Способ определения вирулентности стафилококков

 

Изобретение относится к микробиологии. Целью изобретения является повышение чувствительности и специфичности способа определения вирулентности стафилококков по их фибронектинсвязывающей способности. Для этого микроорганизмы инкубируют в растворе, содержащем 0,5-10 мкг/мл фибронектина, 30 мин. Затем отмывают клетки 100-500-кратным объемом физраствора. Добавляют к суспензии клеток антифибронектиновый кодиагностикум в соотношении 1:1. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (SI)S С 12 g 1/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

K А BTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУД APCTBEHHbiA НОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4665449/30-.13 (22) 22.02.89 (46) 07.11.90. Бюл. № 41 (71) 1-й Московский медицинский институт им. И.И.Сеченова (72) Е.В.Сокуренко, Э.Г.Кравцов и И.Б.Богин (53) 576.097.21:576.851.252 (088.8) (56) Espersen, 0lerrnnensen//Acta patol. microbiol. sean/,,„,P.3 °, 1979,. № 79, р. 63-82. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУЛЕНТНОСТИ

СТАФИЛОКОККОВ

Изобретение относится к биологии и медицине, преимущественно к микробиологии, и может быть использовано для определения вирулентности по их фибронектинсвязывающей способности (ФНСС) .

Целью изобретения является повышение чувствительности и специфичности способа определения вирулентности по их ФНСС.

Пример. Эталонный штамм Sta-.

phylococcus aureus V-8 выращивают на скошенном мясопептонном агаре при

37 С в течение 18 ч. Культуру смывают 2 мл физиологического раствора и дважды в нем же отлывают. Готовят суспензию оптической плотности 10 ед.

Человеческий плазменный фибронектин (ФН), гипериммунизацию ФНом кролика и кодиагностикум на основе штамма S aureus Cowan I получают и выполняют по известным методикам. Конечная оптическая плотность антиФН

„„SU, 1604853 А 1

2 (57) Изобретение относится к микробиологии. Целью изобретения является повышение чувствительности и специфичности способа определения вирулентности стафилококков по их фибронектинсвязывающей способности. Для этого микроорганизмы инкубируют в растворе, содержащем 0,5-10 мкг/мл фибронектина, 30 мин. Затем отмывают клетки 100-500-кратным объемом физраствора. Добавляют к суспензии клеток антифибронектиновый кодиагностикум в соотношении 1:1. 2 табл. кодиагностикума при этом составляет

10 ед., минимальная агглютинирующая активность в реакции коагглютинации с ФН 2 икг/л л.

1 мл раствора ФН в физиологическом растворе с содержанием ФН 5 мкг/мл объединяют с 0,2 мл бактериальной суспензии исследуемых микроорганизмов и инкубируют 30 ми на качалке.

Параллельно с опытом проводят инкубацию исследуемых микроорганизмов с физиологическим раствором без ФН в тех же соотношениях для постановки контроля. После инкубации суспензию стафилококков дважды отллывают .. в 2 мл физиологического раствора (примерно 400-кратный по отношению к осадку объем) и доводят до исходной концентрации. По 25 мкл опытной и контрольной. суспензий соединяют с

25 мкл антиФН кодиагностикума на стекле. При круговом покачивании в опытной суспензии через 30 с проис1604853

Таблица 1

Результаты, полученные с использованием

Сравниваемые параметры прототипа предлагаемого способа

Количество штаммов S.aureus обладающих

ФНСС, Х

Количество штаммов S.epidermiЙ1s обладающих

ФНСС, Х

Минимальная концентрация ФН, мкг/мл

30

100

0,5 ходит агглютинация, в контроле в течение 10 мин агглютинацию не наблю- . дают. Вывод: штамм S.aureus V-8 вирулентен, так как обладает ФН-связывающей способностью.

Данные сравнительного изучения

ФНСС прототипом и предлагаемым способом приведены в табл. 1.

Как видно из табл. 1 и 2, более высокая чувствительность способа обеспечивает более полное выявление

ФН-связывающих (т.е. вирулентных) стафилококков в сравнении со спосо- бом-прототипом. 15

При этом использование концентрации ФН ниже 0,5 мкг/мл не позволяет достигнуть насыщение ФН-связывающих лигандов микроорганизмов, что снижает чувствительность метода. В кон- 20 центрации свыше 10 мкг/мл ФН вызывает спонтанную агглютинацию исследуемой культуры или антифибронектинового.кодиагностикума (табл. 2).

Данные определения вирулентности . 25 микроорганизмов по их ФНСС приведены в табл. 2.

Таким образом, применение в изобретении способности ФН связываться с микроорганизмами в отличие от известного .способа, где необходимо наличие агглютинирующей способности ФН, позволяет использовать. концентрации

ФН в 10-200 раз ниже, чем в извест ном способе.

Формула изобре тения

Способ определения вирулентности стафилококков, включающий внесение фибронектина в суспензию исследуемых микроорганизмов, инкубацню и оценку вирулентности по образованию агглю- . тинатов, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и специфичности способа, в исследуемые микроорганизмы вносят фибронектин в количестве 0,5-10 мкг/мл, инкубацию проводят в течение 2030 мин, отмывают клетки 100-500 кратным объемом физиологического раствора и к полученной суспензии клеток добавляют антифибронектиновый кодиагностикум в соотношении 1:1.

1604853

Таблица 2

Примечания

Способ определения связываоличество .выявленных ибронектинсвязывающих таммов вида ния микроорга" низмов с Ьибронектином. aur eus S. epidermidis

16

11

16

16

1

6

Аутоагглютинация 6 штаммов

S.aureus

12

16

16

1

6

6

16

16

Аутоагглютинация кодиагностикума

Редактор A.Øàíäoð

Заказ 3435 Тираж 486 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета ло изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãoðoä, ул. Гагарина,101

Прототип

Предлагаемый (средние параметры)

При концентрации фибронектина, мкг/мл

0,3

0,5 (мин)

10 (макс) .

При времени инкубации, мин

20 (мин)

30 (макс)

При кратности отмывки

100 (мин)

500 (макс)

1000

Составитель А. Горбатов

Техред JI,ÎëèéíûK Корректор H.Ýðäåéè