Способ слияния эритроцитов
Использование: биотехнология, цитология , способы получения большого количества слившихся клеток и изучения механизма их слияния, Использование в качестве химических агентов моноиодуксусной кислоты, хлористого кальция и хлористого лантана, при этом осадок эритроцитов смешивают с раствором моноиодуксусной кислоты до конечной концентрации 8-12 мм, после чего полученную смесь инкубируют, эритроциты отмывают и смешивают с 0,5-5 мМ раствором хлористого кальция, после чего в указанную смесь добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 0,30-0,35 мм 1 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (19) (31) (я)5 С 12 и 5/00
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ=. (21) 4828746/13 (22) 23.02.90 (46) 07.08,92. Бюл ¹ 29
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (71) Нижегородский сельскохозяйственный институт и Научно-исследовательский институт химии при Нижегородском государственном университете им, Н.И,Лобачевского (72) 1О.А,Шереметьев, Г,И.Макин и Ф..Ю.Суслов (56) Рингерц Н., Севидж P. Гибридные клетки. — M.; Мир, 1979, с. 415.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения большого количества слившихся клеток и изучения механизма их слияния.
Известен способ слияния эритроцитов, включающий выделение эритроцитов из крови, их отмывание, добавление в качестве агента слияния полиэтиленгликоля и учет слившихся клеток.
Недостатком способа является небольшая (10 — 30;4) частота слияния клеток.
Цель изобретения — увеличение числа слившихся клеток.
Поставленная цель достигается тем, что выделенные из крови и отмытые эритроциты cMGLIJplBBloT с раствором моноиодуксусной кислоты до конечной концентрации
8 — 12 м М, получен ную смесь ин кубируют, затем эритроциты омывают от кислоты и смешивают с 0,5-5,0 мМ раствором хлористого кальция, после чего в указанную Смесь добавляют хлористы и лантан до конечной концентрации 0,30 ... 0,35 мМ, при атом В
2 (54) СПОСОБ СЛИЯНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ (57) Использование: биотехнология, цитология, способы получения большого количества слившихся клеток и изучения механизма их слияния, Использование в качестве химических агентов моноиодуксусной кислоты, хлористого кальция и хлористого лантана, при этом осадок эритроцитов смешивают с раствором моноиодуксусной кислоты до конечной концентрации 8 — 12 мм, после чего полученную смесь инкубируют, эритроциты отмывают и смешивают с 0,5-5 мМ раствором хлористого кальция, после чего в указанную смесь добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 0,30 — 0,35 мм. 1 табл. качестве агентов слияния используют моноиодуксусную кислоту, хлористый кальций и хлористый лантан.
Способ осуществляют следующим образом. Ъ
Свежезаготовленную кровь донора центрифугируют при 2000 g в течение 5 мин, плазму убирают, а эритроциты трижды отмывают физиологическим раствором с последующим центрифугированием, К 1,0 мл осадка отмытых эритроцитов добавляется 9 мл моноидоуксусной кислоты до конечной концентрации 8 ... 12 мМ, приготовленной на забуференном физиологическом растворе и инкубируют в течение 30 мин при 37 С. После инкубации эритроциты. дважды отмывают от кислоты физиологическим раствором, 0,1 мл осадка отмытых от кислоты эритроцитов смешивают с 0,8 мл раствора хлористого кальция, приготовленного на забуфервнном физиологическом растворе, до конечной концентрации 0,55 0 мМ, перемешивают и добавляют 0 1 мл
1752762
Составитель !О. Шереметьев
Техред M.Mîðãåíòàë Корректор Л. Лукач
Редактор В. Петраш
Заказ 2733 . Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 раствора хлористого лантана. приготовленного на забуференном физиологическом растворе, до конечной концентрации 0,300,35 мМ.
Учет слившихся клеток ведется с помощью светового микроскопа. Частота слияния зритроцитов в зависимости от концентрации агентов слияния представлена в таблице.
Использование предлагаемого способа позволяет повысить выход слившихся клеток до 60 g,.
Формула изобретения . Способ слияния зритроцитов, включающий выделение эритроцитов иэ крови, их отмывание с последующим слиянием с помощью химических агентов и учет числа слившихся клеток, отличающийся тем, что, с целью увеличения числа слившихся
5 клеток„ в качестве химических агентов используют моноиодуксусную кислоту, хлористый кальций и хлористый лантан, при этом осадок эритроцитов смешивают с раствором моноиодуксусной кислоты до конечной
10 концентрации 8-12 мМ, после чего полученную смесь инкубируют, эритроциты отмывают и смешивают с 0,5-5 мМ раствором хлористого кальция, затем в укаэанную смесь добавляют хлористый лантан до ко15 нечной концентрации 0,30-0,35 мМ,
