Способ получения оксидазы l-аминокислот

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к получению ферментных препаратов. Сущность изобретения: осуществляют культивирование дрожжей рода Candida на питательной среде, содержащей источник углерода, минеральные соли. DL-аминокислот и стимулятор роста. В качестве стимулятора роста используют осадок дрожжевого автолизата, полученный после центрифугирования в течение 15 мин при 6000 об/мин. Соотношение количества общего азота DL- изомера аминокислоты и дрожжевого автолизата составляет (5,65-6.50): 1. 4 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ социАлистических

РЕСПУБЛИК (5t)5 С 12 N 9/02

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К ПАТЕНТУ

Ы (21) 4918984/13 (22) 14.03.91 (46) 23,03,93. Бюл. N. 11 (71) Ереванский государственный университет (72) Е.Г.Багдасарян. Г.Е.Багдасарян, M.Á.Àòàíåñÿí и М.А.Давтян (73) E.Ã. Багдасарян (56) Duerry l.À., Chacrobarty S.l. Bacteriology

121, 656:-663, 1975.

Авторское свидетельство СССР

¹ l182818, кл. С 12 N 9/02, 1985. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОКСИДАЗЫ L—АМИНОКИСЛОТ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к получению ферментных препаратов, Цель изобретения — повышение выхода и повышение активности оксидазы L-аминокислот, сокращение времени культивирования дрожжей рода Candida.

Указанная цель достигается тем, что в способе, предусматривающем выращивание дрожжей рода Candida на жидкой пита гельной среде, содержащей источник углерода, минеральные соли, DL-изомер аминокислот и стимулятор роста, В качестве стимулятора роста используют осадокдрожжевого автолизата после центрифугирования в течение 15 мин при 6000 об/мин, при этом соотношение количества общего азота OL-изомера аминокислоты и осадка дрожжевого автолизата составляет (5,656,5):1.

Составленный анализ заявляемого решения с прототипом показывает. что заявляемый способ отличается от известного

„., Я3„„1804478 АЗ (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к получению ферментных препаратов. Сущность изобретения: осуществляют культивирование дрожжей рода Candida на питательной среде. содержащей источник углерода, минеральные соли, DL — аминокислот и стимулятор роста. В качестве стимулятора роста используют осадок дрожжевого автолизата, полученный после центрифугирования в течение 15 мин при 6000 об/мин, Соотношение количества общего азота DLиэомера аминокислоты и дрожжевого автолизата составляет (5,65 — 6.50):1. 4 табл, тем, что в качестве стимулятора роста используют не дрожжевой автолизат, а осадок дрожжевого автолизата, который обраэовывается после центрифугирования дрожжевого автолизата, при 6000 об/мин в течение

15 мин и DL-изомер аминокислот; при этом соотношение общего азота DL-изомера аминокислоты и осадка дрожжевого автолизата составляет (5,65-6,5):1.

Пример 1. Дрожжи Candida tropicalis

ДН вЂ” 3 выращивали на питательной среде, содержащей: глюкозу 10 г/л: DL-аланин

3.63: осадок дрожжевого автолизата 20 мл/л;

КНрР04 1,232 г/л; MgSOq 7Н20 0,62 г/л, СаСЬ2Н20 0,12 г/л; NaCI 0.12 r/ë. рН среды

5,5.

Соотношение общего азота DL-аланина и осадка дрожжевого автолизата составляло

6,5:1, а амин ного азота осадка 38:1,- Дрожжи рода Candida выращивали при аэрации на круговой качалке при 220 об/мин. Температура выращивания 30 С. Через 12 ч культиI (3044 /О

Таблица 1

Удельнэл эктивность ферменте

Соотношение ээотэ осадка эвтолиээтэ и азота соединений в срее

Биомасса

Выход ферментеэ

Количество асэдкэ дрожжевого эвтолиээтэ в питэтельной среде

Количества источника лэотэ. г/л

Источник азота

Дрожжи

Эконо- мк/моль мич. ка- нэ мг эффиц, белка г/л

Активность нэ

100 мг сухих ожжей общего эминного в виде эминного ээотэ. г/л в виде общего азота. г/л в виде рэстворэ млlл в виде азота в виде соединений

