Камера для формирования электрофоретических гелей
Изобретение относится к лабораторной технике, а именно к устройствам для формирования гелей, предназначенных для разделения макромолекул методом электрофореза, и может быть использовано в биохимических, биофизических и химических исследованиях. С целью обеспечения возможности изменения количества и толщины формируемых пластин гелей и формирования гелей цилиндрической формы в камере для формирования электрофоретических гелей, включающей корпус, переднюю стенку и эластичную манжету, передняя стенка установлена с возможностью горизонтального перемещения внутри корпуса, по периметру передней стенки выполнено углубление, а эластичная манжета размещена в пазе, образованном углублением передней стенки и внутренней поверхностью корпуса. 4 ил.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (19) (И) (Р1) С О1 И 27/26
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ, ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
1 (21) 4432801/10-26 (22) 27.05.88 (46) 07.12.90. Бюл. К- 45 (71) Институт почвоведения и фотосинтеза АН СССР (72) А. П. Чекуров (53) 543.545(088.8) (56) LKB Electrophoresis. stslzg s, 1987, с. 22. . (54) КАМЕРА ДЛЯ ФОРМИРОВАНИЯ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКИХ ГЕЛЕЙ (57) Изобретение относится к лабораторной технике, а именно к устройствам для формирования гелей, предназначенных для разделения макромолекул методом электрофореза, и может быть
Изобретение относится к лабораторной технике, а именно к устройствам для формирования гелей, предназначенных для разделения макромолекул методом электрофореза, и может быть использовано в биохимических, биофизических и химических исследованиях.
Целью изобретения является обеспечение возможности изменения количест, ва и толщины формируемых пластин гелей и формирования гелей цилиндрической формы.
На фиг. 1 изображено устройство, общий вид; на фиг. 2 — устройство с рядом гелиевых трубок; на фиг. 3— корпус устройства; на фиг. 4 — подвижные стенки с манжетой.
Камера для формирования электрофо ретических гелей, состоит из корпуса использовано в биохимических, биофизических и химических исследованиях.
С целью обеспечения возможности изменения количества и толщины формируемых пластин гелей и формирования гелей цилиндрической формы в камере для формирования электрофоретических гелей, включающей корпус, переднюю стенку и эластичную манжету, передняя стенка установлена с .возможностью горизонтального перемещения внутри корпуса, по периметру передней стенки выполнено углубление, а эластичная манжета размещена в лазе, образованном углублении передней стенки и внутренней поверхностью корпуса. 4 ил.
1, передней стенки 2 и эластичной манжеты 3. В рабочем состоянии передняя стенка 2 располагается внутри корпуса 1 параллельно его задней ) стенке, ограничивая внутреннее прост1 ранство камеры в форме прямоугольной призмы со сглаженными нижними боковыми ребрами. Эластичная манжета 3 уп лотняет и герметизирует внутреннее пространство камеры, заполненное гелевыми кассетами 4 или трубками 5.
Корпус 1 имеет заднюю стенку с отверстием 6 или патрубком в нижней части, две боковые стенки и основание.
Внутренняя поверхность боковых стенок переходит в поверхность основания без изломов.
Установленная с возможностью горизонтального перемещения передняя
1612248 с генка 2 выполнена в виде прямоугольн ;:й пластины. Нижняя и боковые грани пластины сглажены. По периметру передней стенки 2 выполнено углубление
7 под эластичную манжету 3.
Подготовку устройства к работе начинают с заполнения камеры гелевыми кассетами или трубками, Для этого корпус 1 укладывают задней стенкой на горизонтальную поверхность.
Гелевые кассеты для электрофореза в вертикальной пластине геля, состоящйе из двух параллельных пластин с боковыми прокладками между ними, со б «рают непосредственно в корпусе либ предварительно. В последнем случае в одящие в кассету элементы скрепляют м жду собой подходящим образом, нап имер липкой лентой. Далее кассеты
4;последоватечьно укладывают в корпус
1, начиная от задней стенки, проклад вая между ними листы материала, с особствующего правильному разъедин нию кассет после формирования геля. 25
П и этом кассеты 4.опираются нижними у лами на внутреннюю поверхность. кори са 1 в месте перехода боковых стен к в основание, а их нижний край пар аллеле«« основанию корпуса 1. Образу- О юЦаяся щель между кассетами 4 и основанием рамы 1 служит для равномерно;,го заполнения кассет гелевым раствором и однородного распределения графента пористости геля. Уложенные в корпус 1 кассеты 4 с прокладками меж у ними образуют стопку. Число и тол на кассет в стопке может изменяться в широких пределах, достигая макс ««мальной толщины стопки, выбранной 4О при конструировании корпуса 1.
Трубки 5 для формирования цилиндрических гелей укладывают в раму 1 в один или несколько полных слоев параллельно боковым сте««кам. Диаметр йходящих в слой трубок должен быть одинаков. Если необходимое для формирования 1исло трубок меньше полного с лоя, нижние концы части трубок в слое герметизируют. При этом в завис,имости от способа заполнения герме- тизируют лишние трубки или трубки, предназначенные под гель. Между нижНими концами трубок 5 и основанием рамы 1 оставляют небольшой зазор, верхние концы трубок выравнивают.
