Способ дифференциации эпидемических и неэпидемических холерных вибрионов эльтор, несущих гомоиммунные умеренные фаги ш гетероиммунной категории

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при лабораторной диагностике холеры. Цель изобретения - упрощение способа. Культуру холерного вибриона выращивают в питательной среде, фильтруют и фильтрат, содержащий фаг, используют в качестве исследуемого материала. В качестве тест-системы рестрикции-модификации применяют три штамма холерных вибрионов - КМ-20, КМ-21, КМ-22. Готовят серии разведений фильтрата и инкубируют их с каждым тест-штаммом по методу Грациа. По чувствительности фага к тест-штаммам дифференцируют эпидемические и неэпидемические вибрионы эльтор. 2 табл.

СОКИ СОВЕТСКИХ

NM

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМЪ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР

1 (21 ) 4412758/30-13 (22) 15.04.88 (46) 23.04.90. Бюл. !! 15 (71 ) Всесоюзный научно-исследовательский противочумныйинститут "Микроб" (72) Н.М.Остроумова, И.В.Грачева, В.П.Мороз, Г.И.Коровкина, Т.П.Боровикова и Л.С.Зимарина (53) 576.8.093.!(088.8) (56) Ini ection Immunology, 1983, v. 42, У 1, р, 224-230. (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ЭПИДЕМИЧЕСКИХ И НЕЭПИДЕМИЧЕСКИХ XOJIEPHMX

ВИБРИОНОВ ЭЛЬТОР, НЕСУЩИХ ГОМОИММУННЫЕ УМЕРЕННЫЕ ФАГИ III ГЕТЕРОИММУННОЙ КАТЕГОРИИ (57) Изобретение относится к медиИзобретение относится к медицин-, ской микробиологии и может быть использовано при лабораторной диагностике холеры.

Цель изобретения - упрощение способа.

Для осуществления способа используют три штамма холерных вибрионов в качестве тест-системы рестрикциимодификации.

Штамм Vibrio cholerae 145 (P-1) депонирован под номером КМ-20 и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические и риз нак и.

Подвижные слегка изогнутые палочки длиной, 1,2 — 2,7 мкм, диаметр

0,2 — 0,4 мкм с одним полярно расположенным жгутиком. Спор и капсул не образует. Грамотрицательны.

„„SU„„1558987 А 1 (5l)5 С 12 q 1/02 // {С 12 q, 1/02,-

С 12. В 1:63) 2 цинской микробиологии и может быть использовано при лабораторной диагностике холерЫ. Цель иэобретения— упрощение способа. Культуру холерного вибриона выращивают в питательной среде, фильтруют и фильтрат, содержащий фаг, используют в качестве исследуемого материала. В качестве тест-системы рестрикции-моди" фикации применяют три штамма холерных вибрионов КМ-20, КМ-21, КМ-22.

Готовят серии разведений фильтрата и инкубируют их с каждым тест-штаммом по методу Грациа. По чувствительности фага к тест-штаммам дифференцируют эпидемические и неэциде-. мические вибрионы эльтор. 2 табл.

На плотных средах —.агар Мартена и агар Хоттингера, рН 7,6+ 0,2—

t образует полупрозрачные колонны с голубоватым оттенком, 3+ 0,5 мм в диаметре.

В жидких средах — бульон Мартена и бульон Хоттингера, 1Ж-ная пептонная вода, рН 7,8 + 0,2 — образует равномерную муть, тонкую пленку на поверхности среды.

Биохимические свойства.

Разлагает до кислоты без rasa маннозу, caxaposy глюкозу, маннит; не разлагает арабинозу. Окисляет и ферментирует глюкозу на среде ХьюЛейфсона. Образует декарбоксилазу лизина, не образует дигидролазу аргинина. Ферментирует крахмал и желатину.

Серологические свойства.

1558987

Агглютинируется 0-агглютинирующей холерной сывороткой и сывороткой

Инаба.

Штамм несет систему рестрикции-.

5 модификации (РМ), специфичную для эпидемических классических и эльтор холерных вибрионов.

Штамм Vibrio cholerae eltor 485 депонирован под номером КМ-21 и ха- 1п рактеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки.

Морфология штамма 485 не отличается от штамма 145 (Р"1). f5

На плотных средах образует полупрозрачные колонии с уплотненным центром 4+ 0,5 мм в диаметре.

Биохимические свойства.

Биохимическая активность штамма 20

485 аналогична штамму 1 45 (Р-1 ).

Серологические свойства.

Агглютинируется холерными агглютинирующими сыворотками 0 и Огава.

Штамм несет систему PM специ- 25 фичную для неэпидемических вибрионов эль то р.

Штамм V Ыт io chol er а е elt or 57 4 депонирован под номером KN-22 и характеризуется культурально-морфологи- 30 ческими признакмми, биохимическими и серологическими свойствами, аналогичными штамму 485.

