Устройство для проведения реакции агглютинации

 

Использование: в вирусологии для идентификации и индикации вирусов в реакции агглютинации. Сущность изобретения: устройство содержит полистирольную панель 8. с расположенными параллельными рядами лунками, платформу 1 из полимерного материала, установленную на четырех вертикальных стойках и источник магнитного поля, выполненный в виде пластины, расположенной под платформой и закрепленной посредством подвижных резиновых втулок 5 на стойках, при этом в платформе выполнены отверстия, соосные лункам панели, и в каждом из отверстий установлена пенопластовая пробка с осевым металлическим штырем 4, верхним концом 7 прилегающим к дну панели. 2 табл., 3 ил.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N 33/53

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОмстВО сссР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОбРЕТЕНИЯ

7

Ю

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4917181/14 (2 ) 22.01.91 (46) 15.03.93, Бюл. М 10 (71) Молдавский научно-исследовательский институт профилактической и клинической ме(дицины (72) К.И.Спыну, С.Ф.Стовбун, Т.П.Грушко и

В.ф. Вуткарев (56) Авторское свидетельство СССР

1333960, кл. G.01 N 33/53, 1986. (54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ РЕАКЦИИ АГГЛ ЮТИ НАЦИИ (57) Использование: в вирусологии для иденI тификации и индикации вирусов в реакции

„„5U„„1802331 А1 агглютинации. Сущность изобретения: устройство содержит полистирольную панель 8. с расположенными параллельными рядами лунками, платформу 1 из полимерного материала, установленную на четырех вертикальных стойках и источник магнитного поля, выполненный в виде пластины, расположенной под платформой и закрепленной посредством подвижных резиновых втулок5 на стойках, при этом в платформе выполнены отверстия, соосные лункам панели, и в каждом из отверстий установлена пенопластовая пробка с осевым металлическим штырем 4, верхним концом 7 прилегающим к дну панели. 2 табл., 3 ил.

1802331.Изобретение относится к медицинской технике и может быть использовано в вирусологии для идентификации и индикации вирусов в реакции агглютинации в материале от клинически здоровых лиц, больных, а. также в образцах окружающей среды и т.п.

Целью изобретения является создание оригинального устройства для проведения реакции агглютинации (выполненной в различных вариантах — на твердой фазе, в планшетах микротитратора Такачи и т,п.), где в качестве твердотельного носителя используют магниточувствительные.носители, позволяющие сократить сроки учета до 1 ч, вместо 3 — 5 ч или на следующий день, после внесения диагностикума.

Это достигается тем, что после внесения диагностикума в лунки, полистирольную панель устанавливают по периметру на специальное устройство, индуцирующее магнитное поле силой 30,0 +. 2,0 Т (тесла)в центре для каждой лунки. Под воздействием магнитного поля несвязавшиеся магнитные сорбенты оседают на дно. В случае связывания носителя специфическим антигеном (последний зафиксирован антителами на твердой фазе) осеДание магниточувстви-тельных частиц на дно лунки не наблюдается.

На фиг.1 — 3 изображено предлагаемое устройство.

Устройство для проведения реакции агглютинации состоит из следующих частей: 1 — платформа.из полимерного материала, установленная с помощью крепления 6 на четырех вертикальных стойках 2, сделанных из материала, не обладающего магнитными свойствами; 3 — источник магнитного поля, выполненный в виде пластины, расположенной под платформой и закрепленной посредством подвижных резиновых втулок 5 на стойках, при этом в платформе выполнены отверстия, соосные с лунками панели, в каждом из которых установлена пенопластовая пробка с осевым металлическим штырем 4, верхним концом 7 прилегающим к дну панели, Магнитное поле усиливают или уменьшают путем перемещения магнитной пластины 3 вверх или вниз по длине стоек. Для проведения реакций в полистирольной панели 8, ее устанавливают на платформу устройства таким образом, чтобы металлические штыри 4 были соосными с лунками панели. Предварительно, с помощью аппарата Ш 1 — 8 определяют силу магнитной индукции на конце верхней части штырей, которая должна составлять 30,0 +-2,0 Т (тесла). Время нахождения полистирольной паР лимер", ТУ 04-2-278-79) вносят по 75 мкл

7 асцитной жидкости против ротэвируса, разведенной 0,01 М ФСБ 1:200. Титр асцитной

"5 жидкости (иммуноглобулинов) крысы, имму-. низированной ротавирусом в реакции TQpможения гемагглютинации равен 1:480. В контрольные лунки вносят по 75 мкл нормальной сыворотки, не содержащей антите20 ла к ротавирусам в тех же разведениях..

