Способ определения нарушений полимеризации фибрин-мономера в плазме крови больных

 

Изобретение относится к медицине, в частности к гемостазу, и может быть использован для исследования полимеризационной фазы свертывания крови при диагностике геморрагических диатезов, тромбозов. ДВС-синдромов, системных васкулитов. Целью изобретения является повышение точности способа. Для этого при нарушении полимеризации фибрин-мономера в качестве жидкости, приводящей к полимеризации, используют плазму больного, которую добавляют к растворимому фибрин-мономеру Здорового и при удлинении скорости полимеризации ставят диагноз наличия ингибитора полимеризации, а при отсутствии удлинения-дисфибриногенемии.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4750899/14 (22) 17.10.89 (46) 15.02,92. Бюл. N. 6 (71) Алтайский государственный медицин ский институт (72) Г, А. Суханова и И. Г. Перегудова (53) 612.015(088,8) (56) Гематология и.трансфузиол., 1985, М 1, с. 35-38. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАРУШЕНИЙ ПОЛИМЕРИЗАЦИИ ФИБРИН-МОНОМЕРА В ПЛАЗМЕ КРОВИ БОЛЬНЫХ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к гемостазу, и может быть испольИзобретение относится к медицине, в частности к гемостазу, и может быть использовано для исследования полимеризационной фазы свертывания крови при диагностике геморрагических диатезов, тромбаэов, ДВС-синдромов, системных васкулитов и др.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет воэможности выявления дисфибриногенемии и ингибитора полимеризации.

Способ осуществляют следующим образом.

Набор крови производят иэ локтевой вены s силиконированную пробирку, где находится 1 мл 3,87;-ного раствора цитрата натрия, и набирают кровь до метки 10 мл.

Богатую тромбоцитами плазму получают путем центрифугирования крови в течение 5 мин при 100 об/мин в центрифуге 3 УХЛ 4.2

ОПн. Бедную тромбоцитами плазму получают путем центрифугирования богатой тром,, Ж,, 1712873 А1

{я)ю 6 01 N 33/48 зован для исследования полимеризационной фазы свертывания крови при диагностике геморрагических диатезов, тромбоэов, ДВС-синдромов, системных васкулитов.

Целью изобретения является повышение точности способа. Для этого при нарушении полимериэации фибрин -мономера в качестве жидкости, приводящей к полимеризации, используют плазму больного, которую добавляют к растворимому фибрин-мономеру здорового и при удлинении скорости полимеризации ставятдиагноз наличия ингибитора полимеризации, а при отсутствии удлинения-дисфибриногенемии.

I боцитами плазмы в пластиковых пробирках при 3000 об/мин в течение 15-20 мин на цетрифуге 8 УХЛ 4.2 ОПн.

Получают растворимый фибрин-мономер из плазмы здорового человека. Используют 0,075 M боратный буфер, состоящий из

525 мл раствора тетрабората натрия (19,1 г на 1 л дистиллированной воды) и 450 мл 0,1 н. соляной кислоты (рН 7,6). Используют ацетатный буфер, состоящий из 400 мл раствора ацетата натрия (2,7 г на 1 л дистиллированной воды) и 100 мл 0.02 M уксусной кислоты (рН 5,2), к которому добавляют мочевину до концентрации 107;, К 100 мл цитратной плазмы здорового человека добавляют 0,46 r ЭДТА и 10 г мочевины. Мешают стеклянной палочкой до полного растворения.

К смеси добавляют. раствор тромбина

100 мг-на 10 мл дистиллированной воды и оставляют смесь при 37 С на 30 мин.

К смеси добавляют 900 мл раствора следующего состава: 720 мл 0,14 M раствора хлорида натрия и 180 мл 0,075 M боратного буфера (рН 7,6).

После разбавления плазмы оставляют ее при 37 С на 2 ч, Образовавшийся сгусток наматывают на стеклянную палочку, удаляют избыток жидкости и осушивают о фильтровальную бумагу, затем промывают 0,14 М раствором хлорида натрия и дистиллированной водой.

Помещают сгусток в 70 мл 10%-ного раствора мочевины на ацетатном буфере (pH 5,2). Растворяют на магнитной мешалке до полного растворения.

Фильтруют раствор и разбавляют боратным буфером (600 мл), оставляют при

37 Сна1ч.

Образовавшийся гель помещают на водян ую баню при 420g на 80 мин.

