Способ диагностики атопической бронхиальной астмы

 

Изобретение относится к медицине, а именно к области клинической иммунологии и аллергологии. Целью способа является повышение точности этиологической диагностики атоп ической бронхиальной астмы. Поставленная цель достигается благодаря тому, что предложено определение содержания аллергенспецифических ИгЕ-антител к домашней пыли в составе циркулирующих иммунных комплексов сыворотки крови и при выявлении высокого уровня (от 400 ед. и более) аллергенспецифических ИгЕ-антител к домашней пыли диагностируют бронхиальную астму, вызванную аллергией к домашней пыли. 2 табл.

COIO3 СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4902394/14 (22) 14.01.91 (46) 07.08.93. Бюл. М 29 (71) Белорусский государственный институт усовершенствования врачей (72) В.А.Русакович и Т.Н.Суховатых (56) Buhrons BenJamin et al, NEngl. J. Med

1989, 320, М 5, р.271 — 277. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АТОПИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к области клинической иммунологии

Изобретение относится к медицине, а именно к области клинической иммунологии и аллергологии.

Целью способа является повышение точности этиологической диагностики бронхиальной астмы.

Выбор специфических ИгЕ-антител в составе иммунных комплексов обусловлен тем, что ИгЕ-антитела являются маркером аллергического процесса.

Предлагаемый способ позволяет.диагностировать посредством определения аллергенспецифических ИгЕ-антител причинный аллерген, вызывающий бронхиальную астму. Это важно для своевременного назначения патогенетической терапии, Предлагаемый способ позволяет провести этиологическую диагностику атопической бронхиальной астмы в 9 и более раз точнее.

Для осуществления предлагаемого способа из сыворотки крови выделяют циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК) методом селективной преципитации с полиэтиленгликолем (M.â. 6000) в конечной кон„„Sly „„1832199 А1 и аллергологии. Целью способа является повышение точности этиологической диагностики атопмческой бронхиальной астмы.

Поставленная цель достигается благодаря тому, что предложено определение содержания аллергенспецифических ИгЕ-антител к домашней пыли в составе циркулирующих иммунных комплексов сыворотки крови и при выявлении высокого уровня (от 400 ед. и более) аллергенспецифических ИгЕ-антител к домашней пыли диагностируют бронхиальную астму, вызванную аллергией к домашней пыли. 2 табл. центрации 3.75, Полученный преципитат

ЦИК осаждают центрифугированием при

5000 об/мин, дважды отмывают полиэтиленгликолем этой же концентрации. Затем отмытый осадок подвергают диссоциации

0,05М глицин -HCl буфером, рН 2,6, в термостате при 37 С в течение 1 часа.;После диссоциации иммунных комплексов специфические ИгЕ-антитела определяют в пробе на тест-системе иммуноферментной для определения аллергенспецифических

ИгЕ-антител человека, изготовленной Ставропольским HllO "Аллерген".

Способ осуществляют следующим образом.

К 0,2 мл сыворотки крови добавляют 0,4 мл боратного буфера, рН рН 8,6, 0,1 М, перемешивают и добавляют 5,4 мл раствора полиэтиленгликоля (М.в. 6000) в конечной концентрации 3,75, приготовленного на боратном буфере. Перемешивают и оставляют при комнатной температуре для образования преципитата на 1 час. Затем переливают в пластмассовые пробирки для центрифуги ОПН-8 и центрифугируют при

1832199

5000 об/мин 20 мин, однако с учетом времени на разгон и остановку ротора время центрифугирования увеличивается до 35 мин.

Супернатант сливают и добавляют в пробирки холодный раствор полиэтиленгликоля этой же концентрации, перемешивают и снова центрифугируют. Операцию отмывки повторяют еще раз, Слив супернатант, к осадку добавляют 0,2 мл 0,05М глицин-НО буфера, рН 2,6 для диссоциации иммунных комплексов.

Перемешивают и оставляют в термостате при 37 С на 1 ч. В приготовленной таким образом пробе определяют содержание специфических ИгЕ-антител домашней пы ли на тест-системе иммуноферментной для определения аллергенспецифических ИгЕантител человека, изготовленной Ставропольским НПО "Аллерген". Инструкция по работе прилагается к каждому набору тестсистемы.

