Способ определения @ -аминоизовалериановой кислоты

 

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к определению ааминоизовалериановой кислоты. Цель изобретения - повышение селективности и упрощение способа. Определение ведут путем растворения анализируемой пробы в этаноле и обработки этанольным раствором 2-метил-4,6-динитрофенола с последующим фотометрированием образующегося окрашенного раствора.2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 . G 01 N 21/78

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4809915/04 (22) 04.04.90 (46) 15;02.92. Бюл. М 6 ! (71) Курский государственный медицинский институт (72) В. К. Шорманов и Н. В. Костебелов (53) 543.42.063(088.8) (56) Коренман И. М. Фотометрический анализ. Методы определения органических соединений, M;: Химия, 1975, с. 167 — 169.

Ионушене 3. Ю., Денис Г. Й., Степановичус Ю. Ю. Определение аминогрупп в белках и пептидах при помощи 2,4 6-тринитробензолсульфокислоты. Журнал аналитической химии, 1988, т. 43, N 3, с, 536-540.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения а -аминоизовалериановой кислоты (валина), и может быть применено в практике заводских контрольно-аналитических лабораторий, центральных заводских лабораторий химических предприятий, при био химических исследованиях, Способ относится к числу массовых.

Известен способ определения аминокислот путем обработки нингидрином в среде органического растворителя с последующим фотометрированием образующегося окрашенного раствора, Способ характеризуется малой селективностью, и трудоемкостью процесса определения.

Наиболее близким по техническому решению и достигаемым результатам к предлагаемому является способ определения аминокислот, в том числе и а-аминоизовалериановой кислоты, заключающийся в об.ЫЛ 1712841 А1 (54) СПОСОБ:ОПРЕДЕЛЕНИЯ а-АМИНОИЗОВАЛЕРИАНОВОЙ КИСЛОТЫ (57) Изобретение относится к аналитической химии, в частности к определению ааминоизовалериановой кислоты. Цель изобретения — повышение селективности и упрощение способа. Определение ведут путем растворения анализируемой пробы в этаноле и обработки этанольным раствором

2-метил-4,6-динитрофенола с последующим фотометрированием образующегося окрашенного раствора. 2 табл. работке анализируемой пробы водным раствором 2,4,6-тринитробензолсул ьфокислоты в присутствии боратного буфера (рН

9,3). последующем термостатировании при 30 С в течение 30 мин, обработке раствором формалина и определении оптической плотности образующегося окрашенного раствора.

Способ неселективен в отношении ааминоизовалериановой кислоты, так как подобным образом могут быть определены и другие аминокислоты, характеризуется трудоемкостью и значительными затратами времени на его выполнение.

Цель изобретения — повышение селективности определения и упрощение способа.

Поставленная цель достигается с помощью предлагаемого способа, который заключается в том, что анализируемую пробу растворяют в этаноле и обрабатывают этанольным раствором 2-метил-4,6-динитрофе, 1712841

55 нола с последующим фотометрированием образующегося окрашенного раствора.

Способ осуществляется следующим образом.

Анализируемую пробу растворяют в этаноле обрабатывают этанольным раствором 2-метил-4,6-динитрофенола и фотометрируют образующийся окрашенный раствор.

Пример 1. Качественное определение а-аминоизовалериановой кислоты.

Около 2 мг а-аминоизовалериановой кислоты вносят в пробирку и прибавляют

3 мл этанола. Содержимое пробирки встряхивают 5 мин обрабатывают 0,5 мл 0,02 -го раствора 2-метил-4,6-динитрофенола в этаноле. Появляется желтое окрашивание. Чувствительность реакции 2 мкг/мл.

Пример 2. Количественное определение а -аминоизовалериановой кислоты.

Построение калибровочного графика.

B пять пробирок вносят 0,5; 1,0; 1,5; 2,0 и 2.5 мл 0,004%-го раствора а-аминоизовалериановой кислоты в этаноле и соответственно 3,0. 2,5, 2,0, 1,5, 1,0 мл этанола. В каждую пробирку прибавляют по 0,5 мл

0,02 -ного, раствора 2-метил-4,6-динитрофенола в этаноле и через 15 мин измеряют оптическую плотность образующихся окрашенных растворов на спектрофотометре

СФ-26 при длине волны 412 нм в кювете с толщиной рабочего слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор, полученный в контрольном опыте. По результатам измерений строят калибровочный график. Светопоглощение окрашенных растворов подчиняется закону БугераЛамберта-Бера в интервале концентраций

5-25 мкг/мл. Методом наименьших квадратов рассчитывают уравнение калибровочного графика, которое в данном случае имеет вид

D= 0,00898 С + 0,00430, где D — оптическая плотность, С вЂ” концентрация анализируемого вещества в фотометрируемом растворе, мкг/мл.

