Способ определения реактогенности живых чумных вакцин

 

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии. Целью изобретения является повышение точности способа. Цель достигается тем, что после вакцинации у животных исследуют лимфатическую ткань регионарных лимфатических узлов, в которой осуществляют площадь "светлых центров". По увеличению площади светлых центров в 1,6-2,5 раза на 1-7-е сутки по отношению к зталонному штамму определяют вакцину как реактогенную. Способ значительно повышает точность лабораторного метода.

(l9) (! 1) СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

° Ф (51)5 G 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

В (21) 4692012/14 (22) 16.05.89 (46) 15.02.92. Бюл. N 6 . (71) Научно-исследовательский противочумный институт Кавказа и Закавказья (72) Н.А.Локтев (53) 616-0.88.8 (088.8) (56) Кн, Основные критерии отбор вакцинных штаммов чумного микроба. Методические рекомендации, Саратов, 1976, 34, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕАКТОГEHНОСТИ ЖИВЫХ ЧУМНЫХ ВАКЦИН

Изобретение относится к медицине, в частности к способам определения реактогенности живых бактериальных вакцин против особо опасных инфекций.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом, На гистологических срезах регионарных лимфатических узлов иммуйиэированных животных с целью установления степени ответной реакции лимфоидной ткани и повышения уровня объективности оценки реактогенности вакцийных штаммов микроскопически исследуют регионарные лимфатические узлы, а дифференциацию функционально-морфологического состояния осуществляют по увеличению площади "светлых центров" лимфоидных фолликулов в сравнении с контролем иммунизированных эталонным вакцинным штаммом чумного микроба ЕВ.

Независимо от примененных доз через

1 сут после иммунизации морских свинок (57) Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии. Целью изобретения является повышение точности способа, Цель достигается тем, что после вакцинации у животных исследуют лимфатическую ткань регионарных лимфатических узлов, в которой осуществляют площадь "светлых центров". По увеличению площади светлых центров в 1,6-2,5 раза на 1-7-е сутки по отношению к эталонному штамму определяют вакцину как реактогенную. Способ значительно повышает точность лабораторного метода. культурой реактогенного штамма чумного микроба К-2 (Кызылкумский 2) площадь

"светлых центров" фолликулов регионарных лимфатических узлов увеличивается в

1,6-1,7 раза в сравнении с площадью "светлых центров" фолликулов регионарных лимфатических узлов морских свинок, иммунизированных культурой эталонного вакционного штамма чумного микроба ЕВ, Более значительное увеличение площади (светлых центров) через 3-5 сут после иммунизации морских свинок культурой реактогенного штамма К-2 (Кыэылкумский 2), в

2,2-2,5 раза в сравнении с площадью "светлых центров" фолликулов регионарных лимфатических . узлов морских свинок, иммунизированных культурой эталонного штамма связано со свойствами инвазивности, приживаемости, раэмножаемости и распространяемости микробов, преобладающими у микробов штамма К-2.

Выбор для оценки реактогенности чумных вакционных штаммов ".-светлых центров" лимфоидных фолликулов регионарных

1712818 лимфатических узлов обусловлен тем, что

"светлые центры" являются лабильными структурами лимфоидной ткани на различные токсические воздействия и в них происходит активное размножение лимф>цитов под влиянием антигена, Поэтому оценка реактогенности вакционных чумйых штаммов по увеличению площади "светлых центров" фолликулов регионарных лимфатических узлов позволяет судить о новых свойствах заявляемых отличий.

Опытной группе морских свинок вводят подкожно в верхнюю половину бедра двухсуточную агаровую культуру второй генерации реактогенного штамма К-2 в дозах 100 микробных клеток 10 млн. м.к. и 2 млрд, м.к. по ОСО мутности 42-28-59-85. Контрольную группу. морских свирок иммунизируют двухсуточной агаровой культурой второй генерации эталонного вакционного штамма чумного микроба ЕВ. Морских свинок забивают по 3 на каждую дозу через 1. 3, 5, 7, 8 и 10 сут, вскрывают и регистрируют видимые изменения в органах.

Регионарные лимфатические узлы фиксируют в 10 -ном водном растворе формалина, заключают в парафин, готовят среды толщсиной 5 мкм; окрашивают их гематоксилином и зозином. В срезах регионарных лимфатических узлов иммунизированных животных с помощью окулярной линейки проводят измерение диаметров светлых центров лимфоидных фолликулов при увеличении окуляра 10", объектива 9" микроскопа MBVI-3 с бинокулярной насадкой

АУ-12 кратностью насадки 1,5" определяют площадь "светлых центров" по формуле эллиптичности структур т Омакс < мин

4 К2

Где л= 3,14; d Äc максимальный диаметр

"светлого центра"; dM» — минимальный ди= аметр "светлоФ центра"; К вЂ” линейное увеличение объектива. Полученные результаты обрабатывают математически и получают независимо от дозы среднюю величину площади "светлого центра".

