Способ определения нарушения уровня ко-а-индуцированной супрессии лимфоцитов

 

Использование: экспериментальная медицина иммунология для способа определения нарушения уровня Кон-А-индуцированной супрессии лимфоцитов. Сущность изобретения: исследуют периферическую кровь человека на функциональную активность Кон А-индуцированной супрессии в аутосистеме с исследованием показателя - холодовой супрессии. Установлен норматив последнего-10.9±2,7%. Способ позволяет повысить точность и комплексность оценки иммунологического статуса человека , упрощает, ускоряет и расширяет возможности его применения, и кроме того, отпадает необходимость в использовании донорской крови.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (яи G 01 N 33!53

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАГЕНТНОЕ, ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР)

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

1 100 ;

А (21) 4915499/14 (22) 01.03.91 (46) 23.08.93. Бюл. N. 31 (71) Туркменский научно-исследовательский институт профилактической и клинической медицины (72) С.Р.Попова (73) Туркменский научно-исследовательский институт профилактической и клинической медицины (56) J. of Exp. Med. 1976, 143, р. 1100-1106. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕНИЯ УРОВНЯ КОН А-ИНДУЦИРОВАННОЙ

СУПРЕССИИ (57) Использование: экспериментальная меИзобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии и может быть использовано для определения "супрессорного" статуса здоровых и больных людей.

Целью данного изобретения является повышение точности и комплексности оценки иммунологических показателей с Ао мощью проведения способа определения функциональной активности субпопуляций клеток-супрессоров в аутосистеме, где контролем служат клетки тех же больных или доноров, вследствие чего исключается необходимость в использовании донорской крови. С помощью такой модификации и предложенной формулы расчета была впервые обнаружена возможность определения новой, не изученной функциональной активности клеток-супрессоров, условно мазвэнных "холодовыми". Этот термин предложен

„,5U,, 1836639 АЗ дицина иммунология для способа определения нарушения уровня Кон-А-индуцировэнной супрессии лимфоцитов. Сущность изобретения: исследуют периферическую кровь человека на функциональную активность Кон А-индуцированной супрессии в эутосистеме с исследованием показателя—

"холодовой" супрессии. Установлен норматив последнего — 10,9» 2,7 Д. Способ позволяет повысить точность и комплексность оценки иммунологичвского статуса человека, упрощает, ускоряет и расширяет возможности его применения, и кроме того, отпадает необходимость в использовании донорской крови. автором впервые и в литературе эта субпопуляция не описана.

Поставленная цель достигается тем, что в способе определения функциональной активности КонА-индуцированной супрессии, который включает взятие крови исследуемого больного и донора, выделение мононуклеарных клеток по методу Boyum c последующим определением Кон А-индуцированной и спонтамной супрессии, в качестве отвечающих клеток используются лимфоциты того же индивида, инкубирующиеся при т2-4 С с последующим определением процента супрессии: супрессии лимфоцитов (после охлаждения) (С)Я +Эх+©IA R +Sõ й+ФГ где R — отвечающие клетки исследуемого;

1836639

$х — облученные клетки, инкубировавшиеся в холодильнике;

Ф ГА — митоген фитогемагглютинин, причем, среднестатистическая норма процента супрессии после охлаждения составляет для здоровых лиц — 10,9+ 2,7ф», Определение функциональной активности Кон А-ийдуцированной, спонтанной и супрессии после охлаждения определяется следующим образом: 10

Первые этапы реакции аналогичны описанной выше. Отличие от стандартной методики состоит s том, что в качестве отвечающих клеток предлагается использовать лимфоциты того же индивида, которые 15 ресуспендируют в рабочей среде в концентрации Gx10 кл/мл и инкубируют в центрифужной пробирке 72 часа при t 2-4 С. После

72-х часовой инкубации клетки S+ отмывают дважды средой 199 от Кон А, а клетки $- и R 20 отмывают один раз и освобождаются от надосадочной жидкости. Клетки S+, R- и 1/4 часть респондеров (В) обрабатывают митомицином С в течение 30 мин при t 37 С или реже облучают. Затем снова отмывают 25 трижды и ресуспендиоуют в рабочей среде в концентрации 5х10 кл/мл. Облучвнную часть клеток-респондеров обозначают Зх (холодовые супрессоры). Необлученные клетки-респондеры ресуспендируют в раба- 30 чей среде в концентрации 5х10 кл/мл.