Учет результатов проводят инструментально, на спектрофотометре типа "Мультискан" при длине волны 492 нм. Оценка содержания специфических ИгЕ-антител производится на основе определения оптической плотности (ОП) продукта ферментатив ной реакции, характеризующей содержание аллергенспецифических ИгЕантител. Для этого рассчитывают среднюю арифметическую ОП дублей всех растворов (А,В,С,Д) стандарта: ИгЕ-антител и образцов тестируемых сывороток. ОП образцов сравнивают с ОП растворов (А,B,С.Д) стандарта ИгЕ-антител (см.таблицу 1).

Для удобства расчетов единицы оптической плотности умножены на 1000 (см.табл.2).

Оценка содержания специфических

ИгЕ-антител может быть произведена по степени реакции (в плюсах от 0,1,2,3,4), что соответствует отрицательному, низкому, умеренному, высокому и очень высокому уровню ИгЕ-антител. Однако такой подход не позволяет провести тщательную и точную оценку результатов. Поэтому мы считали необходимым рассмотреть цифровые данные ОП, полученные на спектрофотометре "Мультискан", которые количественно и, соответственно, более реально отражали бы истинное соотношение специфических ИгЕ-антител в сыворотке крови и составе ЦИК у детей с бронхиальной астмой. Благодаря количественному анализу

ОП образцов, нами установлено, что содержание специфических ИгЕ-антител домашней пыли, независимо от периода болезни у детей с бронхиальной астмы, было достоверно выше в составе ЦИК, чем в сыворотке крови (см. таблицу 2). Так, содержание ИгЕ-антител к домашней пыли в составе ЦИК было в среднем 9,346 раза выше, чем в сыворотке крови в приступном периоде и св 30, 14 раза в межприступном периоде болезни, Значительно выше было содержание ИгЕ-антител к домашней пыли в приступном периоде по сравнению с межприступным периодом (Р,001). Т.о„нами установлено, что максимальное количество специфических ИгЕ-антител домашней пыли содержится не в сыворотке крови, а в составе ЦИК. Следовательно, для этиологической диагностики бронхиальной астмы практическое значение имеет определение аллергенспецифических MrЕ-антител не столько в сыворотке крови, сколько в соста- . ве ЦИК. При этом определение специфических ИгЕ-антител в составе ЦИК более информативно и коррелирует с остротой аллергического процесса, выраженностью клинической симптоматики заболевания.

Пример 1. Ребенок Катя Г„2 г 11 мес. находилась в стационаре с клиническим диагнозом: бронхиальная астма, атопическая форма, тяжелое течение, астматический статус. Приступы бронхиальной астмы частые, причинный аллерген не выявлен. Для установления этиологического диагноза бронхиальной астмы поставлены скарификационные кожные пробы на аллерген домашней пыли, результаты которых были отрицательными. При иммунологическом обследовании уровень свободно циркулирующих специфических ИгЕ-антител к домашней пыли в сыворотке крови равен 105 ед, (++), т.е. умеренный, а содержание специфических ИгЕ-антител к домашней пыли по предлагаемому способу в составе ЦИК сыворотки крови — 1012 ед (++++), т.е. очень высокий. Последнее убедительно свидетельствует о наличии аллергии к домашней пыли у ребенка с бронхиальной астмой, т.е. установлен конкретный этиологический диагноз, Пример 2. Ребенок Костя Б., 9 лет, находился в стационаре с клиническим диагнозом: бронхиальная астма, атопическая, тяжелое течение, приступный период. Страдает бронхиальной астмой в течение 7 лет, приступы почти ежедневные, причинный ал= лерген не выявлен. Для установления этиологического диагноза бронхиальной астмы в светлом промежутке поставлены скарификационные кожные пробы на аллерген домашней пыли. Результаты последних были отрицательными. При иммунологическом обследовании уровень свободно циркулирующих специфических ИгЕ-антител к домашней пыли в сыворотке крови равен 92 ед. (+) т.,е низкий. Содержание специфических

1832199

10

20

30

50

ИгЕ-антител к домашней пыли по предлагаемому способу в составе ЦИК сыворотки крови — 975 ед. (+++), т,е. очень высокий, что свидетельствует о наличии аллергии к домашней пыли и позволяет установить конкретный этиологический диагноз, Пример 3. Ребенок Алексей Ч., 7 лет, находился в стационаре с клиническим диагнозом: бронхиальная астма, атопическая, средней тяжести, межприступный период.