Панель инкубируют при 37 С в течение 2 —.3 качестве контроля лизаты незараженной культуры клеток и культуральные антигены

35 ротавируса обезьян. Панель с исследуемым материалом и вышеуказанными контролями инкубируют 1 — 2 часа при 37 С. Несвязавшиеся антигены и посторонние примеси удаляют 3-х кратным (2 — 3 мин) промыванием ФСБ, 40 с 0,05 твин-20. Затем в каждую лунку вносят по 50 мкл диагностикума, представляющего собой магнитные частицы, заключенные в целлюлозную оболочку и сенсибилизирован н ые иммуногл обул и на ми к ротави русу.

55 ( нели под воздействием магнитного поля составляет до 20 сек, Результаты реакции учитывают только при прохождении контролей по 4-х крестовой шкале..

Пример. Выявление ротавирусного антигена в копрофильтратах больных острым гастрознтеритом, а также в образцах сточных вод и воды открытых водоемов в реакции коагглютинации на твердой фазе.

В полистирольную панель с U-образными лунками (производство ПО "Ленмедпоч. Затем постукиванием панели по фильтровальной бумаге удаляют иэ лунок несорбированные антитела, с последующим 3-х кратным промыванием 0,01 М ФСБ (рН 7,2—

7,4) с 0;05 твин-20, После этого в лунки вносят по 75 мкл раствора 20 g копрофильтрэтов на 0,01 M ФСБ больных гастрознтеритом.

Для.контроля используют копрофильтраты, суспенэии фекалий больных такой же концентрации, содержащие и не содержащие ротавирусные антигены. Используют также в

Панели выдерживают 1,5 ч при 37 С с последующим помещением полистирольной панели на устройство для оценки реакции коагглютинации (на 15 — 20 сек) и окончательный учет реакции. Предварительно, перед установлением планшеты на устройство с помощью измерителя магнитной индукции (Ш 1-8) измеряют равномерность и силу магнитного поля на верхних концах металлических штырей. Интенсивность магнитной индукции должна быть равномерна и составлять 30,0 +. 2,0 Т (тесла), Результаты анализа определяют визуально, обязательно с учетом контролей. по

4-х крестовой шкале. б

1802331,5

Таблица 1

Специфичность, $

Сов паде ние, 7ь

Чувствительность, Оценка реакции коагглютинации и ототип

Результат анализа редложенная технология проведения реакции коагглютинации полож. от и ат.

41

Положительные ценка реакции коагглютИнации с помощью разработанного устройства (q ри ги нал) 86,9

88,9

87,1

274

Отрицательные

П р и м е ч а н и е; Чувствительность = (прототип и оригинал положительные/

/прототип положительные) х 100.

Специфичность = (оригинал и прототип отрицательные/

/прототип отрицательные) х 100.

Совпадение = (оригинал и прототип положительные)+

+ (оригинал и прототип отрицательные)/(прототип положительные+

+ прототип отрицательные) х 100.

Всего было исследовано в реакции коагглютинации с использованием предло жЕнного устройства и устройства-прототипа

333 пробы, в т.ч. 49 проб фекалий, 284 образца проб водных объектов (144 — сточные воды, 120 — вода открытых водоемов, 20— образцы проб питьевой воды). В табл.1 показано сравнение чувствительности и специфичности определения ротавирусного антигена в реакциях коагглютинации, реализованных с помощью известного и предложенного устройств.

В табл.2 показано сравнение чувствительности и специфичности определения р тавирусного антигена в реакциях коагглютинации, реализованных с помощью известного и предложенного устройства методом иммуноферментного анализа (ИФА).

Предлагаемое устройство для проведфния реакции агглютинации отличается оригинальной конструкцией и позволяет значительно сократить сроки учета реакции агглютинации на твердой фазе до 2-х вместо 24 ч, Формула изобретения

5 Устройство для проведения реакции агглютинации, содержащее полистирольную панель с расположенными параллельными рядами лунками, отл и ча ю щеес я тем,. что. с целью повышения производительно10 сти за.счет сокращения времени оценки результатов реакции, оно дополнительно снабжено платформой из полимерного материала, установленной на четырех верти кальных стойках, и источником магнитного

15 поля, выполненным в виде пластины, расположенной под платформой и закрепленной посредством подвижных резиновых втулок на стойках, при этом в платформе выполнены отверстия, соосные с лунками панели, в

20 каждом из отверстий установлена пенопластовая пробка с осевым металлическим штырем, верхним концом прилегающим к дну панели.

1802331

Таблица2

П р и м е ч а н и е. Чувствительность = (PKA и ИФА положительные/

/ИФА положительные) х 100.

Специфичность = (PKA и ИФА отрицательные/ИФА отрицательные) х 100.

Совпадение = (PKA и ИФА положительные)+ (PKA и ИФА отрицательные)/(ИФА положительные + ИФА отрицательные) х 100.

1802331

Составитель К.Спыну

Редактор В.Трубченко Техред М.Моргентал Корректор M.Càìáoðñêàÿ

Заказ 847 Тираж . Подписное

ВНИИПИ Г

ИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101