Способ определения нарушения иммунологического состояния при ожогах глаз

 

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для определения нарушений иммунологического состояния при ожогах глаз. Целью изобретения является повышение чувствительности упрощения способа. Способ заключается в том, что в опытной пробе определяют влияние биологической среды, в качестве которой используют слезу больного, на функциональную активность лимфоцитов здоровых доноров. Одновременно в контрольной пробе определяют влияние биологической среды, в качестве которой используют слезу здорового человека , на функциональную активность лимфоцитов здороЬого донора. О наличии нарушения иммунологического состояния судят по индексу .подавления (стимуляции), величина которого может выходить за пределы ±25% относительно нулевого уровня, что зависит от включения 3Н-тимидина в пробах со слезой больных с ожогами глаз и здоровых лиц.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)э G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4892368/14 (22) 20.12,90 (46) 23.08.93. Бюл. М 31 (71) Кемеровский государственный медицинский институт (72) E.Ñ.Áåëîáîðîäîàà, А.А.Коростелев, И.В.Южалина и Н.lO.Õàòìèíñêèé (56) Ваничкин А.А., Легеза Г,В., Дмитриев

С.К. — Офтальмол. журн, 1987, М 3, с. 148152., (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕНИЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ ПРИ ОЖОГАХ ГЛАЗ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для определения нарушения иммунологического .состояния при ожогах глаз. Целью изобретения является повышение чувствительности упрощения способа.

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для определения нарушения иммунологического состояния при ожогах глаз.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа и исключеwe необходимости забора крови у больного за счет исследования среды непосредственно из зоны ожога, Поставленная цель достигается тем, что в способе, включающем определение функциональной активности лимфоцитов по реак ции бластной трансформации лимфоцитов в биологической среде с ФГА с включением

Н-тимидина в бласттрансформированные клетки, одновременно проводят опытную и контрольную прЬбы, причем в обеих пробах Ы, 1835516 А1

Способ заключается в том, что в опытной пр6бе ойределяют влияние биологической среды, в качестве которой используют слезу больного, на функциональную активность лимфоцитов здоровых доноров. Одновременно в контрольной пробе определяют влияние биологической среды, в качестве которЬй используют слезу здорового человека, на функциональную активность лимфоцитов здорового донора. О наличии нарушения иммунологического состояния судят по индексу Подавления (стимуляции), величина которого может выходить эа пределы + 25 относительно нулевого уровня, что зависит от включения Н-тимидина в пробах со слезой больных с ожогами глаз и здоровых лиц..используют лимфоциты здорового донора,.а в качестве биологической среды используют соответственно слезу больных с ожогами глаз и здоровых лиц.

Способ осуществляется следующим образом.

Формируют две пробы — опытную и контрольную. Обе пробы содержат одинаковую культура41ную среду, которую готовят сле. дующим образом: иэ гепавинизированной крови донора в градиенте плотности фиколлверографина (плотностью 1077) получают чистую суспензию лимфоцитов, которую трижды отмывают в растворе Хенкса по 5 мин при 75 д, доводят до концентрации

2х10 клеток в 1 мл. Готовят взвесь иэ 150 мкл лимфоцитов в среде 199 с 25 мкл 10;(, сывороткой крови телят и ФГА (рабочая кон1835516 центрация 20 мкг/мл) и помещают в планшет для иммунологических реакций, В опытную пробу (в опытную лунку планшета) к культуральной среде добавляют 30 мкл слезы больного, в контрольную пробу (в контрольную лунку) — слезу здорового человека.

Пробы культивируют 48 ч при Т =37 С в атмосфере с 5 содержанием углекислого газа, Через 48 ч в каждую лунку (опытную и контрольную) добавляют Н-тимидин по 25 з мкл (доза 1 мкКИ), оставляют на 24 ч при тех же условиях. Затем пробы пропускают через миллипоровый фильтр "Владипор" и фиксируют по общепринятой методике (5

ТХУ, спирт, эфир). Пробы просчитывают на стинцилляционном счетчике Бета-2. Все пробы ставятся в дублированном варианте.

Рассчитывают индекс подавления (стимуляции) по формуле:

ИП(С) = (1 — — ) х 100%, В где ИП(С) — индекс подавления (стимуляции);

А- включение Н-тимидина в пробах со з слезой обожженных;

 — включение Н-тимидина в пробах со з слезой здоровых людей.

