Способ измерения скорости диффузии биологических клеток поликомпонентного раствора в моносистеме
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии. Цель изобретения - повышение точности способа путем одновременной фиксации скорости диффузии разнотипных компонентов. Помещают исследуемый раствор в измерительную трубку с постоянной площадью поперечного сечения. Пробу раствора разделяют в измерительной трубке на две смежно"КонтактнЬ1е части, извлекают после акспозиции пробу из одной части трубки и перемешивают. После этого измеряют в ней и в остатке пробь! концентрацию исследуемых компонентрв и по,формуле определяют скорость диффузии компонентов за время экспозиции. Применение способа позволяет повысить точность измерения скорости диффузии биологических клетОк поликомпонентного раствора в моносистеме по сравнению с прототипом за счет одновременной фиксации скорости диффузии разнотипных компонентов.
союз советских
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (Щ (1I) (я)5 6 01 и 33/48
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
1 2 (21) 4726547/14, 4775256/14 (22) 08.06.89 (463 15.02.92. Бюл. М 6 . (72) Ю. M. Чабров (53) 615.475(088.8) (56) Тодоров И. Клинические лабораторные исследования в педиатрии", София,1963, с.
382,, (54) СПОСОБ ИЗМЕРЕНИЯ СКОРОСТИ
ДИФФУЗИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ КЛЕТОК
ПОЛИКОМПОНЕНТНОГО РАСТВОРА В
МОНОСИСТЕМЕ
{57) Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии. Цель изобретенйя— повышение точности способа путем одновременной фиксации скорости диффузии разнотипных компонентов. Помещают иссИзобретение относится к медицине, а именно к гематологии.
Цель изобретения — повышение точности способа путем одновременной фиксации скоростей диффузии разнотипных компонентов.
Способ осуществляют следующим образом.
Предварительно готовят измерительную трубку и две емкости.
Производят забор в емкость пробы поликомпонентного раствора, не обязательно содержащего цветоконтрастные объекты, Это может быть кровь, плазма, желчь, желудочный сок и т.д.
Производят забор из .емкости пробы раствора в измерительную трубку до нулевой отметки (на наружной поверхности трубки. имеется одна разграничительная ледуемый раствор в измерительную трубку с постоянной площадью поперечного сечения. Пробу раствора разделяют в измерительной трубке на две смежно-контактные части, извлекают после экспозиции пробу из одной части трубки и перемешивают. После этого измерМют в ней и в остатке пробы концентрацию исследуемых компонентрв и по формуле определяют скорость диффузии компонентов за время экспозиции. Применение способа позволяет повысить точность измерения скорости диффузии биологических клеток поликомпонентнаго раствора в моносистеме по сравнению с прототипом за счет одновременной фиксации скорости диффузии разнотипных компонентов. метка). В емкости должна быть оставлена часть раствора.
Трубку на период экспозиции устанавливают под любым углом к горизонту в зависимости от применяемой той или иной движущей силы.
По окончании экспозиции производят извлечение фиксированной (т,е. до уровня разграничительной метки) части раствора из трубки в емкость. При этом извлечение должно быть произведено только из одной, но любой части трубки без механического перемешивания смежных частей раствора.
Раствор в емкости, а также оставшуюся часть раствора взбалтывают.
Необходимое количество раствора попарно забирают (повторно) из емкости для измерения концентрации разнотипных объектов, например клеток, молекул белков, жиров, углеводов и т.д.
1712871
Измеряют парные концентрации соответственна для каждого типа микрообъектов, используя формулу, или рассчитывают скорость и направление каждого типа микрообъектов в отдельности, Число таких типов для измерения их взаимоперемещения в одной трубке не ограничено.
Направление и величину перемещения компонентов рассчитывают по формуле cсд .S= где S — длина пути перемещения в трубке компонентов раствора определенного типа, м, за время экспозиции;
l — длина части трубки, м;
С вЂ” концентрация компонентов определенного типа, измеренная в пробе, извлеченной из первой части трубки;
С0 — концентрация компонентов определенного типа, измеренная в исходной пробе раствора.
Пример 1. Диффузионный анализ раствора в моносистеме применен к пробам крови, взятым у здоровых и больных лиц.
Измерены одномоментные скорости седиментации эритрацитов (визуально), а также перемещения лейкоцитов и их фракций в цельной (несепарированной) крови в одной измерительной трубке.
Последовательность предварительных и основных технологических операций ñïàсаба следующая.
Предварительно готовят стабилизатор крови по прописи:
2,8-ный раствор поливинилового спирта (мол. вес 60000), мкл 5,0
Цитрат кислый, r 0,16
Глюкоза, г 0,16
Вода дистиллированная, мкл Да 10,0
Стерильно!
