Способ цитологического определения катехоламинов в эритроцитах

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к гистохимическим методам исследования. Целью является повышение точности определения катехоламина в тканях и клетках организма. Цель достигается тем, что мазки перед фиксацией обрабатывают парами формалина, а фиксатор дополнительно содержит ацетат натрия, хлорид натрия при следующих соотношениях компонентов , мас.%: бихромат калия 1-5; ацетат натрия 0,2-0,4; формалин 10-15; вода - остальное . При этом импрегнацию проводят в 4-8%-ном растворе азотнокислого серебра после фиксации, а клетки докрашивают в 1 %-ном растворе дозина. Способ позволяет выявить все гранулы катехоламина в клетке.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (s»s G 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К АВТОРСКО "у1У СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4713349/14 (22) 03.07.89 (46) 30;04,92. Бюл. № 16 (71) Саратовский государственный университет им. Н.Г.Чернышевского (72) О.Г.Астафьева и Е.Е.Вилкова (53) 616-0.89-9 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

¹ 11222233007700, кл. G 01 N 1/30, А 61 В 10/00, опублик. 1982, 10. (54) СПОСОБ ЦИТОЛОГИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАТЕХОЛАМИНОВ B ЭРИТРОЦИТАХ (57) Изобретение относится к области меди-, цины, а именно к гистохимическим методам

Изобретение относится к медицине, а именно к гистохимическим методам исследования, и может быть использовано для контроля за скоростью и активностью адаптивных процессов у животных и человека в эксперименте и клинике, Целью является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом.

На хорошо обезжиренном предметном стекле приготавливают мазок крови. Стекло помещают в сосуд с концентрированными парами формалина на 1-2 мин, а затем погружают в смесь следующего состава, мас.%:

Формалин 10-15

Бихромат калия, 1-5

Ацетат натрия 0,2-0,4

Хлорид натрия 0,9-1,6

Вода Остальное 42,, 1730555 А1 исследования, Целью является повышение точности определения катехоламина в тканях и клетках организма. Цель достигается тем, что мазки перед фиксацией обрабатывают парами формалина, а фиксатор дополнительно содержит ацетат натрия, хлорид натрия при следующих соотношениях компонентов, мас.%: бихромат калия 1-5; ацетат. натрия 0,2-0,4; формалин 10-15; вода — остал ьное. При этом имп регйацию проводят в 4-8%-ном растворе азотнокислого серебра после фиксации, а клетки докрашивают в 1%-ном растворе дозина. Способ позволяет выявить все гранулы катехоламина в клетке.

Обработку мазков проводят при комнатной температуре в темноте 40-50 мин, причем все компоненты смеси приготовля- д ются на основе 1,5%-ного раствора NaCI во избежание гемолиза эритроцитов. Затем мазки ополаскивают дистиллированной водой и импрегнируют 5%-ным раствором азотнокислого серебра 3 мин. Избыток кра- Л сителя смывают дистиллированной водой и (Л окрашивают цитоплазму эритроцитов 1 - (Я ным раствором эозина в 1 мин. Стекла подсушивают на воздухе и микроскопируют под иммерсией. В эритроцитах на фоне розовой цитоплазмы наблюдают темно-коричневые глыбки — включения катехоламинов. Пары формалина и добавление его в состав смеси необходимы для надежной фиксации мазков крови.

Пример 1. Информативность метода была проведена серией опытов на 5 коысах1730555 самцах, которым внутримышечно был введен адреналин в дозе 2,5 мг/кг.

Для контрольного исследования кровь взята из хвостовой вены до введения препарата. Последующие заборы крови произведены через 5,45 и 120 мин после инъекции.

Оценка результатов опытов проводилась по проценту распределения эритроцитов с различными размерами гранул и плотностью их в клетках. Учет величины гранул проводили по 3-бальной системе; мелкие— средние — крупные гранулы; плотность расположения гранул по 4-бальной системе, Приведенные данные свидетельствуют, что в контрольных мазках из 100 просмотренных эритроцитов 28 не содержат гранул, остальные содержали в основном мелкие гранулы, заполнявшие наполовину (34 ) или полностью (24 ) эритроцит, Через 5 мин после введения адреналина в 2,8 раза уменьшилось количество пустых эритроцитов и до 49 (по сравнению с

13 " в контроле) увеличилось количество эритроцитов с гранулами среднего размера.

Через 45 мин количество пустых эритроцитов становится близким к контрольному (25 ) и наблюдается снижение количества эритроцитов с мелкими (2 ) и средними (20 ) гранулами и резкое увеличение числа эритроцитов с крупными гранулами (с 4 до

53 " ). Через 120 мин становится явной тен. денция к возврату эритроцитов к контрольным значениям (21, пустых, 35 эритроцитов с мелкими, 34 со средними и

10 с крупными гранулами).

Таким образом, введение адреналина сопровождается максимальным увеличением количества гранул по размерам и плотности к 45-й мин и тенденцией к нормализации к120-й мин, выразившейся в появлении значительного количества пустых эритроцитов и уменьшении эритроцитов с крупными гранулами.

Пример 2. Следующая серия опытов была проведена с экстраваэированной кровью 5 крыс-самцов, в которую добавлялся адреналин в разных концентрациях;

0,000001, 0,00001, 0,0001, 0,001 и 0,01 ные растворы. В мазке крови без добавления препарата преобладают мелкие и средние гранулы, полностью заполняющие клетки, При добавлении в кровь минимальной концентрации адреналина наблюдается увеличение крупных гранул с 7 в контроле до 18 . При добавлении адреналина в концентрации 0,00001 продолжается увеличение количества эритроцитов с крупными гранулами до 43ф, при резком

5 снижении их числа (с 39 до 8 ) с мелкими гранулами. Добавление адреналина в концентрации 0,0001 мало меняет предыдущие результаты. Однако при концентрациях

0,001 и 0,01 наблюдается резко выражен10 ная тенденция к увеличению количества эритроцитов с крупными гранулами (до 65 и

83 соответственно) и уменьшению их числа с мелкими и средними гранулами, что объясняется включением механизмов не15 специфической рецепции катехоламинов.

Следовательно, предлагаемый способ является чувствительным для оценки и изучения различных физиологических состояний организма, связанных с воздействием

20 на симпато-адреналовую систему.

Заявленный способ может быть использован в научно-исследовательской и клинической практике в тех случаях, когда оказывается невозможным оценить состоя25 ние симпато-адреналовой системы по количеству катехоламинов в тканях, а также требует минимального количества исследуемого материала, в связи с чем может быть с успехом использован для изучения нор30 мальных физиологических и патологических процессов в организме и динамике, Формула изобретения

Способ цитологического определения

35 катехоламинов в эритроцитах путем фиксации мазков в среде, содержащей бихромат калия, с последующей их импрегнацией в азотнокислом серебре и определением катехоламинов по интенсивности окрашива40 ния, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, мазок перед фиксацией обрабатывают парами формалина, а фиксатор дополнительно содержит ацетат натрия, формалин и хлорид натрия

45 при следующих соотношениях компонентов, мас. :

Бихромат калия 1-5

Ацетат натрия 0,2-0,4

Формалин 10-15

50 Хлорид натрия 0,9-1,6

Вода Остальное при этом импрегнацию проводят в 4-8 ном растворе азотнокислого серебра в течение 2-4 мин.