Штамм 574 также несет систему РМ, специфичную для неэпидемических вибрионов эль тор, Пример. Исследуемый штамм выращивают в 100 мл любой жидкой питательной среды в течение 18-20 ч при 37 С. Полученную культуру фильтруют через бактериальные керамические фильтры (Ф-З, Ф-5) . Фильтрат титруют методом Грациа на каждом из трех штаммов тест-системы РМ вЂ” 1 45, 485 и 574. Для этого готовят последовательные десятикратные разведения фильтрата в любой питательной жидкой среде до О, 0,5мл цельного фильтрата и каждого его разведения (10 - 10 4) сое,циняют с 0,5 мл бульон- . ной культуры каждого тест-штамма, вы- ращенной при 37 С в течение 3 ч, доо бавляют в смесь 5,0 мл 0,77.-ного расплавленного агара Мартена рН 7, 6 и выливают на 2Х-ную пластинку того же arapa в чашке Петри. После застывания второго слоя чашки перевертывают, инкубируют 18-20 ч при 37 С и учитывают результаты. Подсчитывают количество колоний фага на газоне каждого из тест-штаммов. Если фаг формирует негативных колоний на газоне штамма V. cholerae 145 (P-1) в 10 - 10 раз больше, чем на э

V,, eltor 574, то исследуемый штамм относят к эпидемическим вибрионам.

Если фаг формирует негативных колоний на газоне V., eltor 485 в 10 10 .больше, чем на штамме V. chole6

rae !45, исследуемый штамм относят к неэпидемическим вибрионам эльтор.

Эффективность посева умеренных фагов холерных вибрионбЪ представлена в табл. 1 и 2.

Использование способа позволит упростить и повысить эффективность эпидемических расследований при обследовании - территорий, угрожаемых по холере.

Формула изобретения

Способ дифференциации эпидемических и неэпидемических холерных вибрионов эльтор, несущих гомоиммунные умеренные фаги III гетероиммунной категории, включающий накопление фаrа исследуемых холерных вибрионов и определение его рестрикционного профиля с помощью тест-системы рестрикции-модификации, о т л и ч а ю— шийся тем, что„ с целью упрощения способа, в качестве тест-системы используют тест"штаммы Vibrio

cholerae KN-?О, Vibrio cholerae

eltor КМ-21 и Vibrio cholerae eltor

КМ-22, рестрикционный профиль фага определяют путем инкубирования фильтрата культуральной жидкости исследуемых холерных вибрионов, содержащего фаг, b каждым тест-штаммом и по чувствительности фага к тест" шгаммам дифференцируют эпидемические и неэпидемические холерные вибрионы.

1 558987

Таблица 1

Фаг

V. cho1erae 145 V. eltor 485 V. eltor 574

10-С

Cl0 4 (1 О- (10 (10-4

<1О-

1О-

123

207

1 О-

768

i о-

158

1О-

194

776

l0-

l

1 О-

163

10-

45 ч

1О-

Т-95

Hp и м е ч а н и е. В скобках дана абсолютная концентрация, Та 6 лица 2

Индикаторный штамм тест-системы PM

Фаг

145 (P-1) V. eltor 485

V. cholerae"

V. eltor 574

10 (10 3

<1 0-4

222Н

10 3

255

1 0-3

10-

271

1 о-э

269

10-3

10 3

201

202 .

1021

10 3

291

10-3 (1 0-3

2004

231

102

76 в (1 0-3 (10

С10 3

12143

407

1 (2-10+)

1 (г 1О } (4.10з)

1 (8 10 )

1 (4 10 )

1 (2.10 )

1 (3 10З)

1 (2.10 )

1 (2 ° 103)

1 (1 ° 10 ) (2. 103) .1 (4-103)

1 (10 ) 1 (10 )

1 (2 104) (2.10 ) (1 о )

1 (104 )

1 (10 ) (8 1О ) (4.1о )

1- (1.10 )

1 (210)

l (7.1О )

1 (3.1О ) l 558967 в

Продолжение табл. 2

V. eltor 574

Фаг

Индикаторный штамм тест-системы РМ

145 (P-1) V. eltor 485

Ч. cholerae"

10 2

<1 О- (10 с10

1 (7 ° 10 ) 1 (10 ) 1 (10 ) 1 (7 10 ) (4.10 ) 1 (10 ) 1 (10 ) 1 (10 ) (10 Ф) 1 (3.10 ) 1 (2 10СЭ (2.1О 3) 1 (510 ) 1 (6 10 ) 1 (1 "10 ) 411

338

109

84

126

1О-

«О

il 0

<1 0»3

l0 9

10"

276 119

759

10

10-3

562

2/61 .

114/10

350

10-т

10 з

394

349

10-З

П р и м е ч а н и е. В скобках дана абсолютная концентрация.

Составитель Г, Смирнова

Техред M. Ходанич Корректор Н, Ренская

Редактор Е. Папп

Подписное

Тираж 487

Заказ 820

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская .наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101