Пример 1. Опытной группе морских свинок вводили подкожно в верхнюю половину бедра двухсуточную агаровую культуру второй генерации реактогенного штамма умного микроба К-2 в дозах 100 микробных клеток 10 млн. мк, и 2 млрд. м.к, по ОСО мутности 42-28-59-85(по.3 животных на каждую дозу). Контрольной группе морских свинок вводили двухсуточную агаровую культуру второй генерации эталонного вакГ макс мин К

1 где л= 3,14; дмакс — максимальный диаметр

"светлого центра", d<» — минимальный диаметр "светлого центра"; К вЂ” линейное увеличение объектива. Полученные результаты обрабатывали математически и получали среднюю величину площади "светлого центра" фолликулов регионарных лимфатических узлов, составляющую в опытной группе

177 + 26 мкм и в контроле — 107ч- 14 мкм .

Определяли кратность увеличения площади "светлых центров" фолликулов регионарных лимфатических узлов у животных, иммунизированных реактогенным штаммом чумного микроба К-2 по отношению к площади "светлых центров" фолликулое регионарных лимфатических узлов в контроле у животных, иммунизированных эталонным вакционным штаммом чумного микроба ЕВ.

Кратность составляла 1.6 — 1.7 раза, 50

5

20 цинного штамма чумного микроба ЕВ в тех же дозах, что опытной группе морских свинок. Животных забивали через 1 сут после иммунизации, вскрывали и регистрировали видимые изменения е органах.

Регионарные лимфатические узлы:фиксировали в 10 -ном.водном растворе формалина, заключали в парафин и готовили гистологические срезы толщиной 5 мкм, ок- рашивали их гематоксилином и эозином, проводили измерение диаметров "светлых центров" лимфоидных фолликулов с помощью окулярной линейки при увеличении окуляра микроскопа МБИ-3 10". объектива

9" с кратностью бинокулярной насадки АУ12 1,5", Цену деления окулярной линейки определяли с помощью объект-микрометра на указанном микроскопе. Площадь "светлых центров" фолликулов в срезах регионарных лимфатических узлов определяли по формуле эллиптичности структур с

Пример 2, Опытной группе морских свинок вводили подкожно в верхнюю половину бедра двухсуточную агаровую культуру второй генерации реактогенного штамма чумного микроба К-2 в дозах 100 микробных клеток 10 млн. м.к. и 2 млрд. м. к. по ОСО мутности 42-28-59-85 (по 3 животных на каждую дозу). Контрольной группе морскйх свинок вводили двухсуточную агаровую культуру второй генерации эталонного вакцинного штамма чумного микроба ЕВ е тех же дозах, что опытной группе морских свинок, Животных забивали через 3 сут после иммуниза-!

1712818

Составитель Л.Стебаева

Редактор В.Трубченко Техред M.Моргентал Корректор М.Максимишинец

Заказ -530 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул.Гагарина, 101 ции, вскрывали и регистрировали видимые изменения в органах.

Регионарные лимфатические узлы фиксировали в 10 -ном водном растворе формалина, заключали в парафин и готовили гистологические срезы толщиной 5 мкм, окрашивали их гематоксилином и эозином, проводили измерение диаметров "светлых, центров" лимфоидных фолликулов с помощью окулярной линейки при увеличе.нии окуляра микроскопа 10", объектива 9", с кратностью бинокулярной насадки АУ12, 1 5". Цену деления окулярной линейки определяли с помощью объект-микрометра на указанном микроскопе. Площадь

"светлых центров" фолликулов в срезах регионарных лимфатических узлов определяли по формуле эллиптичности струкс — 7" макс ми", д 3 )4 дмакс — максимальный диаметр "светлого центра", ()Ming — минимальный диаметр "светлого центра". К- линейноеувеличениеобъектива, Полученные результаты обрабатывали математически и получали среднюю величину площади "светлого центра" фолликулов регионарных лимфатических узлов в опытной группе. составляющую 238 +.36 мкм и в контроле — 103, 13 мкм . Определяли крат2 . ность увеличения площади "светлых центров" фолликулов регионарных лимфатических узлов у животных, иммунизироеан5 ных реактогенным штаммом чумного микроба К-2 по отношению к площади "светлых центров" фолликулов регионарных лимфатических узлов в контроле у животных, иммунизированных эталонным вакцинным

10 штаммом чумного микроба ЕВ. Кратность составляла 2,2-2,4 раза.

Способ позволяет значительно повысить точность определения реактогенности бактерий.

15 Формула изобретения

Способ определения реактогенности живых чумных вакцин путем вакцинации с последующим микроскопическим исследованием лимфоидной ткани в сравнении с

20 эталонным вакцинным штаммом. о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, исследуют лимфатическую ткань регионарных лимфатических узлов, в которых определяют площадь светлых

25 центров и при увеличении площади в 1,6-2,5 раза на 1 — 7 сутки по отношению к эталонному штамму определяют вакцину как реактогенную,