Способ приготовления препаратов митотических метафазных хромосом

 

Изобретение относится к медицине , а именно к цитогенетике. Целью является повышение сохранности кле- .ток и большего выхода хромосом,, Цель достигается тем, что полученные клетки костного мозга инкубируют в течение 10-15 мин в 0,5%-ном растворе йодистого калия, а разрушение оболочки клеток осуществляют путем распыления клеток с высоты не менее 20 см„ Способ позволяет получить качественные препараты хромосом.

COOS СОВЕТСНИХ

СОЦИМИСТИЧЕСНИХ

РЕа1У БЛИН (19) 111) А1 (® г. 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

f1O ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ П1НТ СССР (21) 4717183/14 (22) 11.07.89 (46) 07,05.92. Бюл. М 17 (71) Красноярский государственный медицинский институт (72) Л.В. Федюкович и А.Б. Егорова (53) 616-0.88.8 (088.8) (56) Макгрегор Т. и др. Методы работы с хромосомами животных. - M.

Мир, 1 986, с. 28. (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ . МИТОТИЧЕСКИХ МЕТАФАЗНЬХ ХРОМОСОМ

Изобретение относится к медицине, а именно к цитогенетике.

Целью изобретения является повышение сохранности клеток и большего выхода хромосом, лучшей их расправляемости.

Способ осуществляют следующим образом.

Для приготовления препаратов метафазных пластинок хромосом дозы колхицина подбирают эмпирически, чтобы получить максимальный выход метафазных пластинок хромосом. Колхицин в дозе, составляющей 2,5 мг на 1 кг массы животного, вводится внутрибрюшинно за 1 ч 20 мин до забоя животно» го, Костный мозг из бедренной кости вымывают 0,53-ным (0,0301М) раствором йодистого калия при 3 С объе" мом 10 мл, тщательно суспендируют и . культивируют на водяной бане при

37 С в этом же растворе в течение

10»»15 мин„ Затем производят центрифугирование (1000 об/мин) суспензии клеток костного мозга в течение

2 (57) Изобретение относится к медици не, а именно к цитогенетике. Целью . является повышение сохранности кле.ток и большего выхода хромосом. Цель достигается тем, что полученные клет-ки костного мозга инкубируют в течение 10-15 мин в 0,54-ном растворе йодистого калия, а разрушение оболочки клеток осуществляют путем распыления клеток с высоты не менее

20 см. Способ позволяет получить качественные препараты хромосом. б мин. Иадосадочный раствор йодистого калия сливают и заменяют охлажденным свежеприготовленным фиксатором, состоящим из смеси метанол - ледяная уксусная кислота в соотношении 3:1 в объеме 4 мл..Перед началом трехкратной фиксации клетки костного мозга тщательно суспендируют, выдер" живают в фиксирующей смеси 10 мин, центрифугируют (1000 об/мин) в течение 10 мин. Препараты метафазных пластинок хромосом производят путем раскапывания клеточной суспензии с высоты 20 см с последующим высуши" ванием в пламени горелки.

Пример. Крыса, самец, массой

160 r. Внутрибрюшинно введен колхицин 0,4 г, растворенный в 1 мл дистил", лированной воды. Через 1 ч 20 мин животное забито методом смещения шейных позвонков. Выделение бедренной кости животности, из которой шприцем вымывают костный мозг теплым 0,5Ф-HblM (0,0301М) раствором иодистого калия в объеме f0 мл. Костный мозг тщатель"

Составитель Л.Стебаева

Техред М.дидык редактор А. Мотыль

Корректор М. Самборская

Заказ 1577 Тираж Подписное

РЧИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г,Ужгород, ул. Гагарина, 101

3 173 ,но суспендируют с помощью пастеровской пипетки и инкулируют в этом же растворе на водяной бане при 37 С в течение 15 мин. Затем суспензию клеток костного мозга центрифугируют (1000 об/мин) в течение 6 мин. Надосадочный гипотонический раствор иодистого калия сливают и заменяют . охлажденным свежеприготовленным Фиксатором, состоящим из смеси метанолледяная уксусная кислота в соотношении 3:1 в объеме 4 мл. Перед началом каждой Фиксации клетки костного мозга тщательно суспендируют. фиксацию и центрифугирование производят трехкратно по 10 мин.

По окончании Фиксации суспензию клеток костного мозга наносят на охлажденные влажные стекла с высоты

20 см. Высушивают стекло в пламени горелки. Красят препараты 0,13-ным красителем, содержащим азур П и эозин в соотношении 1:1 по 10-15 мин, далее тщательно промывают проточной, затем дистиллированной водой, сушат на воздухе. На препарате в одном поле зрения находят не менее трех-четырех пластинок метотических метафазных хромосом,. пригодных для цитогенетического анализа. Каждая отдельная пластинка митотических метафазных хромосом

2222 4 имеет правильную Форму и содержит определенное для этого вида число хромосом. В каждой метафа зной пластинке хромосомы расположены отдельно одна от другой и без наложений. В пластинках митотических метафазных хромосом не наблюдается черезмерного разброса хромосом. Также митотические метафаз1р ные хромосомы имеют размеры, приемлемые для производства цитогенетического анализа, что позволяет качественно и быстро провести анализ.

Предлагаемый способ позволяет ка15 чественно и быстро провести цитогенические. исследования.

Формула и 3 о б р е т е н и я

Способ приготовления препаратов

20 митотических метафазных хромосом путем введения раствора колхицина, вымывания и инкубации клеток костноt-o мозга с последующей Фиксацией, центрифугированием и разрушением обо25 лочек клеток, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения сохранности и большего выхода клеток, инкубацию проводят в течение 1015 мин в 0,5/-ном растворе йодисто3p ro K, eH e o ono ocy ществляют путем распыления клеток с высоты не менее 20 см.