Способ электрофоретического разделения белков гемолимфы насекомых в полиакриламидном геле
Изобретение относится к биохимии и иммунологии насекомых. Целью является улучшение качества разделения белковых фракций гемолимфы насекомых. Для этого в качестве реагента, предотвращающего меланизацию, используют натрий серноватистокислый пятиводный. причем его концентрация в смеси с гемолимфой составляет 0,01-0,04 М. Применение данного реагента увеличивает число разделяемых белковых фракций и улучшает качество их разделения. 1 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (я)ю А 01 М 1/00
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4634178/13 (22) 09.01.89 (46) 15.01.91. Бюл. N 2 (71) Институт зоологии и паразитологии
Ан ЛитССР (72) Я.И.Жакаускене и Ю.M.Øèðâèícêàñ (53) 543.545 (088.8) (56) Урванцева Г.А., Жохов Н,Б. Изучение белков гемолимфы личинок некоторых видов стрекоз методом электрофореза в полиакриламидном геле. Ярославль, 1980, (54) СПОСОБ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО
РАЗДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ ГЕМОЛИМФЫ НАИзобретение относится к биохимии и иммунологии насекомых.
Целью является улучшение качества разделения белковых фракций гемолимфы насекомых.
Пример. Электрофоретическое разделение белков проводят в полиакриламидном геле при помощи аппарата для электрофореза "Модель-69" фирмы "Реанал" ВНР, Будапешт, трис-глициновом буфере, рН 8,3 при напряжении 250-500 В, силе тока 5 мА на колонку, продолжительности 1,5 — 2 ч в интервале температур 3 — 5 С.
На каждую колонку наносят 0,1 мл гемолимфы, разбавленной 407,-ным раствором сахарозы.
Берут гемолимфу насекомых гусеницы большой пчелиной огневки и к ней добавляют раствор натрия серноватистокислого пятиводного с таким расчетом, чтобы в смеси концентрация его составила 0,005; 0,01;
0,02; 0,04; и 0,05 М. Приготовленную гемолимфу подвергают электрофоретическому
„„5U „„1620070 А1
СЕКОМЫХ В ПОЛИАКРИЛАМИДНОМ ГЕЛЕ (57) Изобретение относится к биохимии и иммунологии насекомых. Целью является улучшение качества разделения белковых фракций гемолимфы насекомых. Для этого в качестве реагента, предотвращающего меланизацию, используют натрий серноватистокислый пятиводный, причем его концентрация в смеси с гемолимфой составляет 0,01 — 0,04 М, Применение данного реагента увеличивает число разделяемых белковых фракций и улучшает качество их разделения, 1 табл. исследованию в полиакриламидном геле по общепринятым методикам сразу же или по-. сле длительного хранения в холодильнике при +4 С до -17 С, например 75 и больше дней.
В таблице приведены результаты исследований старших гусениц большой огне— вки.
Самые высокие результаты достигают, когда содержание натрия серноватистокислого пятиводного в гемолимфе составляет от 0,01 до 0,04 М, так как фракции белков выражены четко, а общее их число достигает
16.
Берут гемолимфу насекомых по прототипу (таблица 1. п.б), к ней добавляют несколько кристаллов фенилтиомочевины, перемешивают стеклянной палочкой, так как она труднорастворима, и так обработанную гемолиму подвергают электрофоретическому исследованию. Получают в среднем
12 недостаточно четко разделенных белковых фракций.
1620070
Берут нативную гемолимфу насекомых (таблица 1, n,7) и подвергают ее электрофоретическому исследованию белков. Получают в среднем 12 довольно четко выраженных белковых фракций.
Формула изобретения
Способ электрофоретического разделения белков гемолимфы насекомых в полиакриламидном геле, включающий добавление
5 в гемолимфу реагентов для предотвращения механизации, отличающийся тем. что, с целью улучшения качества разделения белковых фракций, в качестве реагента используют натрий серноватистокислый пя10 тиводный, причем его концентрация в смеси с гемалимфой составляет от 0,01 до 0,04 M.
Таким образом, химические добавки натрия серноватистокислого пятиводного в гемолимфу насекомых улучшают качество, электрофоретического разделения белковых фракций гемолимфы.
Варианты опытов
Качество разделения фракций
Количество белковых ак ий
Фракции разделены удовлетворительно
Гемолимфа.содержащая
0,005 M натрия серноватистокислого пятиводного
Гемолимфа,содержащая
0,01 М натрия серноввтистокислОГО пятиводнОГО
Гемолимфа,содержащая
0,02 М натрия серноватистокислОГО пятиводнОГО
Гемолимфа,содержащая
0„04 M натрия серноватистокислого пятиводного
Гемолимфа,содержащая
0,05 М натрия серноватисто. кислОГО пятиводнОГО
Гемолимфа,содержащая фе— нилтиомочевину по прототипу
Нативная гемолимфа (бвэ хим. обавок
Фракции разделены четко
14 — 15
Фракции разделены четко
Фракции разделены менее четко
Фракции разделены довольно четко
Составитель А.Сафонкин
Техред М.Моргентал Корректор Т.Малец
Редактор Т,Парфенова
Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул.Гагарина, 101
Заказ 4201 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