Caodfda

tropfcaIis

ДН-3

1 6,50

I:5.65

1:6.50

1:5. 65

1:6.50

1:5.65

1.9

3. 65

3.72

0.28

3.11

3.40

0.19

2.75

2.90

19 36,5

37.2 г.б

31.1

34.0

1.9

27,5

29.0

О

О

О о

38.5

32.8 о

18,60

16.3

О

О

О

48.3

29,9

О

18.90

17.40

3.10 0.660

2.69 0.571

2.63 0.558

4.20 0.660

71 (МНл д504 (NHqEtSOe (NНхьSО4

Д1 -Алэ

Д1. Алэ

ДС-Алэ

Д(.- Вэл

Д(.-Вэл

L-Вэл

1:38

1:ЗЗ

1:38

1:ЗЗ

1:38

1:ЗЗ

0.015

0.017

0.015

0.017

0.015

0.17

0.086

0.099 .

0.86

0.099

0,086

0.099 го

23

3.63 0.5

355 I 0558 23

5.50 0.660

4.77 0.571 20

466 0558 23

Таблице 2

Количество осадка дрожжевого эвтолиээтэ в питэтельной среде

Соотношение ээотв осадка эвтолиээтэ и азота соединений в среБиомасса

Удельнэл эктивность ферменте

Исто ник азата

Количество источника ээотэ. г/л

Дрожжи

Выход ферменте гlл мк/моль нэ мг белка к общем1г

Активность нд

100 мг сухих ожжеи к эминному в виде рэстворэ. мл/л в виде соединений в виде азота в виде общего азота. г/л в виде эминна

ro ээотэ. г/л экономич, коэффиц.

1 6.50

1:5.65

1:6.50

1:5.65

1:6.50

1;5.65 (NHtEtSOe ( (NH01504 (14Н4)2504 Д1 -Алэ

Д1 — Алэ

/Ef -Алэ

Д(-Вэл

Д1.-Вэл

L — Вэл

0.657

0.571

0.558

0.657

0.57 E

0.558

0.657

0,571

0.558

1.9

3. 65

3.72

0.39

3,50

3.75 о.г1

2.90

310

1.9

36,5 зу.г

35.0

37.5

2.10

29.0

З1.О

Candida f

t r o fE f c a f f s

Кэ-10

3.10

2.69

263

4.20

3.62

3.55

5.50

4,77

4.66 о о

О О о о

О 1 О

0.015

0.017

0.015

0.017

0.015

0,17

0.086

0.099

0.86

0.099

0.086

0.099

1:38

1:ÇÇ

1:38

1:ЗЗ

1:38

1:ЗЗ

23

23 го

1

22.5 36.00

21,7 27.15 следы

16.5 29 60

16 О 22!9 вирования дрожжей удельная активность фермента составила 38,5 мкмоль/мг белка.

Пример 2, Способ осуществляли как в примере 1, но использовали DL-аланин в количестве 3,55 г/и. Количество осадка дрожжевого автолизата 23 мл/и. Соотношение общего азота осадка автолизата 5,65:1, аминного 33:1. Удельная активность фермента — 32,8 мкмоль/мг белка.

Пример 3. Способ осуществляли как в примере 2, но в качестве источника азота (индуктор оксидазы L-аминокислот) в среде использовали DL-Валин 4,77 г/л. Удельная активность фермента 18,9 мкмоль/мг белка.

Пример 4, Способ осуществляли как в примере 1, но в качестве продуцента использовали дрожжи Candida tropicalls K>-10.

Удельная активность фермента 22,5 мкмоль/мг белка, Предлагаемый способ обеспечивает хороший рост дрожжей рода Candlda. Сокращает время культивирования и позволяет синтезировать оксидазу L-аминокислот, В табл, 1 представлены результаты биосинтеза оксидазы L-аминокислот дрожжами рода Candida (С. сгор(са1(з ДН вЂ” 3) с О(-изомерами аминокислот в питательной среде (после 12 ч роста); в табл, 2 — результаты биосинтеза оксидазы L-аминокислот дрожжами рода Candida (С. tropicaiis Кз-10) на питательной среде с DL-изомерами аминокислот после 12 ч роста): в табл, 3 — результаты биосинтеза оксидазы L-aìèíîêèñ/Eîò дрожжами рода Candlda (C. guilliermondii

BKM У вЂ” 42) с DL-изомерами аминокислот в питательной среде (после 12 ч роста); в табл.

4 — результаты биосинтеза оксидазы (-аминокислот дрожжами рода Candlda (С.

cheE/alieri 66) с DL-изомерами аминокислот в питательной среде (после 12 ч роста).

