Штамм фага viвriоnis раrанаемоliтiсi для фагодиагностики парагемолитических вибрионов серотипа 05:к15

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике пищевых токсикоинфекций, вызываемых морскими галофильными парагемолитическими вибрионами. Целью изобретения является новый фаг V.PARAHAEMOLYTICI Ф139/155/, пригодный для определения вида и серотипа 05:К15 парагемолитических вибрионов. Впервые выделен фаг парагемолитических вибрионов, относящийся к IV морфологической группе по Тихоненко. Фаг Ф - 139 отличается от известных фагов парагемолитических вибрионов морфологией, антигенным строением, а также специфической литической активностью по отношению к вирулентным парагемолитическим вибрионам самого распространенного в СССР серологического типа 05:К15 по японской классификации. Фаг депонирован и хранится в коллекции бактериофагов Тбилисского НИИ вакцин и сывороток МЗ СССР под номером Ф - 139. Фаг Ф - 139 рекомендуется использовать для видовой и типовой идентификации парагемолитических вибрионов, а также при проведении научных исследований. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБ Лик (Я)5 С 12 Ч 7/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ПЮТ СССР (21) 4 729980/13 (22) 16.08.89 (46) 23.08.91. Бюл. № 31 (71) Ростовский-на-Дону государст— венный научно-исследовательский противочумный институт и Новороссийская противочумная станция (72) А.Е.Пибинзон, З.И.Ус, Г.В.Гальцева и Б.M.Äåãòÿðåâ (53) 576.8.077.5(088.8) (56) Ваггоз I.À. et. al. Incidence

of Ч.parahaemolyticus bacteriophages

in Marine Samples. — Appl.

Environ Microbiol 1978, ч. 36, № 3, р. 492 — 299.

Авторское свидетельство СССР № 1124031, кл. С 12 N 7/00, 1978.

\ (54) ШТАММ ФАГА VIBRION IS PARAHAEMOLYTICI ДЛЯ ФАГОДИАГНОСТИКИ ПАРАГЕИОЛИТИЧЕСКИХ ВИБРИОНОВ СЕРОТИПА 05 :Ê15 (57) Изобретение относится к меДицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике пищевых токси i

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике пищевых токсикоинфекций, вызываемых морскими галофильными парагемолитическими вибрионами.

Целью изобретения является новый фаг V.parahaemolytici Ф-139 (155), пригодный для определения вида и серотипа 05:К15 парагемолитических вибрионов.

„,80„„1671690 А 1

2 коинфекций, вызываемых морскими галофильными парагемолитическими вибрионами. Целью изобретения является новый фа г Ч. ра rahaemo ly t i c i Ф13 9 (155), пригодный для определения вида и серотипа 05:К! 5 парагемолитических вибрионов. Впервые выделен фаг парагемолитических вибрионов, относящийся к IV морфологической группе по Тихоненко.

Фаг Ф- 139 отличается от известных фагов парагемолитических вибрионов морфологией, антигенным строением, .а также специфической литической активностью по отношению к вирулентным парагемолитическим вибрионам самого распространенного в СССР сералогического типа 05:К15 по японской клас- ® сификации. Фаг депонирован и хранится в коллекции бактериофагов Тбилисского

НИИ вакцин и сывороток МЗ СССР под С номером Ф-139. Фаг Ф-139 рекомендуется использовать для видовой и типовой ф идентификации парагемолитических виб— рионов, а также при проведении научных исследований. 1 табл.

Фаг Ф-139 выделен из воды Черного моря, депонирован и хранится в коллекции бактериофагов Тбилисского НИИ вакцин и сывороток Минздрава СССР под № Ф-139.

Морфологические, серологические и культуральные признаки.

При электронно-микроскопическом изучении установлено, что капсид вирионов фага Ф-139 имеет в проекции гексагональную форму, размер 76, Ix

1671690 х43, -4 нм., !<»<на <1тростка 140, 2»м, диаметр 2, б нм. В отци ие от известных флго»арлгемолитических вибриоHoB np<-,IiIaraåì»III флг относится к

lV мор<Ьологической группе по классификации Тихоне»ко.

В тлбл»пе пр»ведешц размеры фага

Ф-139 в срлвнении с IIзвестными флгами парлгемалитических вибрионов, сви- 10 детельствующие об их морфологических различиях.