Клетки раскапывают на стандартные 96-ти луночные микроплата по 0,1 мл в соотношении 1;1 и культивируют 72 часа при t 37 С в атмосфере 5 СОз и 100® влажности в сле- 35 дующих комбинациях .

1, й; 2. R + Ф ГА: 3. R + Sõ, 4. В+ $х+ ФГА;

5, R + S- 6. 8 + S- + ФГА; 7, и + $+; 8. R + $4+ ФГА, Все комбинации выполняются вы триплетах. Последующие этапы аналогичны опи- 40 санной выше реакции. Формулы расчета: ф Кон А-индуцированной супрессии100 Д

7 спонтанной супрессии = . цро супрессии лимфоцитов (после охлаждения) (С), 1Ц()о( где R — отвечающие клетки исследуемого;

S+ — клетки исследуемого, культивируемые в присутствии Кон А;

$- — клетки исследуемого, культивируемые в отсутствии Кон А;

$х — облученные клетки, инкубировавшиеся в холодильнике.

Данным способом обследовано 53 донора и с помощью статистической обработки по методу Стьюдента установлен нормальный показатель супрессии лимфоцитов после охлаждения у здоровых лиц—

10,9+ 2,7 .

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Il р и м е р 1, При обследования здоровых донора Петровой А.Ф., (группа крови (О)

1 Rh +) 38 лет, с помощью предложенного способа была выявлена функциональная активность Кон А-индуцированной супрессии — 20,1 и спонтанной супрессии — 16,2, что не выходит зз рамки нормальных показателей — 22,3+ 2,6 и 18,1+ 1,3 соответственно. Супрессорная активность лимфоцитов после охлаждения так же оказалась нормальной-12,4, Эти показатели указывают нз благополучие в супрессорном звене иммунитета и у данного донора, Il р и м е р 2. При обследовании больного Юрченко К.Ф., 56 лет, страдающего И!б стадией заболевания раком желудка функциональная активность Кон А-индуцированной супрессии оказалась повышена до

34,5, спонтанная супрессорная активность составила 17,2, а супрессорная активность лимфоцитов после охлаждения оказалась равной 42,4), что превышает нормальный показатель s 4 раза, Таким образом, у больного Юрченко К.Ф. наблюдается выраженный дисбаланс в супрессорном звене; активность Кон А-индуцированной и супрессии лимфоцитов после охлаждения резко повышена при нормальном показателе спонтанной супрессии.

Пример 3. Больная Григорян А.B., 48 лет, страдающая поллинозом, была обследована на Кон А-индуцированную супрессорную активность, которзя составила

20,1, спонтанная супрессия — 15,2, что не превышает нормальные показатели, а активность супрессии после охлаждения оказалась подавленной в 2 раза — 5,4, что говорит о явном патологическом сдвиге в супрессорном звене иммунитета у данной больной.

Формула изобретения

Способ определения нарушения уровня

Кон А-индуцированной супрессии лимфоцитов, включающий отбор крови пациента, выделение мононуклеарных клеток, инкубацию их в присутствии H-тимидина, регистрацию спонтанной и Кон А-индуцированной супрессии лимфоцитов с последую1836639

), 1 0о(Составитель А.Агуреев

Редактор Т.Куркова Техред М. Моргентал Корректор M.Êóëü

Заказ 301В Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-ЗБ, Раушская наб;, 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 щим сравнением результата с нормой, о тл и ч а-ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, дополнительно регистрируют спонтанную супрессию лимфоцитЪв пациента после их инкубации при 2-4 С в течение 72 ч, в качестве отвечающих клеток используют лимфоциты того же пациента, рассчитывают процент супрессии лимфоцитов (С) в пробе, подвергавшейся инкубации при 2-4 Ñ, после охлаждения по формуле где R — отвечающие клетки исследуемо5 го;

Sx — облученные клетки, инкубировэвшиеся в холодильнике;

ФГА — фитогемагглютинин, и при значении 8,2ф, > С > 13,6® определя10 ют нарушение.