4

Типография, пр. Сапунова, 2 тельная среда разжижается и образовавшаяся на ней пленка гриба легко отделяется от среды, Легким приподниманием одной стороны кюветы перемешивают разбавленную мелассу. Имеющаяся в мелассе обильная бактериальная флора, которую невозможно обезвредить кипячением, в продуктах жизнедеятельности боверии не развивается и не оказывает на него отрицательного влияния. Необходимо, чтобы рН разбавленной водой мелассы соответствовал рН среды под пленкой (4,5 — 4,2).

После появления белой пленки в термостатах воздух поддерживают влажным, для зтого в них готовят кюветы с водой.

На шестой-седьмой день мицелий слегка темнеет и на его поверхности появляются капельки жидкости. Это является признаком массового созревания спор. Под пленку желательно подлить водопроводной воды, а влажность воздуха уменьшить, открыв дверцы термостата. За сутки капельки на пленках исчезнут и споры можно снимать для просушивания. Просушивание проводят в открытом помещении в кюветах. При температуре

22 — 23 С споры высыхают за два-три дня в зависимости от влажности воздуха в помещении. ll

С 1 м пленки собирают до 30 г спор, что позволяет приготовить 2,5 — 3,0 кг стандартного препарата боверина.

Предмет изобретения

Способ размножения боверии (Beauveria

bassians Bals (Vuill) на полужидкой питательной среде с мелассой, включающий посев конидиоспор, отличающийся тем, что, с целью устранения стерилизации среды, конидиоспоры предварительно проращивают, а мелассу добавляют под одно-двухсуточную культуру

20 гриба.