Способ определения эффективности мембранопротекторов
Использование: медицина, биология, скрининг веществ, обладающих мембранопротекторным действием. Сущность изобретения : пучки мышечных волокон инкубируют с исследуемым веществом. Регистрируют содержание белка в опытной и контрольной пробах. Мембранопротекторный эффект определяют по степени торможения выхода белка в среду инкубации. 1 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛ ИСТИЧ Е С К ИХ
РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N 33 /68
ГОСУДАРСТВЕННЫ Й КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
1, (л) О Э (21) 4816870/14 (22) 20.04.90 (46) 15.05.92.Бюл.М 18 (71) Всесоюзный науч но-исследо вател ьский институт "Биотехнология" (72) И.M.Íîñîâà, С,Ф.Дрозд и Н,В,Филатова (53) 612.015(088.8) (56) Материалы I! Всесоюзн.конф. Биоантиоксидант, М.: 1989, т.1, с.107-108, Изобретение. относится к способам тестирования различных лекарственных препаратов и химических соединений при проведении фармакологического скрининга, конкретно к способу оценки эффективности мембранопротекторов и может найти применение в экспериментальных исследованиях в области фармакологии.
Известны способы оценки мембранопротекторного действия по их влиянию на проницаемость сосудистых стенок микрососудов для макро-и микромолекул, регистрируемую с помощью прижизненной микроскопии в сочетании с микрофлюориметрией.
К недостаткам данного способа относятся необходимость уникальной дорогостоящей импортной аппаратуры и наличия дефицитных реактивов.
Известен также способ оценки эффективности мембранопротекторов, где в качестве биологического материала используются эритроциты крови, а эффективность действия оценивается по степени увеличения резистивности эритроцитов к механическому воздействию, гипотонии, „„5U„„1734023 Al (54) Сг!ОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ МЕМБРАНОПРОТЕКТОРОВ (57) Использование: медицина, биология, скрининг веществ, обладающих мембранопротекторным действием, Сущность изобретения: пучки мышечных волокон инкубируют с исследуемым веществом. Регистрируют содержание белка в опытной и контрольной пробах. Мембранопротекторный эффект определяют по степени торможения выхода белка в среду инкубации. 1 табл. перекисной атаке, Способ заключается в следующем. Исследуемое вещество вводят экспериментальному животному до экстремального воздействия (термического повреждения). Спустя 1-2 ч после ожоговой травмы животное забивается декапитацией и производится забор крови с гепарином, выделя ются цен трифуги рова н ием эритроциты и трижды отмываются физраствором, Определяется резистентность мембран эритроцитов к перекисному гемолизу. Активность препарата оценивается по изменению резистентно:ти мембран к перекисной атаке, Недостатками указанного способа являются длительность выполнения анализа (8 ч
10 мин), трудоемкость, так как выполнение его включает семь процедур, лабильность биологического материала (мембран эритроцитов), недостаточная специфичность, так как нельзя использовать его для тестирования препаратов с миотропным действием, Целью изобретения является ускорение и упрощение спо=оба, 1734023
30
40
Составитель Носова И.М, Техред М.Моргентал Корректор M. Демчик
Редактор Ю. Середа
Заказ 1667 Тираж Подписное
BÍÈÈÏÈ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул,Гагарина, 101, Поставленная цель достигается за счет сокращения числа процедур, инкубации исследуемого препарата in vitro с пучками мышечных волокон, а мембранопротектроный эффект определяют по степени торможения выхода белка в среду инкубации.
Пример. Из икроножной мышцы экспериментального животного выделяли пучки мышечных волокон массой 1-2 мг каждый и отмывали в течение 5 мин физраствором на льду, затем промакивали фильтровальной бумагой, взвешивали на торсионных весах и группы пучков волокон массой 20-100 мг помещали в среду инкубации объемом 2 мл, B опытные пробы добавляли неотон в конечной концентрации 500 мг/%. Инкубацию проводили в течение 120 мин в роторном смесителе при 4 С. По окончании инкубации в контрольных и опытных пробах определяли содержание белка, используя реактив Фолина (фирма "Merck"), Мембранопротекторный эффект определяли по степени торможения выхода белка в среду инкубации, Выход белка выражали в относительных единицах и рассчитывали по разнице между значениями оптической плотности опытных и контрольных проб по5 сле и до инкубации(ЛЕ) к массе волокон (мг), умноженной на 1000, Полученные данные представлены в таблице, Формула изобретения
Способ определения эффективности
10 мембранопротекторов путем обработки биологического материала исследуемым соединением с последующим определением уровня белка в среде инкубации и сравнением с контролем, отличающийся тем, 15 что, с целью ускорения и упрощения спосо- . ба за счет сокращения числа процедур, обработку проводят in vitro, в качестве биологического материала используют пучки мышечных волокон, а эффективность
20 мембранопротекторов определяют по степени торможения выхода белка в среду инкубации,