Пример 1. Больной С. Диагноз— легкий химический ожог роговицы и коньюнктивы правого глаза. В 1, 3, 7 сутки после ожога взята слеза на иммунологическое исследование. Величина ИП(С) составила: в 1 сутки — -)303%, на 3 сутки — (-)183%, на 7 сутки — (-)29 7;.

Таким образом, у больного наблюдалась стимулирующая активность слезы, что характеризовалось отрицательными значениями индекса, величина которого значительно отклонялась от нормы (больше

-)25 g ) (фиг,1).

При обследовании группы больных с легкими ожогами глаз ИП(С) в 1 сутки после ожога составил (-)348,7 +58,67, на 3 сутки — (-)188,7 + 33,47;, на 7 сутки — -)34,0 +.

= - 14,1 ;

П р и м,е р 2. Больная М. Диагноз— химический ожог роговицы и коньюнктивы средней тяжести правого глаза. В 1, 3, 7, 14 сутки после ожога взята слеза для иммунологического исследования. Величина ИП(С) составила: в 1 сутки — (+)187, на 3 сутки— (+)877ь, на 7 сутки — -)50, на 14 сутки— (+)29 (.

Таким образом, на 3 сутки после ожога наблюдался максимальный подъем подавляющейся активности слезы, характеризующейся положительными значениями

Формула изобретения

Способ определения нарушения иммунологического состояния при ожогах глаз, включающий определение функциональной активности лимфоцитов по реакции бласттрансформации лимфоцитов в биологической среде, содержащей фитогемагглютинин (ФГА) с включением Н-тимидина з в бласттрансформированные клетки; о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения чувствительности и упрощения способа, используют лимфоциты здорового донора, причем в отдельные пробы добавляют слезу больных и здоровых лиц, далее высчитывают индекс подавления или стимуляции по формуле

ИП(С) = (1 — — ) х 100%, А

В индекса, величина которого значительно от клонялась от нормы (больше (+)25 ), К 7 суткам после ожога она сменялась стимулирующей активностью, величина которой также отклонялась от нормы (больше -)25 ), с последующим ее приближением к 14 суткам после ожога к уровню иммуномодулирующей активности слезы здоровых лиц (фиг.2).

При обследовании группы больных с

"0 ожогами глаз средней тяжести ИП(С) в 1 сутки после ожога составил (+)15,3 "= 2,2ф„ на 3 сутки — (+)65,0 8,4=,ь, на 7 сутки— (-)42,8 + 4,5, íà 14 сутки — (+) 25,2 + 4,2 (,.

Пример 3. Болвной Г. Диагноз—

15 тяжелый Мимический ожог роговицы и кОньюнктивы правого глаза. На 3, 7, 14, 28 сутки после ожога взята слеза для иммунологического исследования. Величина ИП(С) составила: на 3 сутки — (+)18, на 7 сутки — (+)61, на 14 сутки — (+)41 о, на 28 сутки — (+)29 .

Таким образом, наблюдалась подавляющая активность слезы во все сроки наблюдения с максимальным ее подъемом и значительным отклонением от нормы (больше (+)25%) на 7 сутки после ожога (фиг.3).

По сравнению с прототипом заявленный способ определения нарушения иммунологического состояния при ожогах глаз обладает следующими преимуществами: повышается чувствительность, так как он может быть использован для определения нарушения иммунологического состояния при легких, средней тяжести, тяжелых и особо тяжелых ожогах, в то время как по иэве35 стному способу лишь при тяжелых.и особо тяжелых ожогах глаз; исключается необходимость забора крови из вены больного, что устраняет возможность ВИЧ-инфицирования.

1835516

Составитель Е.Белобородова

Техред М.Моргентал Корректор О.Кравцова

Редактор

Заказ 2981 Тираж . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., 4/5

Проиэводстеенно-издательский комбинат "Патент",.г, Ужгород, ул.Гагарина, 101

Э где ИП(С) — индекс подавления или стимуляции;

А — включение Н-тимидина в пробах со з слезай больных;

 — включение Н-тимидина в пробах со з слезой здоровых лиц, 5 и при величине индекса, выходящей за пределы + 25 относительно нулевого уровня, определяют наличие нарушения иммунологического состояния при ожогах глаз.