Методика определения. Около 0,02 г (точная навеска) Q -аминоизовалериановой кислоты растворяют в смеси 10 мл воды и

10 — 15 мл этанола в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят общий объем до метки этанолом (раствора А). 5 мл раствора А вносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят содержимое колбы до метки этанолом (раствор Б), 2 мл раствора Б помещают в пробирку, прибавляют 1,5 мл

5 этанола, 0,5 мл 0,02%-ro раствора 2-метил4,6-динитрофенола в этаноле и дальнейшие операции осуществляют по схеме, указанной для построения калибровочного графика. Количественное содержание

10 а-аминоизовалериановой кислоты определяют по уравнению калибровочного графика и пересчитывают на навеску. Результаты определения и метрологические характеристики представлены в таблице 1.

15 Предлагаемый способ по сравнению с прототипом характеризуется более высокой селективностью. Так, в отличие от прототипа он позволяет определять и -аминоизовалериановую кислоту в присутствии

20 других а -аминокислот: а.-амина- Р -(и-оксифенил)-пропионовой кислоты, а -амино

-метилвалериановой кислоты, Q амино-оксипропионовой кислоты, а-аминоглутаровой кислоты, у;амида глутаминов ой ки сл от ы, а-аминопропионовой кислоты, и -амино- Р -фенилпропионовой кислоты, Q, 8 диаминокапрон вой кислоты, а-амино-у-метилмеркаптомасляной кислоты, пирролидин- а-карбоновой кислоты, По сравнению с прототипом предлагаемый способ в два раза сокращает и родолжительность определения (с 40 до 18 — 20 мин), не содержит трудоемких операций и уменьшает общее число аналитических операций

35 с8до4, Сравнительная характеристика предлагаемого и известного способов приведена в табл, 2, 40 Формула изобретения

Способ определения а-аминоизовалериановой кислоты путем растворения анализируемой пробы в растворителе и

45 обработки цветореагентом с последующим фотометрированием образующегося окрашенного раствора, о тл и ч а ю щи и с я тем, что, с целью повышения селективности и упрощения способа, в качестве растворителя применяют этанол, а в качестве цветореагента — этанольный раствор 2-метил-4,6-динитрофенола, 1712841

Таблица 1

Результаты количественного определения а-аминоизовалериановой кислоты таблица2

Сравнительная характеристика предлагаемого и известного способов

Сравнительные па раметры

Предлагаемый способ

Селективность

8 (взятие навески, растворение, обработка цветореагентом, термостатирование, охлаждение реакционного раствора, обработка раствором формалина, фотометрирование

4 (взятие навески, растворение, обработка цветореагентом, фотометрирование) Число аналитических операций

Наличие трудоемких Отсутствуют опера ций термостатированиес реактивом 30 мин при 30 С

Продолжительность 18-20 мин одного определения

40 мин

Составитель

Редактор И, Касарда Техред М,Моргентал Корректор Т. Палий

Заказ 531 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Позволяет селективно определять (-аминоизовалериановую кислоту в присутствии других М-аминокислот; с(-анино-,Р-(п-оксифенил)-пропионовой кислоты, o(-амино-Р-метилвалериановой кислоты,,(-амино-P-оксипропионовой кислоты, с(-аминоглутаровой кислоты, ) -амида глутаминовой кислоты, Ы -аминопропионовой кислоты, d (-амино- Л -фенилпропионовой кислоты, 4 -с-диаминокапроновой кислоты, о .-амино-)=метилмеркаптомасляной кислоты,пирролидин-о(-карбоновой кислоты

Не позволяет селективно определять <а-аминоизовалериановую кислоту в при" сутствии других d-аминокислот: М -амино-Я-(и-оксифенил) " .пропионовой кислоты,х -амино-J3-метилвалериановой кислоты, о(-амино-,9-оксипропионовой кислоты,o(-аминоглутаровой кислоты, 3 -амида глутаминовой кислоты, К-аминопропионовой кислоты, o(-амино-Л-фенилпропионовой кислоты,o(,E-диаминокапроновой кислоты, с(-амино-З=метилмеркаптомасляной кислоты, пирролидин-К-карбоновой кислоты