Способ определения количества ионов аммония в растворе

 

Использование: сельское хозяйство, физиология растений, медицина. Сущность изобретения: определение количества ионов аммония в растворе проводят путем смешения анализируемой пробы с растворами , содержащими глутаматдегидрогеназу и люциферазу, а также субстраты этих ферментов , с последующей регистрацией биолюминесценции реакционной смеси, причем в качестве раствора, содержащего люциферазу, используют белковый экстракт клеток Photobacterium flsherl, в реакционную смесь вводят аденозиндифосфат в концентрации (2,,.%, регистрируют на люминометре биолюминесценцию смеси, а о количестве ионов аммония судят по серости падения уровня биолюминесценции смеси, 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)ю С 12 N 9/02

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

C .1( 1 *й= Ы% „„

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Ю (21) 4802130/13 (22) 16.03.90 (46) 07.08.92. Бюл. N. 29 (71) МГУ им. M.Â.Ëoìîíoñoâà (72) И.С.Бокша и B,С.Данилов (56) Nicholas, Clarke, Anal. Biochemistry, 1971, v. 42, М 2, р. 560-568. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ИОНОВ АММОНИЯ В РАСТВОРЕ (57) Использование: сельское хозяйство, физиология растений, медицина. Сущность изобретения: определение количества ионов аммония в растворе проводят путем

Изобретение относится к способам определения количества аммиака и солей аммония в растворе и может быть применено в сельском хозяйстве, аналитической химии, биохимии и медицине, Известен способ определения количества аммиака и солей аммония в растворе посредством смешения их с фенолгипохлоритным реагентом и колориметрического определения продукта реакции.

Способ имеет следующие недостатки: невысокая чувствительность, длительность и неспецифичность.

Известен способ определения аммиака и количества ионов аммония в растворе посредством их смешения с ферментом глутаматдегидрогеназой, ее субстратами— а-кетоглуторатом и НАДН, и последующего спектрофотометрического измерения уменьшения концентрации НАДН, Способ характеризуется недостаточной чувствительностью, длительностью и узким диапазоном измерений. м ЫЛ, 1752766 А1 смешения анализируемой пробы с растворами. содержащими.глутаматдегидрогеназу и люциферазу, а также субстраты этих ферментов, с последующей регистрацией биолюминесценции реакционной смеси, причем в качестве раствора, содержащего люциферазу, используют белковый экстракт клеток Photobacterlum fisherl, e реакционную смесь вводят аденозиндифосфат в концентрации (2,9 — 3,9)«10 мас., регистрируют на люминометре биолюминесценцию смеси, а о количестве ионов аммония-судят no c,ê.прости падения уровня биолюминесценции смеси, 1 табл.

Известен способ определения аммиака и количества ионов аммония в растворе посредством смешения их с растворами высокоочищен ной люциферазы из

Photobacterium flscherl, глутаматдегидрогеназы, ее субстратов — НАДН и а -кетоглутората и субстратов люциферазы — ФМН и тетрадеканаля в калий-фосфатном буфере со стабилизатором ферментов — P -меркаптоэтанолом и последующего измерения на жидкостном сцинтилляционном спектрофотометре интегрального свечения смеси, который целесообразно взять эа прототип.

Недостатками известного способа являются длительность, недостаточная чувствительность, узкий диапазон измерений и неэкономичность.

Целью изобретения является ускорение, повышение чувствительности, расширение границ измерений и достижение экономичности способа.

Способ заключается в том, что готовят смесь следующего состава (мас.$): ФМН

1752766

Время анализа

Способ

Пороговая чувствительность к аммиаку, пределы измерения, мас.

Известный

П е ложенный

5 мин

30 с

8,5 10 -32.0-10

3,410 -1,010

Составитель И.Бокша

Техред M Ìîðãåíòàë Корректор O.Н)рковецкая

Редактор В,Петраш

Заказ 2734 . Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж 35. Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул, Гагарина 101 . \ (4,1-5,1) 10; тетрадеканаль (1.15-1,25) -10; а-кетоглуторат 0,11-0,50; активатор глу„тамЪтдегидрогеназы АДФ (2,91 — 3,91) 10 глутаматдегидрогеназа (1,5-4,0) 10; источник бактериальной люциферазы — белковый экстракт из клеток люминесцентных бактерий Photobacterium flscheri (4 — 8).10 стабдилизатор ферментов — P -меркаптоэтанол (5,36-6,36) ° 10; исследуемый образец, содержащий ионы аммония 1 — 10 об.%; до конечного объема (1-1,1 мл) доводят калий-фосфатным буфером 0,9-2,0 мас,%, рН 7,55 — 7,65. Затем впрыскивают в смесь раствор НАДН с одновременным перемешиванием до содержания (1,96-2,00) 10 мас.,(„ причем объем добавки составляет

4-5% от объема реакционной смеси, Концентрации подобраны путем постановки серийного эксперимента, исходя из максимально достигаемого положительного эффекта, Затем измеряют на люминометре скорость спада биолюминесценции смеси, по которой судят о количестве ионов аммония в растворе, В таблице показано, что способ ускорен по сравнению с известным в 10 раз и чувствительнее его в 25 раз, причем диапазон измерений шире на 4 порядка, т.е. границы измерений расширены в 10 раз.

Экономичность способа достигается

5 примененйем белкового экстракта

Photobacterium ffscheri вместо высокоочищенной люциферазы.

Формула изобретения . Способ определения количества ионов

10 аммония в растворе, предусматривающий смешение анализируемой пробы с растворами, содержащими глутаматдегидрогеназу и люциферазу, а также субстраты этих ферментов, с последующей регистрацией био15 люминесценции реакционной смеси, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью ускорения и повышения чувствительности способа, в качестве раствора, содержащего люциферазу, используют белковый экстракт клеток

20 Photobacterlum fisheri, при этом в реакционную смесь вводят аденозиндифосфат в концентра ;ии (2,9-3,9) ° 10 мас % биолюминесценцию смеси регистрируют на люминометре, а о количестве ионов аммо25 ния судят по скорости падения уровня биолюминесценции смеси.