Далее на стопку кассет 4 или трубок
5> установленных в корпусе 1, уклады« ают переднюю стенку 2. Переднюю стенку 2 прижимают к стопке и основанию рамы 1 так, что между углублением 7 стенки 2 и внутренней поверхностью боковых стенок и основания корпуса 1 образуется паз. Уплотнение и герметизацию камеры производят эластичной манжетой 3, запрессованной ее в образованный паз. После этого камеру устанавливают в вертикальное положение и заполняют гелевым раствором. Заполнение производят сверху через одну из кассет 4 или трубок 5 или снизу через отверстие 6 в задней стенке рамы
Последний способ предпочтительнее при формировании градиента пористости и сверхтонких пластин геля. Заполнение гелем установленных в камере трубок может быть произведено одновременно или последовательно каждой отдельной трубкой с загерметизированным концом.
В последнем случае камера выполняет роль вертикальной подставки.
После формирования геля камеру разбивают, выступающий за пределы формы гель обрезают, кассеты и трубки с гелем разъединяют и используют для
4 электрофореза либо хранят в подходящих условиях.
Известный отливочный стенд для отливки пластин геля для вертикального электрофореза представляет собой камеру, состоящую из корпуса, съемной передней стенки, и манжеты которые ограничивают внутреннее пространство в форме прямоугольной призмы. Корпус состоит из задней стенки, двух боковых стенок и основания. Передняя стенка представлена прямоугольной пластиной, размеры которой соответствуют размерам внешней, передней поверхности корпуса. Гелевые кассеты с листами провощенной бумаги между ними собирают в вертикальную стопку внутри корпуса до ее заполнения, накладывают переднюю стенку и уплотняют камеру винтовымИ зажимами.
Герметизация внутреннего пространства камеры достигается в момент уплотнения эа счет эластичной манжеты, расположенной в U-образном лазе на передней поверхности корпуса. Заполнение камеры гелевым раствором производят сверху через одну из кассет при формировании однородных гелей. При формировании гелей с градиентом пористости заполнение производят снизу через патрубок в нижней части передней стенки и паз в основании корпуса. Ука-16! 2248 6 занное устройство предназначено для содержащего 5Х акриламида, 0,2Х меформирования определенного числа пла. тиленбисакриламида, 0,375 М трис-НС1, стин геля заданной толщины, Недо- Р" 8>9, O,ОЗХ тетраметиленэтилендистатком предлагаемого устройства яв — амина и 0,05Х персульфата аммония. ляется невозможность варьировать чис- На слой гелевого раствора высотой ло и толщину формируемых пластин в 80 мм наслаивают воду. После полимешироких пределах по желанию экспери- Ризации разделяющего геля воду удаментатора. Кроме того, устройство не ляют, в трубки вносят гелевый растпозволяет формировать цилиндрические 10 вор, содержащий 2,5/ акриламида, 0,626Х метиленбисакриламида, 0,62 M
Примером практического применения трис-НС1, РН 6,9, 0,06Х тетраметиленизобретения служит использование ка- этилендиамина и 0,06/ персульфата меры для формирования электрофорети- аммония и полимеризуют слой концентческих гелеи .под кассеты поперечным 15 рирующего геля высотой 5-6 мм. После размером 88х58 мм и трубки длиной 90- окончания полимеризации камеру разби100 мм. рают, трубки разъединяют и очищают от
Камера изготовлена из оргстекла и геля, в том числе обрезают слой геля, имеет габариты 100 (высота) х 76 (ши- выступающий снизу. Оставшееся незарина) х 50 мм (толщина). Внутреннее 20 полненным гелем пространство у верхпространство корпуса имеет размеры него конца трубок используют для вне9 х58,5х39 мм, нижние боковые. грани
90х5 сения образца перед электрофорезом. переходят в основание по радиусу 5 мм. Пример 2. Формирование
Подвижная передняя стенка со сглажен- пластин геля толщиной 0,6 мм с градиными нижней и боковыми гранями разме- 25 ентом пористости акриламида 10-20Х ром 90х58х9 мм имеет углубление по пе- для диск-электрофореза мембранных . риметру внешней поверхности глубиной белков хлоропластов с додецилсульфа2 и шириной 1,5 мм. В качестве зла- том натрия. стичнои манжеты использована силико- Корпус укладывают задней стенкой новая трубка диаметром 2,5 мм. Макси- 30 вниз на горизонтальную поверхность. мальная глубина внутреннего простран- Кассеты, состоящие из стеклянных пластва камеры составляет 30 мм и выбра- стин 88х58х1 2 мм и боковых проклана из расчета формирования 10 пластин док 90х4х0,6 мм, сббирают непосредстгеля тол иной О 6 мм щ,6 в кассетах тол- венно в корпусе, укладывая между ними листы провощенной бумаги. Па стоп щиной 3 мм каждая.