О новизне Ьага Ф-139 свидетельст20 распространенному в пашен стране серотипу вирулентных парагемолитических вибрионов 05:К15 (по японской класси- 1О фикации).

Вибрио.ifi этого серотипа являются основным возбудителем больцп х эпидемических вспышек пищевых токсикоинфекций (!Г1И) в нашей стране. За три года они вызвали более 900 заболеваний.

Преллагаемый фаг не лизировал парагемолитические вибрионы других серотипов, циркулирующих на территории на-50 шей страны: 01:К32; 02:К28, 03:К33;

04:К8; 04:К12; 05:К17; 05:K47; 06:К18;

06:К46; 010:К52.

Высокую специфичность фага подтверждает также отсутствие лити еского действия на других представителей, вуют также результаты изучения антигенного строения:. антитела к этому 15 фагу не нейа рл.<»зуют известные фаги

333 и 375, а антитела к ним интактны по отношен»ю к фагу Ф-139.

Фаг-139 активно репродуцируется в щелочном бульоне Мартена с 2

2,57. NaC1 (рН 7,7 — 7,8). При посевной дозе флгл 3 10 /мл » множествен5 ности инфекции .— 7 через 5 — 6 ч инкубации при 36 — 37 С накапливается

8 10 -2 10 вибрионов. 25

Негативные колонии вибрионов фага139 воспроизводятся с помощью общеизвестного двуслойного метода Грациа на щелочных средах, содержащих 27 NaC1. .Через 16 — 18 ч при 20 — 25 С в мяг- 30 ком слое агара с индикаторной культу— рой образуются круглые полупрозрачные негативные колонии диаметром 1,5

2,5 мм.

Важной особенностью hara Ф-139 является избирательная литическля активность его по отношению к наиболее семейств Vibrion;1< еае, Рвеu<1uiaoilа

Фа| Ф-139 может быть <спользован для фагодиагностики наиболее распространенных в СССР вирулентных парагемолитических вибрионов серотипа 05:

:К15, а также при проведении эииданалпза вызванных ими заболеваний.

Пример 1. Из испражнений больного пищевой токсикоинфекцией выделяют культуру, подозрительную по морфо1iого-биологическим признакам íà V.parahaemolyticus. Фагодиагностику этой культуры проводят следующим образом.

Культуру засевают в бульон Мартена с

27. NaC1 и помещают на 3 ч в термостат.

О,1 мл выросшей культуры смешивают с

5 мл расплавленного и охлажденного до 45 С 0,77-ного агара Мартена с 27

NaC1 и выливают вторым слоем на пластинки застывшего 27-ного лгара Мартена с 27. NaC1 в чашках Петри. После застывания агар подсушивают и делят на три сектора, в центр каждого наносят пипеткой каплю одного из <Ьагов парагемолитических вибрионов Ф-139, 333, 375. Посевы оставляют при 20 — 25 С.

При просмотре через 18 ч на месте нанесения hara Ф-139 — зона просветления, на месте нанесения других фагов просветление отсутствует.

Выделенную культуру диагносцируют как V.parahaemolyticus серотипа

05:К15.

Пример 2. Культуру, выделенную от больного и подозрительную на

V.parahaemolyticus, изучают по методике, описанной в примере 1. Однако культура лизируется только фагом 333.

Выделенная культура диагносцируется как Ч.parahaemolyticus. Определение серотипа может .быть проведено с помощью японского набора типирующих сывороток.

Аналогичным образом осуществляется фагодиагностика и определение серотипа культур, выделенных из воды и гидробионтов, с помощью hara Ф-139.

Ф о р м у л а и з с б р е т е н и я

Штамм фага Vibrionis parahaemolytici Ф-139 (ТбилНИИВС) для фагодиагностики парагемолитических вибрионов ,. ротипа 05:К15.

1671690

Номер фага

Морфогруппа по Тихонен

Размер, нм

Индикаторный штамм

Больший Меньший Длина Диаметр

Собственный

Коллекционный ко

76,1

43,4

155

140,2 10,6

Ф-139 IV

Ф-104 III

333

1,6

61,3

57,6

375

Ф-105

66,0

60,8

88,7 22,6

Редактор И.Дербак

Заказ 2803 Тираж 351 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,!01

Составитель И.Тареева

Техред М.Дидык Корректор Л.Патаи

V. parahaemoliticus 112

V.parahaemoliticus 3421

V.parahaemoliticus 360