Сгусток собирают, отмывают, затем растворяют в 50 мл 10% мочевины на ацетатном буфере.

Разбавляют раствор 500 мл боратного буфера, выдерживают при 37 С 2 ч.

Собирают сгусток, отмывают и раство ряют в 50 мл 10% мочевины на ацетатном буфере.

Определяют концентрацию белка при

280 нм, для фибрин-мономера, 1 мг/мл равно 1,56.

Порцию полученного раствора фибринмономера разбавляют в 2, 4, 8 и т.д. раз 10% мочевиной на ацетатном буфере и определяют время образования фибринового сгустка в экспериментальной системе: 0,.1 мл боратного буфера +0,1 мл фибрин-мономера. Концентрация фибрин-мономера, обеспечивающая полимеризацию за 18 — 20 с " рабочая.

Ход определения, Берут 0,1 мл рабочего раствора фибрин-мономера и добавляют к нему 0,1 мл исследуемой плазмы, определяют скорость полимеризации фибрин-мономера. За контроль принимают скорость полимеризации фибрин-мономера при добавлении плазмы здорового человека, Норма 18-20 м. При удлинении скорости полимеризации ставят диагноз наличия ингибитора полимеризации в плазме больного, при отсутствии удлинения скорости полимеризации и наличия нарушений полимеризационной фазы свергывания крови ставят диагноз дисфибриногенемии.

Обследовано предложенный способом

170 человек с нарушениями в полимериэационной фазе свертывания коови. У 124 больных выявлен ингибитор полимеризация фибрин-мономера, у 4& — дисфибриногенемия.

Пример 1. Больная Т. Г„24 лет поступила на обследование по поводу частых носовых кровотечений, синячковости, которые впервые появились 6 мес, назад. Из

5 анамнеза стало известно, что год назад больная перенесла вирусный гепатит, При обследовании системы гемостаза найдено .

Тесты Б K

Тромбиновое время, с 20 15

10 Анцистродоновое время, с 52 30

Анцистроновое время, с 44 25

Полимеризация фибрина по методу Бышевского 100 37

Полимеризация фибрина

15 по предлагаемому способу 19 18

Наличие нарушений в полимеризационной фазе свертывания крови у данной больной (гипокоагуляция по тромбиновому, анцистроновому, астроновому временам, 20 удлинение полимериэации по методу Бышевского) и отсутствие нарушения по заявленному способу говорит о наличии у больной дисфибриногенемии, возможно печеночнаго генеза и требует медикаментоз25 ной терапии гепатопротекторами.

Пример 2, Больной M А., 50 лет.

Диагноз: геморрагический,васкулит, В анализах системы гемостаза.

Тесты Ь К

30- Тромбиновое время, с 18 15

Анцистродоновое время, с 40 25

Астроновое время, с 58 27

Полимеризация фибрина по методу Бышевского 60 25, 35 Наличие гипокоагуляции по тромбиновому, анцистродоновому, астроновому временам, удлинение времени полимеризации по методу Бышевского с одновременным удлинением времени полимеризации фиб40 рина по заявленному способу говорит о наличии ингибитора полимериэации в плазме больного. В качестве лечения данному больному можно рекомендовать этапный плазмофореэ, удаляющий ингибиторы пол45 имериэации из крови.

Эффективность данного способа состоит в том, что он позволяет выявить нарушения полимеризации фибрина, а следовательно повысить точность диагно50 стики таких заболеваний как геморрагический диатез, тромбоз, ДВС-синдром, системные васкулиты и др.

Формула изобретения

Способ определения нарушений пол55 имериэации фибрин-мономера в плазме крови больных путем использования растворимого фибрин-мономера, полученного путем добавления буферного раствора и тромбина к плазме крови и добавления раствора, приводящего к полимериэации фиб 1712873

Составитель Л.Конюхова

Редактор М.Самерханова ТехредM.Moðãåíòàë Корректор О .Кундрик

Заказ 533 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб;, 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 рин-мономера с последующим определением времени образования фибринового сгустка, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет воэможности выявления дисфибриногенемии и ингибитора полимеризации, используют фибрин-мономера здорового человека, а в качестве раствора добавляют исследуемую плазму больного и при увеличении времени образования фибринового сгустка выявляют наличие ингибитора полимеризации

5 фибрин-мономера, а при стабилизации показателя относительно контроля определяют дисбифриногенемию.