П име 1 Ф р р 1. Формирование 5/o ку пластин накладывают переднюю стен35 полиакриламидного геля в шести т бр д ля в шести труб ку и герметизируют камеру силиконовой ках для диск-электрофореза водораст - трубкой. Камеру устанавливают строго творимых белков хлоропластов. вертикально и заполняют снизу раствоВ корпус укладывают девять трубок 40 ром с градиентом концентрации акрилвысотой 90 мм вн т енн у ренним диаметром амида, Для этого в отверстие в ниж4 мм и наружным 6 мм. Нижние концы ней части задней стенки вставляют трех трубок предварительно герметизи- штуцер с прикрепленным к нему пластируют. На слой трубок накладывают пе- . ковым капилляром с диаметром отверреднюю стенку, после чего верхние стия около I мм. концы трубок выравнивают так, что Камеру через капилляр заполняют нижние концы выше основания корпуса водой до формирования слоя 2-3 мм на 1-2 мм. Переднюю стенку плотно над основанием. Затем капилляр подприжимают к слою трубок и основанию соединяют к установленной выше камекорпуса и в образующийся паз между 0 ры системе из двух сообщающихся соуглублением передней стенки и внут- судов, содержащих соответственно но реннеи поверхностью рамы пальцами 6 мл гелевого раствора 10/ акриламивпрессовывают силиконовую трубку. да и 20Х акриламида и 20Х сахарозы, Камеру устанавливают в вертикальное а также 0,2/ метиленбисакриламида, положение, отверстие в нижней части 0 75 M трис-НС1 Н 8 9 О 1/ задней стенки затыкают пробкой. цилсульфата натрия, 0,3/ тетраметилЧерез верхний конец одной из трубок в камеру заливают около 10 мл аммония. Заполнение камеры ведут из гелевого раствора разделяющего геля, сосуда с IОХ-ныл акрилампдсм при по1612248 стоянном перемешивании формируемого и нем градиента. После заполнения камеры гелевым раствором с градиентом концентрации и плотности в камеру через капилляр вводят еще 4-5 мл раствора 20Х-ного акриламида с саха17озой или другого раствора большой
rлотности для заполнения пространста между нижним краем кассет и дном амеры.
После полимеризации разделяющего еля высотой около 80 мм с градиен"ом пористости, камеру разбирают, ынимают стопку кассет и обрезают ишний гель вдоль нижнего края. Касеты с гелем можно хранить при 4 С в о ечение месяца. Перед электрофорезом ассету отделяют от стопки по слою умаги. Верхнюю часть кассеты,заполяют раствором концентрирующего геля, одержащего 6Х акриламида, 0,08Х ме иленбисакриламида, 0,125 М трис-НС1, ° °
Н 6,9, 0,1 додецилсульфата натрия,,04Х тетраметилэтилендиамина и 0,05Х г1ерсульфата аммония. Для этого кассеч1у вновь устанавливают в камере или
На другой вертикальной подставке. В
Концентрирующем геле формируют карма.%
Ны, вставляя в кассету гребенку, имек7щую восемь зубчиков с размерами 5х 3х0,6 мм. По окончании полимеризаtjve концентрирующего геля, кассету
Вставляют в аппарат для электрофореза образцы вносят в карманы и проводят электрофорез по существующей методике.
Таким образом, предлагаемая камеа для формирования электрофоретичесх гелей позволяет формировать пластинчатые и цилиндрические гели для вертикального электрофореза. Число и толщина формируемых гелей может измеНяться в широких пределах и ограничена сверху максимальной глубиной камеры, выбранной при конструировании.
Камера может быть использована
5 для формирования гелей другой конфигурации или для других видов электрофореза, если она дополнительно укомплектована подходящими для этих целей гелевыми кассетами, внешние поверхности которых или формуемой ими стоп= ки параллельны.
По изобретению изготовлены два опытных образца. Одна из камер для формирования гелей рассчитана на использование гелевых кассет с поперечным размером 88х58 мм и трубок длиной 90-100 мм, другая — на использование кассет размером 1 50х238 мм и трубок длиной 150-160 мм. Максимальная вместимость камер составляет соответственно 70 кассет толщиной 3 мм каждая под пластины геля толщиной
0,6 и 10 кассет толщиной 5,1 мм под пластины геля 1,5 мм. Обе камеры ус25 пешно используются в экспериментальной работе.
Формула изобретения
30 Камера для фбрмирования электрофоретических гелей, включающая корпус, и эластичную манжету, о т л и ч а— ю щ а я с я тем, что, с целью обеспечения возможности изменения количеств ва толщины формируемых пластин гелей и формирования гелей цилиндрической формы, передняя стенка установлена с возможностью горизонтального переме«щения внутри корпуса, по периметру передней стенки выполнено- углубление, а эластичная манжета размещена в пазу, образованном углублением передней стенки и внутренней поверхностью корпуса.
1612248
Составитель 0 ° Зобнин
Ре едактор М. Бланар Техред Л.Сердюкова Корректор М. Пожо
Заказ 3828
Тираж 509 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открьгтиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101