Страдает бронхиальной астмой в течение 3 лет, приступы частые, хотя в последний год стали реже, последний приступ эа неделю до обследования, Для установления этиологического диагноза бронхиальной астмы поставлены скарификационные кожные пробы, выраженность которых была слабой (+) и поэтому не подлежал к проведению патогенетического лечения — специфической иммунотерапии виновным аллергеном.

При иммунологическом обследовании уровень свободно циркулирующих ИгЕ-антител к домашней пыли в сыворотке крови равен

0 ед. (-), т.е. отрицательный, а содержание специфических ИгЕ-ангител к домашней пыли по предлагаемому способу в составе

ЦИК вЂ” 489 ед. (+++), т.е, высокий. Это свидетельствует о наличии аллергии к домашней пыли, т,е. установлен конкретный этиологический диагноз.

Пример 4. Ребенок Андрей Д.,8 лет, находился в стационаре с клиническим диагнозом: бронхиальная астма, атопическая, средней тяжести, постприступный период.

Страдает бронхиальнойастмой в течение 2 лет. Для установления этиологического диагноза бронхиальной астмы поставлены скарификационные кожные пробы на аллерген домашней пыли, результаты которых оказались отрицательными. При иммунологическом обследовании уровень свободно циркулирующих ИгЕ-антител к домашней пыли в сыворотке крови равен 63 ед. (+), т.е низкий, а содержание специфических ИгЕантител к домашней пыли по предлагаемому способу в составе ЦИК сыворотки крови

-596 ед,(+++), т.е, высокий. Это свидетельствует о сенсибилиэации организма аллергеном домашней пыли, т.е, установлен конкретный этиологический диагноз.

Таким образом, использование предлагаемого способа аллергенспецифической диагностики атопической бронхиальной астмы имеет по сравнению прототипом следующие преимущества: 1) Предлагаемый способ по точности обнаружения специфических ИгЕ-антител в организме в 9 и более раз превышает ранее известный, поскольку аллергенспецифические ИгЕ-антитела в составе циркулирующих иммунных комплексов выявляются даже тогда, когда в сыворотке крови свободно циркулирующие

ИгЕ-антитела не обнаруживаются или присутствуют в очень низких количествах; 2) позволяет проводить этиологическую диагностику атопической бронхиальной астмы в любом периоде болезни, в том числе и в период приступа; 3) может быть использован с высокой степенью надежности и в межприступном периоде болезни при отрицательной реакции кожных проб, а также при поврежденной коже или наличии в анамнезе анафилактических реакций; 4) использование способа основана на выделении из сыворотки крови циркулирующих иммунных комплексов, их последующей диссоциации на антиген и антитело. Для определения ИгЕ-антител используют иммуноферментные тест-системы; 5) способ несложен в техническом исполнении и может быть применен в любой иммунологический лаборатории при наличии спектрофотометра "Мультискан" и центрифуги ОПН-8.

Таким образом, предлагаемый способ выявления аллергенспецифических ИгЕ-антител высокодостоверен и может быть использован в лечебных учреждениях в качестве теста для выявления причинного аллергена.

Формула изобретения

Способ диагностики атопической бронхиальной астмы путем определения содержания специфических Ig E-антител к домашней пыли в организме, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повышения точности способа, специфические lgE-антитела к домашней пыли определяют в составе циркулирующих иммунных комплексов сыворотки крови и при выявлении их уровня от 400 ед. и более диагностируют бронхиальную астму, вызванную аллергией к домашней пыли.

1832199

Таблица1

Таблица 2

Показатели

Периоды исследуемые приступный статистические мешприступный (2) сыворотка (3) преципитат Цик (4) сыворотка (1) преципитат ЦИК

10

26

1,3 <0,02

xySx

115,6 -14, 58 935 ) 6 "5 0,45

547,46т47,23

70,62+9,68 х +Бх

9,346 1,485

30,11+24,88

П ° И ° > 0,05

П р и м е и а н и е. ед. О.П. умножены на 1000; П - приступный, И вЂ” меяприступный

Редактор С;Кулакова

Заказ 2б08 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Ь|осква, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

ИгЕ домашней пыли (О.П.) Игг. ЦИК

IIcE сыв.

Составитель Б.Русакович

Техред M.Mîðãåíòàë Корректор О.Густи

2,4 0,001

1,3 <О 001

3,4< 0,001