Одновременно готовят три емкости— флаконы А, Би В.
Предварительно готовят измерительную стеклянную трубку, нижний конец которой эапаян и общая длина канала которой равна 120 мм, Отметка 0 нанесена у верхнего (открытого) конца трубки. Разграничительная метка делит длину канала трубки на две части (объема): верхнюю длиной 50 мм и нижнюю длиной 70 мм. Внутренний диаметр трубки 7 мм. Размеры длин верхней и нижней частей трубки обоснованы следующим: предварительные контрольные измерения показали, чта скорость оседания эритроцитов не превышает 75 мм/ч, а скорость перемещения лейкоцитов вверх — 55 мм/ч.
Шприцем берут пробу крови из вены пациента — 5 0 мкл и помещают ее в отдельную предварительно приготовленную емкость — флакон А, куда налит стабилизатор
5 крови в объеме 1,7 мкл. Полученную смесь в объе 4е 6,7 мкл (соотнашение 3:1) взбалтывают до получения равномерной взвеси клеток крови, Пробу крови из флакона А в объеме 5,7
10 мкл выливают в измерительную трубку до нулевой отметки. Трубку устанавливают вертикально при комнатной температуре на период экспозиции — 1 ч, Диффузионный процесс идет под воздействием градиента
15 сил гравитации.
По окончании экспозиции (1 ч) визуально фиксируют скораст ь оседания эритрацитов по известной методике.
Одновременно определяют направле20 ние и скорость перемещения лейкоцитов.
Для этого, избегая механического переиешивания, шприцем с иглой извлекают пробу крови полностью из верхнего объема трубки и выливают ее в предварительно приготов25 ленную емкость — флакон 6, а пробу крови из нижнего объема трубки — ва флакон В.
Пробы крови во флаконах Б и В взбалтывают до получения равномерной взвеси клеток.
30 Из каждого флакона (Б и В) берут необходимое количество крови для измерения концентрации лейкоцитов и подсчета дифференциальной формулы, концентрации фракции.
35 Определяют направление движения (вверх или вниз) лейкоцитов в целом и каждой из их фракций, Для этого сравнивают полученные концентрации однотипных клеток из флаконов Б и В. Например, если кон40 центрация клеток во флаконе Б больше их концентрации во флаконе В, следовательно; клетки перемещаются вверх, и наоборот.
Рассчитывают длину пути и скорость диффузии клеток по формуле
45, cñ.
S—
Параметры трубки: i>-50 мм; 4,"70 мм.
Исследуемый раствор — кровь.
Экспозиция — 1 ч.
Требуется определить в одной трубке величину С03, направление и скорость лейкоцитов, направление и скорость сегментоядерных нейтрафилав.
По окончании экспозиции величину
СОЭ определяют визуально по известной методике. Получают (например) 40 мм/ч.
Определяют парные концентрации лейкоцитов: С0 10,9х10 шт,/л; С = 15х10 шт,/л, 1712871
S—Составитель А;Бобров
Редактор А.Лежнина Техред M.Mîðãeíòàï Корректор И,Му ка
Заказ 533 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб;, 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
По формуле
3 50 15 10 109 10
+ 188 мм.
10,9 10
Определяют парные концентрации С- 5 нейтрофилов: Со=2,5х10 шт,/л; С1=2,0х10 шт./л.
По формуле — — 10 мм.
2,5Вывод: СОЗ вЂ” 40 мм/ч; скорость лейкоцитов =+18 мм/ч (вверх); скорость С-нейтрофилов =-10 мм/ч (вниз)..
Применение предлагаемого способа позволяет повысить точность измерения скорости диффузии биологических клеток поликомпонентного раствора в моносистеме за счет одновременной фиксации скорости диффуэии разнотипных компонентов.
Формула изобоетения
Способ измерения скорости диффузии биологических клеток поликомпонентного раствора в моносистеме, включающий помещение исследуемого раствора в измери- 25 . тельную трубку с постоянной площадью поперечного сечения, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа путем одновременной фиксации скоростей диффузии раэнотипных компонентов, пробу раствора разделяют в измерительной трубке на две смежно-контактные части, после экспозиции осуществляют забор пробы из одной части трубки, перемешивают и измеряют в ней концентрацию исследуемых компонентов, измеряют длину части трубки, из которой осуществлен забор пробы, измеряют концентрацию компонентов в неизвлеченной пробе и определяют скорость диффузии компонентов за время экспозиции по формуле cс.)
Со где S — скорость диффузии компонентов за время экспозиции;
I — длина части трубки, из которой осуществлен забор раствора;
С вЂ” концентрация компонента в забранной пробе;
C> — концентрация компонента в неиэвлеченной пробе,,
