Питательная среда для выращивания sтарнylососсus aureus 0- 15-продуцента l-токсина

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в производстве стафилококкового анатоксина. Цель изобретения - удешевление среды. Питательная среда содержит, г/л: панкреатический гидролизат казеина 12 - 17

липоевая кислота 0,0007 - 0,0013

хлорид тиамина 0,0007 - 0,0013

пантогенат кальция 0,0007 - 0,0013

рибофлавин 0,0007 - 0,0013

никотиновая кислота 0,0007 - 0,0013

гидрохлорид пиридоксина 0,0007 - 0,0013

фолиевая кислота 0,0007 - 0,0013

биотин 0,0000047 - 0,0000053

хлористый натрий 0,6965 - 1,2915

фосфорнокислый однозамещенный калий 1,15 - 1,25

глицерин 0,8 - 1,2

глицин 3,4 - 3,6

вода до 1 л. На данной среде штамм продуцирует α-токсин с минимальной гемалитической дозой 1/1050 - 1/1100, LH 0,18 - 0,16. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (51)5 С !2 N 1/20//(С 12 N !/20, С 12 К 1:445) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

H АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Изобретение касается биотехнологии и может быть использовано в производстве стафилококкового анатоксина.

Цель изобретения — удешевление средые

Пример 1, Готовят питатель-.— ную среду, содержащую компоненты в следующем количестве, г/л:

Панкреатический гидролизат каэеина 1290

Липоевая кислота О, 0007

Тиамина хлорид 0,0007

Пантогенат каль0,0007

0 0007

0,0000047

0,6965

1,5

0,8

3,4

До л т среду, 0,0007

0,0007

17,0

0,00! 3

О, 0013

0,00!3 ция

Рибофлавин

Никотиновая кис0,0007 лота

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4424194/30-13 (22) 08.04.88 (46) 07.04.90. Бюл. 9 13 (7!) Тбилисский научно-исследовательский институт вакцин,и сывороток (72) В,Н.Кикалишвили, Л.Ю.Пучковская,, Н.M.Àáóàøâèëè, Т.В.Биркадзе, М.Ж,JIoладзе, Г.P.Натрошвили, Б.В.Шошиашвили и Н.А,Матиашвили (53) 576.8.097.29(088.8) (56) Выгодчиков Т.В. Стафилококковые инфекции. — M.: Медицина, 1968, (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ STAPHYLOCOCCUS AUREUS 0-15 — ПРОДУЦЕНТА Ы-ТОКСИНА (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в производстве стафилококкового анаЪ

ÄÄSUÄÄ 1555357 А1

2 токсина. Цель изобретения — удешевление среды. Питательная среда содержит, г/л: панкреатический гидролиэат казеина 12-17 ; липоевая кислота0,0007-0,0013; хлорид тиамина 0,00070 0013 пантогенат кальция 0,00070,0013; рибофлавин 0,0007-0,00!3; ни" котиковая кислота 0,0007-0,0013; гидрохлорид -пиридоксина 0,0007-0,0013; фолиевая кислота 0,0007-Q,0013; биотин 0,0000047-0,0000053; хлористый натрий 0,6965-1s2915 фосфорнокислый однозамещенный калий ),15-1,25; глицерин 0,8-1,2; глицин 3,4-3,6; вода до л. На данной среде штамм продуцирует о(-токсин с минимальной гемалитической дозой 1/!050-1/1100, Zh @

0 18-0 16, 1 табл.

Пиридоксина гид. рохлорид

Фолиевая кислота

Биотин

Натрий хлористый

Калий фосфорнокислый однозамещенный

Глицерин

Глицин

Вода

Пример 2. Готовя содержащую г/л:

Панкреатический гидролиэат каэеина

Липоевая кислота

Тиамина хлорид

Пантогенат кальция

1555357

О, 0013

О, 0013

0,0013

0,0000053

1,2915

0 001

Рибофлавин

Никотиновая кислота 0,0013

Пиридоксина гидрохлорид

Фолиевая кислота

Биотин

Натрий хлористый

Калий фосфорнокислый однозамещенный 1,25

Вода До l л

Пример 3. Готовят среду, содержащую, г/л:

Панкреатический

15 гидролизат каэеина 1-5,0

Липоевая кислота 0i0О1 Тиамина хлорид О, 001

Патогенат кальция О, 001

Рибофлавин О, 001

Никотиновая кислота

Пиридоксина гидрохлорид 0,001

Фолиевая кислота 0,001 25

Биотин 0,000005

Натрий хлористый 0,993

Калий фосфорнокислый однозамещенный 1,2

Глицерин l О

Глицин 3,5

Вода Ло l л

Приготовленную среду разливают в соответствующую посуду и стерилизуют при 121 С в течение 15 мин.

Токсигенный штамм Staphylococcus

aureus, 0-15, пересеянный на скошенный агар, проверяют на чистоту путем просмотра мазков, окрашенных по Граму, и пассируют в пробирках не менее двух раз в бульоне, затем в каждую бутыль, содержащую 1,5 л бульона, засевают по 3«4 пробирки маточной бульонной культуры. В засеянные бутыли вставляют стерильный сифон и по- 45 мещают в термостат при 37 С на 5 сут, Ежедневно 2 раза в день в бутыли пропускают воздух в течение 5 мин и за« тем углекислоту в течение 0 5 мин.

На пятые сутки бутыли с культурой вынимают из термостата,.проверяют на чистоту путем просмотра мазков, окра-, шенных по Граму, Культуру смывают из

5-литровых бутылей в 15-литровые и пропускают культуру через сепаратор

Прозрачную жидкость, выходящую иэ сепаратора, собирают в 15-литровые бутыли, из каждой бутыли пробы берут

Формула и э о б р е т е н и я

Питательная среда для выращивания Staphylococcus aureus 0-15 — продуцента с -токсина, содержащая питательную основу, стимуляторы роста и воду, отличающаяся тем, что, с целью удешевления среды и стабилизации гемолитической активности, она дополнительно содержит натрий хлористый, калий фосфорнокислый,однозамещенный и глицерин, в качестве питательной основы она содержит панкреатический гидролизат каэеина, в качестве стимуляторов роста — липоевую кислоту, тиамина хлорид, пантогенат кальция, рибофлавин, никотиновую кислоту, пиридоксина гидрохлорид, фолие вую кислоту, биотин и глицин при следующем количественном соотношении компонентов, г/л:

Панкреатический гидролизат ка" зеина 12,0-17;О

Липоевая кис0,0007-0,0013

0,0007-0 0013 лота

Тиамина хлорид

Пантогенат кальция

Рибофлав ин

Никотинов ая кислота

Пиридоксина гидрохлорид

Фолневая кис лота

Биотин

Натрий хлористый

Калий фост... форнокислый одноэамещенный

Глицерин

Глицин

Вода

0,0007-0,0013

0 0007 0 0013

0,0007-0,0013

0,0007-0 0013

0,0007-0,0013

0,0000047-0,0000053

0„6965-1,2915

l 0-1,4

0,8-1,2

3,4-3,6

lIo l л для проверки Kb и гемолитического титра токсина, Сравнительные данные по гомолитической активности ol-токсина приведены в таблице.

Использование среды позволяет удешевить производство токсина sa счет снижения себестоимости среды, а также стабилизировать гемолитическую активность Н-токсина за счет стандартизации состава среды.

1555357

Активность токсина в I мл

Предлагаемая среда по примеру

ДНМ Zh

ДНМ Zh

1/1000

0,2

1/1100 0915

П р и м е ч а н и е, ДНМ - минимальная гемолитическая доза, Zh - лимит гемолитического токсина

Составитель Г.Смирнова

Редактор Н, Рогулич Техрвд А, Кравчук Корректор Т.Малеа, Заказ 538 Тирак:.494 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета па изобретениям и открытиям при ГЕНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Уагород, ул. Гагарина, 101

Казеиново-растительная, кислотно-гидролизная среДа (по известному способу) 1

ДНМ Zh

Л Т

1/1050 0,1& 1/1!00 0,1б