Патент ссср 194266
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Сок)з Советских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №
Заявлено 03.II 1966 (№ 1053275/31-16) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано ЗО.III.1967. Бюллетень ¹ 8
Кл. 3013, 6
МП1, А Glk, ДК 615.373.3-612(088.8) Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров
СССР
Дата опубликования описания 7.X 1.1967
Авторы изобретения IO. Е. Скляр, Г. И. Михайлов, К. Л. Шаханина и В. А. Ч
Заявители Всесоюзный научно-исследовательский институт химически и особо чистых химических веществ и Институт эпидеа и микробиологии им. H. Ф. Гамалея иологям «IigI ) . g
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫХ СЫВОРОТОК
Извесген способ получения люмпнссцентных сывороток путем присоединения к ним изоциопата флуоресцсина, диметиламинонафталипсульфохлорида и других флуорохромов.
Прсдложеппьш способ заключается в том, что в качестве метчика используют дихлортрпазиниламипофлуоросцеин, что позволяет заменить дефицитный краситель.
П р н м е р 1. 1,77 г цпанурхлорнда растворяют в 10 лл безводного ацетона, охла)кдают до 0 С, и при энергичном персмешпвании прпбавляюг по каплям раствор 2,91 г амино флуоресцеина 1 в 100 мл безводного ацетона.
Перемешивают при 0 С еще в течение 2 час, выпавший светло-желтый осадок отфильтровывают и промывают 10 лл безводного ацетона.
Выход 3,77 г (84,3%), Т. пл. 300 С, Пример 2, 321,3 лгг цпанурхлорида в 10 лг.г безводного ацетона охлаждают до 0 С и прп хорошем перемешивании прибавляют по каплям раствор 514,4 лг амипофлуоресцеина 3
50 лг,г безводного "öåòîíà. Перемешивают в течение 2 час при 0 С, выпавший светло-желть.й осадок хлоргидрата днхлортриазиниламинофлуоресцеина отфильтровывают и промывают безводным ацетоном.
Выход 622,3 )тг (79%). T. пл )300)С.
Пример 3. 100 лл патпьной сыворотки осахкдают серпокислым аммо;шсм при 40-50 )„-ном насыщении. Через 6 час осадок отделяют на воронке 13юхпс13а, 13аство(тя)от в дистиллированной воде так, чтобы содержание белка составляло 3 — 4"„, и ооессолпвают последовательным пропусканием раствора чс. р 3 катиоппт и аппонпт по оп)н анной мст:). дикс-.
Днхлортриазинпламппофлуорссцспи 13 ко ill. честве 15 лг на 1 г белка растирают в агатовой ступке с небольшим количеством 0,1 г11 фосфатпого буфера (рН 8,6)» iipIIu«I3ляюг к 2 — 2,0 !„ -ному раствору белка в том >кс буфере. Конъюгацию проводят прп перемсш:. ванин в течение 6 час при комнатной темпе ратуре. Свободный краситель удаля)от на ефадексе Г-25 (грубый), 0,01 .Ч фосфатный
0 оуфср р1-1 7,5. Белки с со;ержанпем флуоресцспна более 3,5 л0. ь на 1 110.1b белка, вызывающие неспецифпчсское свечение фона, от- ° деляют адсорбцией на ДЭАЭ-целлюлозе прп рН 7,5 (2 г ДЗА:- .)-целлюлозы с влажностью
65% IIà 10 лог копъюгата). K сыворотке прибавля)от мсртиолат (1; 10000) и i.IîpIIñTûé натрий до физиологической концсIITp311IIII.
Через три дня сыворотку цап рпфуп;рукл (40000 облплан) и подвергают iiio((IIльной
30 суш ке.
194266
Прсцмет из об р етсн ии
Составптсль В. Муравьева
Р дактор А. И. Пименова 1 ехред Л. Бриккер
Корректоры: М. П. Ромашова и С. М. Белугина
Заказ 1375 1 Тираж 555 Подписное
Ц11ИИПИ Когаптста по делам изобретс11ий и открытий при Совете Минисгров СССР
Москва, Центр, пр. Серова, д. 4
Типография, пр. Сапупова, 2
Способ получения люминесцентных сь1вороток путем метки иммунного антитела флуоро хромом, от.гичающийся тем, что, с целью замены дефицитного флуоресцеинтиоцианата, в качестве метчика используют дихлортриази. ниламинофлуоресцеин.