Формула изобретения

Способ получения оксидазы L-аминокислот, предусматривающий выращивание дрожжей рода Candida на жидкой питательной среде, содержащей источник углерода, азота, минеральные соли и стимулятор роста, отличающийся тем. что. с целью

20 повышения выхода и активности оксидазы

L-аминокислот, а также сокращения времени культивирования дрожжей, в качестве Incточника света используют DL-изомер аминокислоты, в качестве стимулятора роста — осадок дрожжевого автопизата. полученный после центрифугирования в течение 15 мин при 6000 об/ин, при этом количество общего азота DL-изомера аминокислоты и остатка дрожжевого автопиза30 та устанавливают в соотношении 5,65-6,5:1.

1804478 таблица Э

Дсэжжи i iИсточник

Вгь((азота (Количество исто мика азота,г/л!

ЛОЛИчвктВО ОСадха дрежЭКЕ(coro авголиээга а литагель (иой следе

Соотношение азота осадка автолиэата и азота соединений в сре.

Биомасса

Внкол

Феемем та

Удельмвч акл" (тивмосгь !

Фермем. та в виде в виде в ви растко- -i общего змии (эа мл/л (азота го аз к обще- к амин. му мому

i ик/моль ма мг белка

Актив. нОсть на

100 мг

Сткик др" . э

0 в зиле в виде соедиме-I азота

r/n

Зкоит» мич коэффиц ле моота г/л мий (г/л

CandrrIa (ЫНк ; SO:

gulnmr- (Ok<2(50э . (mondrl, (л(нк((50к . Ц -Ana

Д -nna — 4(138

1 33

138

1:ЭЭ

I Э8

1.ЭЗ

0.085

0 099

f 086

0 099

23 I 42

0.65

1 26

0.84 ((L-Ала

Д(.-Вал

Д(.-Ban

L-Вал

0 086

0.099

Таблица 4

Дрожжи И

Количество источ мика азота, r/n сточмик азота

Количество осадка дрожжевого автолизата в питательной среде

Соотношение азота осадка автолиэага и азота соедимемий в среБиомассе

Удельиал активностьь ферментав

Выход фермемта в виде соединений в аиде азота в аиде раствора. млlл к общему в виде общего азота.

r/n в виде вмииио го азота. г/л г/л к вмииному

Э коиомич. Ко зффиц.

Активность ма

100 мг сухих жже мкмоль иа мг белка

Candid (NH (э а

cheval(. ео 66

Э IO 0657

269 0571

2 63 0 558.

4 20 0.657

3.63 0.571

3 55 0.558

5 50 0657

4 SOn (NН4(15On (NHnhSO4

4L-Ала

ДI=дла

ДС-Ала

ДС-Вал

ДI — Вал

4 77 0571

4 66 0.558

1-Вал

Составитель

Редактор А, Купрякова Техред M,Ìoðãåíòàï Ко ектор Н. Гунько рр

Заказ 1071 и отк ытиям при ГКНТ ССС P

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при

113035, Москва, /К-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент; . ро, т" г. Ужго д,,л.Гагарина, 101

3 10

2 Sn

2 63

4 20

362

3.55

5 50

4 77

4 66

0 660

0 570

0 558

0 660

0 570

0 558

0.660

0 571

0.558

23

23

0.086

0.099

086

0 099

0.086

0 099

0 015

0 017

0 015

0.017

0 015

0.017

0.015

0.017

О 015

0.017

0.015

0.017

1 6 50

1 5 65

1 6.50

1:5.65

1:6.50

1 5.65

1:6.5

1 5.65

1:6.5

1:5.65

1: 8.5

1:5.65

1:Э8

1:ЗЭ

1;Зб

1 33

1:38

1 ЭЭ

19

3.3

3.4

0.31

3.18

3.25 .

0.25

2 85

2. 90

2.2

Э.75

4.01

0.25

4.48

4,70

0.25

3.50

З.Б5

19 0

Э4.0

3.1

31.8

32 S

2.5

28.5

29.0

22

37.5

40.1

2.5

44,8

47,0

2.5

35.0

36.5

0

0 следи

О. 73

0.35

cne4s

0.62

0.47

0

О

0,951

О 760

О

0.675

0.540 и

0

0

1.21

0,86

1 ..00

О. 71